Blog

İkinci enzim-konjuge antikorun yakalanan proteine ​​bağlanmasına izin vermek için plaka tekrar inkübe edilir. Plaka daha fazla yıkanır ve kuyucuklara konjuge edici enzimin substratı eklenir. Substrat çözünür, renkli bir reaksiyon ürünü üretir. Bağlanan enzimle konjuge antikor miktarı, birincil antikor tarafından yakalanan protein miktarıyla orantılı olacağından, enzim reaksiyon ürününün miktarının orijinal numunedeki protein konsantrasyonuyla orantılı olacağı sonucu çıkar. Reaksiyon ürününün miktarı, ışığı reaksiyon ürünü tarafından absorbe edilen bir dalga boyunda her bir oyuktan geçiren bir ELISA plaka okuyucusu kullanılarak ölçülür ve niceleme için sonuçlar, referans çözeltilerle elde edilenlerden enterpolasyona tabi tutulur. Başka bir ELISA türü rekabetçidir. Şekil 45.8c'de bir örnek gösterilmektedir. Bu, spesifik antikorların tespiti için bir rekabet ELISA'sını gösterir. Kuyucuklar, ilgilenilen antikor molekülü tarafından tanınacak olan antijen ile kaplanır. Hasta numuneleri, deney hayvanlarında yetiştirilen antikor molekülleri ile birlikte, test edilen antikor tarafından tanınanla aynı antijene özgüllük ile kuyulara eklenir. Bu nedenle antijene bağlanma için rekabet olacaktır. Hastanın numunesindeki antikor molekülleri ne kadar fazlaysa, konjuge antikorların bağlanması o kadar az olacaktır. Bir antijenin saptanması veya ölçülmesi için rekabetçi bir ELISA'nın mantığını gösterir. Bu durumda, kuyucuklar ilgili antijen ile kaplanır. Hastanın numunesi, antijene enzimle konjuge bir antikor ile önceden inkübe edilir veya onunla birlikte eklenir. Numunedeki herhangi bir antijen, antikor üzerindeki antijen bağlama bölgelerini işgal edecek ve kuyuyu kaplayan antijene bağlanmasını azaltacaktır. Bu temel ELISA stilleri üzerinde birçok permütasyon vardır ve bunlardan bazıları bu bölümün sonundaki daha fazla okuma listesinde açıklanmıştır. Sonuç Rutin immünoloji laboratuvarları, protein analizi için aralarından seçim yapabilecekleri bir dizi yönteme sahiptir. Kullanılan yöntemler, numunelerin doğası, ölçülen proteinlerin kimlikleri ve numunelerdeki konsantrasyonları gibi hususlara göre belirlenecektir. Ayrıca, rutin olarak işlenen numunelerin sayısı, otomatik sistemlerin kullanılması gerekip gerekmediğini belirleyecektir. Günümüzde kullanılan yöntemlerin çoğu, belirli proteinler tanımlanmaya ve ölçülmeye başladığından beri sadece ayrıntılı olarak değişti ve bunlardan bazıları muhtemelen biz gittikten çok sonra kullanılmaya devam edecek. ELISA gibi diğerleri, daha yeni teknolojileri temsil eder ve radyo-immunoassay gibi teknik veya pratik dezavantajları olanların yerini alacaktır. Protein karakterizasyonunda, özellikle proteomik gibi veri analizi alanında birçok gelişme olmuştur. Rutin 'protein' laboratuvarları bunlardan veya diğer yeni yaklaşımlardan herhangi birini ne zaman ve nasıl benimserse, öğrenmek için beklememiz gerekecektir. yaşa göre c3-c4 değerleri Kompleman düşüklüğü yapan hastalıklar c3-c4 kompleman lupus C3 eksikliği Nedir Kompleman C3 normal değeri C3 düşüklüğü yapanlar Kompleman C4 normal değeri Ch50 Nedir Kompleman Tahlilleri Tamamlayıcı, çoğu konağın enfeksiyonu önlemesine veya enfeksiyonla savaşmasına yardımcı olan çeşitli işlevlere sahip bir serum proteinleri ve hücre reseptörleri sistemidir. Başlangıçta, spesifik antikorla birlikte belirli bakterileri parçalayabilen, ısıya duyarlı bir madde olarak tanımlanan, artık kompleman