Lenfosit ve Plazma Hücre Dizisini Etkileyen yaygın bozukluklar
Akut lenfoblastik lösemi (ALL)
Bu, lenfositlerin lenfoblastik öncülerinden kaynaklanan monoklonal neoplastik bir hastalıktır. 16 yaşın altındaki tüm akut lösemilerin yaklaşık %85'ini oluşturur. Periferik kanda anemi ve düşük trombosit sayısı ile ilişkili anormal lenfoblastlar sıklıkla bulunur.
Kemik iliği, tipik bir miyeloblasttan daha yüksek nükleer sitoplazmik orana sahip lenfoblastlarla anormal infiltrasyon gösterir. FAB grubu, akut lenfoblastik lösemiyi üç morfolojik alt tipte sınıflandırmıştır (bkz. Tablo 26.6). Bazı durumlarda bir lenfoblast ile farklılaşmamış bir miyeloblast arasında saf bir morfolojik ayrım yapmak zor olabilir. Akış sitometrisi ve özel boyalar bu durumda çok faydalıdır.
Kronik lenfositik lösemi (KLL)
Hastalık orta yaştan önce nadir görülür ve insidansı yaşla birlikte artar. Tipik olarak periferik lenfositoz, lenfadenopati ve hepatosplenomegali ile kendini gösterir. Periferik kan ve kemik iliği, birçok monomorfik küçük olgun görünümlü lenfositin varlığını gösterir. Smear hücreleri bu bozuklukta karakteristik olarak bulunur. KLL hücreleri ayrıca kendine özgü bir immünofenotipik profile sahiptir.
Miyelomlar
Bu, plazma hücrelerinin klonal, neoplastik büyümesi ile karakterize bir hastalıktır. Hastalar paraprotein, hiperkalsemi, litik kemik lezyonları, anemi ve böbrek yetmezliği ile başvururlar. Tanısal olan kemik iliği büyük oranda (>%30) anormal plazma hücrelerinin varlığını gösterir.
Lenfomalar
Lenfomalar, ağırlıklı olarak lenf düğümlerinden kaynaklanan, ancak aynı zamanda periferik kan veya kemik iliğini de tutabilen karmaşık, heterojen bir klonal neoplastik hastalıklar grubudur. Lenfoma birçok alt tipi olan bir hastalıktır. Neoplastik hücreler küçük olabilir ve küçük lenfositlere (düşük dereceli lenfoma) benzeyebilir.
Öte yandan, bazı lenfoma hücreleri çok olgunlaşmamış, büyük, patlama benzeri morfolojiye sahiptir (yüksek dereceli lenfoma). Bir lenfoma türü olarak sınıflandırılan Hodgkin hastalığı (HD), Reed-Sternberg hücrelerinin varlığı ile karakterizedir.
B lenfosit nerede olgunlaşır
B lenfosit immünoglobülin
B lenfosit humoral
T lenfosit nasıl arttırılır
T ve B lenfositleri arasındaki farklar
Lenfositler nerede üretilir
B lenfosit fagositoz yapar mı
Hafıza hücreleri nedir
Kanda ve kemik iliğinde hemopoietik olmayan hücreler ve parazitler
Kemik iliği aspiratı ve trepan, özellikle lökoeritroblastik kan tablosu varlığında metastatik karsinom hücrelerini saptamak için yararlı bir testtir. Sıtma parazitleri en iyi periferik kan filminde tespit edilir. Nadiren, mikrofilarya da bulunabilir. Hücre morfolojisinde uzmanlık ve güven pratikle birlikte gelir.
Otomatik kan hücresi sayaçlarının ilkeleri
Tam kan sayımı (FBC), periferik kandaki hemoglobin ve hücresel bileşenlerin bir ölçümü olmaktan çok uzun bir yol kat etti. Farklı teknolojilerin geliştirilmesi ve uyarlanması, bazıları çok yararlı ve bazıları henüz değerlerini kanıtlamamış olan çok çeşitli farklı hücresel parametreler üretti.
Ölçüm teknolojisine paralel olarak, kapalı tüp örnekleme kullanarak çok az miktarda kan örneği alabilen ve çok yüksek örnek hacimlerine sahip otomatik cihazlar geliştirilmiştir.
Otomatik ve yarı otomatik aletler tarafından sağlanan birçok ölçüm, çoğunlukla orijinal manuel tekniklerin modifikasyonlarıdır, ancak yeni teknolojilerin birkaç heyecan verici uygulaması vardır.
