Yeni bir ortam tedarikçisi seçiliyorsa veya büyük bir sözleşme yapılıyorsa, paralel olarak aşılanmış bir kontrol ortamı kullanılarak daha kapsamlı testler uygun olabilir. Küçük inokül kullanın ve teste bazı stresli organizmaları dahil edin.
Kültür ortamı kontrol testinde stresli organizmaların geri kazanımı giderek daha fazla araştırılmaktadır. Klinik mikrobiyolojik izolatlar, ısıtılmış / işlenmiş gıdalardan izole edilen organizmalar gibi sıklıkla stres altındadır. Çok stresli canlı ancak kültürlenemeyen (VNC) organizmalar aşırı bir stres biçimini temsil eder.
Stephens vd. (1997) laboratuvarda stresli Salmonella’yı kullandı ve bu organizmaların geri kazanımının farklı üreticilerden alınan aynı kültür ortamı formülasyonu arasında değiştiğini gösterdi. Bu çalışma, tek hücreli aşılama kullanıldığında, aynı besiyerinin farklı markaları arasında çok geniş bir gecikme süreleri dağılımı gösterdi ve bazı gecikme süreleri 20 saati aştı.
Geçmişte, besiyeri üreticileri, kültür ortamı gruplarını test etmek için klinik izolatlar ve standart NCTC / ATCC organizma suşlarının bir karışımını kullanıyordu. Endüstride klinik izolatların kullanımı durdurulmuştur ve yalnızca standart organizma türleri yaygın olarak kullanılmaktadır.
Bu organizmalar, uygun şekilde sulandırıldıklarında strese girmezler ve kültür ortamı yığınlarındaki eksiklikleri gizleyebilirler. Laboratuvarda yüksek veya düşük sıcaklığa maruz kalma nedeniyle vurgulanan standart suşların kullanımı giderek daha fazla araştırılmaktadır ve bunlar klinik izolatların kaybının yerini alabilir.
Kültür Medyasının Geleceği
Ucuz, basit ve çok yönlü olan Koch agar plakası, küçük inoküllerin çok güçlü bir amplifikatörüdür. Düzgün bir şekilde hazırlandığında, numunelerden beklenen ve pek çok şüphelenilmeyen organizmayı büyütür. Geleneksel mikrobiyolojinin yerini alacağı tahmin edilen modern teşhis cihazları pahalı, karmaşık ve çok özeldir. Geleneksel mikrobiyolojinin bu yüzyıla kadar devam etmesi muhtemeldir.
Kuşkusuz, metodolojide iyileştirmeler olacaktır, örn. büyümenin erken tespiti için konfokal lazer mikroskobu ile film teknolojisi ve spesifik enzim aktivitesi için yerleşik tanımlama belirteçleri kullanarak yarı otomatik etiketleme, aşılama ve sinyalleme. Büyümenin gecikme aşamasında hasarlı organizmalar daha iyi iyileşecektir.
Bu iyileştirilmiş kurtarma prosedürleri, bazı mevcut sterilizasyon kinetiği teorileri üzerinde şüphe uyandıracak ve “yaşayabilir ancak kültürlenemeyen organizmalar” ı çevreleyen bazı gizemleri çözecektir. “Ne büyümez, ne de var olmaz” şeklindeki eski bakteriyolojik aksiyom ortadan kalkacaktır.
Mikrobiyolojinin biyokimya veya hematolojiye benzer şekilde otomasyon tarafından devralınması pek olası değildir. Mikrobiyolojideki faaliyetlerin çoğu, kolonilerin veya mikroskop alanlarının görüntülerini mikrobiyoloğun kafasındaki veri bankasıyla eşleştirmekten oluşur. İnsan beyni bu konuda herhangi bir bilgisayardan inanılmaz derecede daha iyidir.
Mikrobiyoloji laboratuvarında bakterilerin tayini
Mikrobiyoloji deneyleri
Çevre Mikrobiyolojisi Laboratuvarı
Mikroorganizma tayini
Nefise ERDİNÇMER
Mikrobiyolojide izolasyon
Fekal koliform analizi
Bakteri Ölçüm Laboratuvarı
Quantal Mikrobiyoloji
Büyük mikrop popülasyonları taksonominin kurallarına uyar, ancak tek tek hücreler, mutasyon ve yerel ortamlara adaptasyonun neden olduğu belirsizlikler sergiler. Bu tür hücreler, bir sonraki seçilen popülasyonun atası olabilecek varyantlardır.