proteinlerinin iki ana yolla hareket ettiğini biliyoruz. Bu yolların aktivasyonu, mikroorganizmaların yüzeyinde güçlü bir opsoninin birikmesine ve ayrıca vazoaktif ve kemotaktik faktörlerin salınmasıyla inflamatuar bir yanıt üretilmesine yol açar. Diğer bileşenler, hücrelerin yüzeyine zarar verebilir ve yine başka bir bileşen grubu, bu yolların kendiliğinden ve potansiyel olarak zararlı aktivasyonunu kontrol eder. Kompleman protein seviyeleri birkaç yöntemle test edilebilir ve bileşenlerin çoğunun fonksiyonel aktivitesini belirlemek de mümkündür. Bu tahliller için gereken koşulları tam olarak anlamak için, meydana gelen süreci anlamak önemlidir. Buna göre, aşağıdaki bölümde tamamlayıcıya kısa bir genel bakış verilir ve daha ayrıntılı açıklamalar tek tek tahlil bölümlerinde bulunur. Klasik Yol Tanımlanacak ilk yola 'klasik yol' denir ve bu sistemdeki bileşenlerin önüne 'C' eklenir ve C1q, C1r, C1s, C4 ve C2'yi içerir (bileşenlerin tanımı sırasında verilen sayılar, aktivasyon sırası değil). Klasik yol, antijene bağlanan IgG veya IgM tarafından aktive edilebilir. C1q böyle bir antikora bağlanır ve bir kez bağlandığında C1r'yi aktive eder, bu da C1'leri aktive eder. Aktive C1s, substratı C4 olan ve parçalanan bir proteazdır. Bölünmüş C4 (C4b), C2'yi bağlayacak ve C1'ler daha sonra sınırlı proteoliz ile C2'yi aktive edecek (C2a'yı oluşturmak üzere). Aktif C4b2a kompleksi (klasik yol C3 konvertaz), yine sınırlı proteoliz ile C3'ü aktive eder. Klasik yolun aktivasyonu için kalsiyum ve magnezyum iyonlarının her ikisi de gereklidir. Aktive edilmiş C3 (C3b), yüzeylere kovalent olarak bağlanacak ve fagositlerdeki C3b reseptörleri için yüksek afiniteli bir ligand görevi görecektir. Bu yol, aynı zamanda, bazı bakterilerde karbonhidrata bağlanan, şekil olarak IgM'ye benzer bir akut faz proteini olan C-reaktif proteine ​​C1q bağlanmasıyla da aktive edilebilir. Mannan bağlayıcı lektin (MBL), C1q'nun kendisine benzeyen işlevsel olarak benzer bir proteindir ve MBL, C1r ve C1'lerle hemen hemen aynı özelliklere sahip olan MBL ile ilişkili serin proteaz 1 ve 2 (MASP1 ve MASP2) ile bir makromoleküler kompleks oluşturur. MBL–MASP kompleksi bu nedenle mannoz, N-asetilglukozamin, glukoz veya fukoz gibi uygun bir karbonhidrata bağlandığında C4 yoluyla klasik yolu aktive edebilir. Alternatif Yol C3, faktör B, faktör D ve uygundin, tamamlayıcı aktivasyonunun alternatif yolunun bileşenleridir. Bu yolun aktivasyonu, herhangi bir spesifik tetikleyici faktöre değil, sabit, düşük seviyede spontan aktivasyona bağlıdır. Dolaşan C3'ün küçük bir kısmı hidrolize olur ve bu C3 formu magnezyum iyonlarının varlığında faktör B'ye bağlanabilir. Bağlı faktör B, faktör D tarafından Ba ​​ve C3Bb'yi vermek üzere bölünür ve ikincisi, C3a ve C3b'yi oluşturmak üzere daha fazla C3'ü aktive edebilir. C3b yüzeylere bağlanabilir ve bir kez bağlandığında daha fazla faktör B bağlar. Mikroorganizmaların yüzeyine bağlanan C3b, H ve I faktörlerinin düzenleyici aktivitesine dirençlidir, bu nedenle aktivasyon tercih edilir. Dolaşımdaki C3'e bağlı faktör B'nin bölünmesiyle aynı şekilde, yüzeylerde C3b'ye bağlı faktör B, faktör D tarafından C3bBb'yi vermek üzere bölünür. Bu kompleks, uygundin tarafından stabilize edilir ve hem C3Bb hem de C3bBbP, daha fazla C3 molekülünü parçalayabilir, böylece işlemi güçlendirebilir. C3dBbP kompleksinin başka bir işlevi, C5'e bağlanabilmesi ve onu aktive edebilmesidir.