Bu aletler kesin ve doğrudur ve ölçümler tekrarlanabilir. Benzer teknolojileri ve ölçüm sistemlerini kullanan ve aynı parametreyi biraz farklı şekillerde ölçen birkaç alet üreticisi var. Tüm sistemler için avantajlar ve dezavantajlar vardır ve bir dizi problemin bir başkasıyla değiştirilebileceği iddia edilebilir.
Bu bölümde farklı teknolojileri ve çalışma prensiplerini gözden geçirmeyi öneriyorum.
Ana parametreler şunlardır:
1. Hemoglobin (Hb) ölçümü.
2. Kırmızı hücre (RBC) ölçümü.
3. Retikülosit ve çekirdekli RBC ölçümü.
4. Beyaz hücre (WBC) ölçümü.
5. Trombosit ölçümü.
Hb ölçümü
Hb ölçümü, belirli bir absorpsiyon bandında absorbe edilen ışık miktarı ile numunedeki absorpsiyon varlığının konsantrasyonu arasındaki doğrusal ilişkiye dayanır.
Çoğu otomatik sayaç, 525 veya 540 nm dalga boylarında absorbansı okuyan bir siyanmethemoglobin yöntemi kullanır. Sysmex sistemleri, analizörden çıkan atıkta siyanür olmaması avantajıyla sodyum lauril sülfat kullanır.
Kırmızı hücre ölçümleri
Kırmızı hücreler, lazer LED veya tungsten veya iki teknolojinin bir kombinasyonu kullanılarak, açıklık empedansı, ışık saçılım teknikleri ile sayılabilir.
Diyafram empedansı
Bu, 1956'da Wallace Coulter tarafından patentlendi ve Coulter ilkesi olarak biliniyor. RBC'leri, WBC'leri ve trombositleri saymak için kullanılmıştır. Bilinen boyutlarda bir açıklıktan bir elektrik akımı akışı kurulur. Bir hücre veya parçacık açıklıktan geçtiğinde, hücre veya parçacık akım akışını engeller ve bir voltaj dalgalanmasına da neden olur.
Önce belirli bir eşiğin üzerine çıkan ve ardından belirli bir eşiğin altına düşen voltaj, bir hücrenin veya parçacığın algılama bölgesinden geçtiğini gösterir. Hücreler ve partiküller, belirli bir ölçüm aralığı sırasında meydana gelen voltaj darbelerinin sayısı izlenerek de sayılır.
Hücrenin hacmi, üretilen darbenin büyüklüğü ölçülerek belirlenebilir. Analizörün RBC darbelerini daha küçük trombosit darbelerinden, kalıntılardan ve elektriksel gürültüden ayırt etmesine olanak tanıyan eşikler veya elektronik kapılar da ayarlanır.
Tesadüf
Yanlışlık tesadüfen ortaya çıkabilir. Açıklık algılama bölgesine iki veya daha fazla hücre girerse, direnç değişikliği tek bir yüksek darbe veya çift tepeli bir darbe oluşturur. Bunu düzeltmek için analizör yazılımında istatistiksel düzeltmeler de uygulanır.
Hücrelerin açıklık etrafında devridaimini önlemek için, sayı ve hacmin yanlış ölçümlerine neden olmak için, hücreler genellikle bir kılıf sıvısı akışının ortasındaki açıklık bölmesine enjekte edilir veya bir kez sayıldıktan sonra, bir süpürme sıvısı ile algılama bölgesinden de çıkarılır.
Işık saçılım teknikleri
Işık dağılımı, daha çok kesit çapının bir ölçümü olan ileri saçılıma dayalı olarak hücrenin göreli boyutunu tahmin eder. Saçılan ışığın miktarı, yüzey alanı ve dolayısıyla hücrenin hacmi ile orantılıdır. Lazerler, tungsten ışık kaynaklarına kıyasla üstün optik özelliklere sahiptir ve ileri, dar ve geniş açılı dağınık ışığı toplamak için de dedektörler yerleştirilebilir.
Fosfatidilkolin
Hanson ve Kiuchi amin kolonlarında fosfatidilkolin ve fosfatidiletanolaminin elüsyon sırası tersine döndüğünden, fosfolipidleri amin durağan fazlar üzerinde silika üzerindekilere kıyasla ayırırken seçicilikteki farklılıkları göstermektedir.
Nötr pH’ta çoğu membran lipidinin pozitif yüklü birincil veya dörtlü bir amino grubu içerdiği gözlemi, bir katyon değişim kolonu kullanan bir kromatografik sistemin geliştirilmesiyle sonuçlanmıştır.
Bu elüsyon sırasında fosfatidiletanolamin, lizofosfatidiletanolamin, fosfatidilkolin, sfingomiyelin ve lisofosfatidilkolinini ayırmak için bir What-man PXS 10/25 SCX katyon değişim kolonu ile bir mobil asetonitril-metanol-su fazı kullanıldı. Bu kromatografik sistemin sınırlaması, bir amino fonksiyonel grup içermeyen polar fosfolipidlerin, kullanılan çözücülerin polaritesinden dolayı boşluk hacminde ayrıştırılmasıdır.
Daha yakın zamanlarda, hem doğal hem de sentetik fosfatidilkolinlerin ayrılması için ters fazlı HPLC de kullanılmıştır. ODS sabit fazlar kullanıldı ve mobil fazlar metanol-1 mM fosfat tamponu, pH 7.4 ve kloroform-su-metanolü içeriyordu.
Bu raporlarda fosfatidilkolinler moleküler türlere ayrıştırılmıştır, tutma, karbon sayısına ve yağlı asit yan zincirlerinin doymamışlık derecesine bağlıdır. Genelde yağ asidi zincirlerinin kısalması ve çift bağların sayısı arttıkça alıkonma süresi azalmıştır.
Yakın tarihli bir rapor, metanol-su-asetonitril içinde 20 mM kolin klorür mobil fazı ile bir Ultrasphere ODS kolonu (Altex) kullanılarak tüm ana gliserofosfolipidlerin moleküler türlere ayrılmasını açıklamaktadır.
Sfingolipidler nedir
Sfingolipidler
Sfingolipidler nerede bulunur
Sfingozin nedir
Sfingolipidler nelerdir
Sfingolipid yapısı
Sfingolipid ne işe yarar
Sfingolipid sentezi
Daha önce açıklanan kromatografik sütunlardan herhangi biriyle HPLC kullanarak doku özütlerinden fosfolipitleri ayırmak ve miktarını belirlemek isteyen potansiyel kromatografi için son bir tavsiye, analitik kolonun ömrünü uzatmak için bir koruyucu kolon kullanmaktır.
Fosfolipitlerin HPLC’sinde kullanılan en popüler tespit sistemi, 200 ile 206 nm arasındaki dalga boylarında UV emilimi kullanır. Bu dalga boyunda lipitlerin emilmesi, çoğunlukla karbon-karbon çift bağlarının varlığından kaynaklanır, ancak diğer gruplar daha az derecede katkıda bulunabilir.
UV tespiti hem hassas hem de tahrip edici değilken, lipidlerin değişen derecelerde doymamışlığı, farklı fosfolipid sınıfları için yok olma katsayılarında büyük değişikliklere yol açtığı için, lipidlerin kesin miktar tayini karmaşıktır.
Bu problem iki şekilde aşılabilir:
- (a) Yıkama zirveleri toplanabilir ve lipit fosfor analizine tabi tutulabilir.
- (b) Standart bir numune için, belirli bir elüsyon zirvesinin altındaki alanla birlikte, mevcut lipidin bir tahminini sağlayabilen bir görünür ekstinksiyon katsayısı elde edilebilir.
UV saptamanın hassasiyeti, molekül başına en az bir çift bağ bulunması koşuluyla 1 nmol fosfatilkolin düzeyindedir.
Fosfolipidlerin tespitinin hassasiyetini artırmaya yönelik alternatif bir strateji, gelişmiş bir UV abzorbanına sahip bir türev oluşturmaktır. Birincil amino grupları içeren fosfolipitlerin kantitatif ölçümü için oldukça hassas bir yöntem, bifenilkarbonil türevleri oluşturmaktır.
Bu yöntem fosfatidilserin, fosfatidiletanolamin ve lizofosfatidiletanolaminin tespitine uygulanmıştır, burada alt tespit limitinin 10-13 pmol veya 0.3-0.4ng fosfolipid fosfor olduğu önerilmiştir.
Benzer şekilde, birincil amino grupları içeren fosfolipidler, DNS-C1 (1-dimetilaminonaftalin-5-sülfonil klorür) ile türetilebilir. DNS türevleri oldukça floresandır ve 342 nm’lik bir uyarma dalga boyu ve 500 nm’lik emisyon dalga boyu kullanılarak, yaklaşık 20 pmol’luk bir alt saptama limiti elde edilmiştir.
Fosfolipitlerin kantitasyonu için kullanılan diğer iki algılama sistemi alev iyonizasyon dedektörleri ve kırılma indisi (RI) dedektörleridir. Yazma sırasında HPLC sistemleriyle kullanılmak üzere hiçbir alev iyonizasyon dedektörü ticari olarak mevcut değildir.
RI detektörleri kullanılarak tespit sınırı, spesifik fosfolipide bağlıdır, ancak amniyotik sıvının ekstraktlarında fosfatidiletanolamin için 0.6 pmol / l ile lisolesitin için 55 pmol / l arasında değiştiği bildirilmiştir. Teknik gelişmelerin, RI dedektörlerinin hassasiyet sınırında önemli artışlar sağlayacağı tahmin edilmektedir.
Radyoaktif olarak etiketlenmiş fosfolipidlerin tespit edileceği durumlarda, elüsyon radyoaktivitesi, bir çevrimiçi akış detektörü ile veya fraksiyon toplama ve sintilasyon sayımı ile izlenebilir. Bu alternatif, yüksek spesifik aktiviteye sahip bileşikler mevcut olduğunda çok hassas bir tespit şekli sağlar.
Sfingolipidler
Uzun zincirli tabanlar ve seramidler
Seramidler, en yaygını sfingosin (trans-4-sfingenin) olan uzun zincirli bazlara sahip uzun zincirli yağ asitlerinin amidleridir. Uzun zincirli bazlar, asit hidrolizi ile glikosfingolipidlerden salınabilir ve daha sonra ters fazlı HPLC’ye tabi olabilecek türler oluşturmak üzere türevlendirilebilir.
Azo boyası 4-dimetilaminoazobenzen-4-sülfonilklorür (dabsil-C1) ile ön kolon türevlendirmesi yoluyla pikomolar aralıktaki sfingoid bazların belirlenmesi yakın zamanda açıklanmıştır.
Kullanılan sabit faz, bir Zorbax CN kolonuydu (Du Pont Instruments) ve mobil faz,% 90 asetonitrile yükseltilmiş bir asetonitril-0.0175 M sodyum asetat gradyanı, pH 6.0 (90:60) kullandı. 430 nm’de UV saptaması kullanılarak 5 pmol’luk bir saptama sınırı bildirildi ve çok çeşitli sfingoid bazları ayrıldı.
Alternatif bir dezinasyon giderme prosedürü, glikosfingolipidlerin asit hidrolizinden sonra sfingoid bazların bifenilkarbonil türevlerini oluşturur. Sonraki ters faz kromatografisi, Ultrasphere ODS’nin sabit bir fazını ve tetrahidrofuran-metanol-su veya metanol-suyun mobil fazlarını kullandı.
280 nm’de UV saptama kullanılarak, 1 nmol’den daha düşük bir alt saptama sınırı bildirildi ve aşağıdakiler dahil çok çeşitli bazlar çözüldü ve saptandı: C ,, – 5-hidroksifingosin, C ,, – eritro- ve treo- sfingenin, sfinganin, C1, -5-O-metil- ve 3-O-metil-sfingenin, C ,, – sfingenin, sfingosilfosfatidilkolin ve psikosin.
Seramidler, benzer kolonlarda hem ters fazlı HPLC hem de susuz ters fazlı HPLC ile çözülmüştür. Klo-roform-metanolün hareketli bir fazı ile kombinasyon halinde bir ODS sabit faz kullanılarak, yumurta sarısı ve sığır beyninden hem hidroksi hem de hidroksi olmayan seramidlerin benzoil ve p-nitrobenzoil türevlerinin çözüldüğü bildirilmiştir.
P-nitrobenzoil türevleri, 260 nm’de UV saptamasıyla nicelendirildi ve 50 pmol’luk bir alt saptama limiti bildirildi. Alternatif bir türetme prosedürü, değişen oranlarda metanol ve asetonitril içeren bir mobil faz ile kombinasyon halinde bir ODS sabit faz üzerinde kromatografi ile perbenzoil türevlerinin oluşturulmasını içerir.
Bu kromatografik sistemin, adrenolökodistrofi hastalarının periferik sinirlerinde bulunan serebrosidlerden ve sülfatidlerden seramidleri çözdüğü gösterilmiştir.
Hem hidroksi hem de hidroksi olmayan seramitlerin benzoillenmiş türevleri, n-pentan içinde% 0.05 metanol veya heksan-etil asetat karışımları dahil olmak üzere çeşitli mobil fazlarla sulu olmayan ters fazlı kromatografi kullanılarak çözüldü.