Mutasyonlar, bir enerji bariyerinin üzerinden tek bir kararlı konfigürasyondan farklı bir kararlı konfigürasyona itilen molekülleri içeren nicel süreçlerdir. Karmaşık kimyasal maddeler kuantum mekaniğinin yasalarına uyar ve bireysel mikrobiyal hücreler bilimi ‘kuantal mikrobiyoloji’ olarak adlandırılabilir.
Klasik fizik / kuantum mekaniği ile klasik mikrobiyoloji / kuantal mikrobiyoloji arasında bir analoji vardır. Şimdi tek tek hücreleri incelemek için bir sisteme ihtiyacımız var.
Bakterilerin Tanımlanması
Bakterileri hızlı ve doğru bir şekilde tanımlama yeteneği, uzmanlaşmak için laboratuar tezgahında uzun yıllara dayanan deneyim gerektiren bir beceridir. Bu bölümün amacı, tıbbi öneme sahip yaygın bakterilerin tanımlanmasında Birleşik Krallık klinik laboratuvarları tarafından benimsenen yaklaşımı açıklığa kavuşturmaktır. Okuyucunun süreç hakkında temel bir fikir edinmesi ve mükemmel ayrıntılı metinlere daha güvenle başvurması umulmaktadır.
Bakteriler, doğrudan hasta numunelerinde veya daha yaygın olarak kültür üzerinde organizmaların büyümesinin ardından tanımlanabilir. Ayrı ayrı ele alınsa da, bu iki yaklaşım birleştirilebilir.
Mikroskopi
Bakteriler, mikroskopi ve lekelerin kullanılmasıyla klinik numunelerde doğrudan görselleştirilebilir. Yararlı olmasına rağmen, bu kendi başına nadiren tam tanımlamaya izin verir. Gram boyama, günümüzde klinik bakteriyoloji laboratuvarlarında en yaygın olarak kullanılan farklı boyama prosedürüdür. Pek çok değişiklik var ama prensip aynı.
Mikroskop lamı üzerinde ısıyla sabitlenmiş bir bakteri preparasyonuna metil viyole solüsyonu ve ardından bir iyot solüsyonu uygulanır. Yıkamadan sonra preparat, kırmızı bir zıt boyanın (örn. Safranin) uygulanmasından önce birkaç saniye bir renk gidericiye (alkol veya aseton) maruz bırakılır. Gram-pozitif bakteriler alkol veya asetonla renklerinden arındırılmaz ve mor renkte boyanır.
Gram-negatif bakterilerin rengi giderilerek hücrelerin kırmızı zıt boyayı almasına izin verilir. Bu reaksiyon, Gram pozitif ve Gram negatif bakteriler arasındaki hücre duvarının yapısındaki farklılıklara bağlıdır. Bakterinin boyutu ve şekli de hesaba katılır, örn. yuvarlak (cocci), çubuklar (basil).
Bununla birlikte, Gram boyası ile kötü boyanan veya hiç boyanmayan birçok bakteri vardır, örn. Mycobacterium tuberculosis gibi mikobakteriler, Ziehl – Neelsen gibi “aside dayanıklılık” için lekeler gerektirir.
Bu lekeler, bazı bakterilerin ılık karbol fuksin solüsyonları ile boyandıktan sonra hidroklorik asit ve alkolün renk açma etkisine direnebildiği gerçeğine dayanır. Bu lekelerin modifikasyonları, diğer bakterileri, örn. Nocardia spp.
Geçmişte, Legionella gibi spesifik bakterileri tespit etmek için floresan antikor lekeleri kullanılıyordu, ancak düşük performans, günümüzde rutin bakteriyolojide kullanılmalarını engelliyor.
Antikor ve Antijen Tespiti
Bu testler, spiroketler ve zorunlu hücre içi patojenler Rickettsia, Coxella ve Chlamydia da dahil olmak üzere katı ortamda rutin olarak kültürlenmeyen bakteriler için faydalıdır. Bu cinslerin neden olduğu enfeksiyonlar genellikle serumda antikor tespiti (seroloji) veya Chlamydia genital enfeksiyonu durumunda antijen tespiti ile teşhis edilir.
Antijen tespiti, ciddi bakteriyel enfeksiyonların hızlı teşhisi için kullanılabilir, örn. menenjit vakalarında beyin omurilik sıvısındaki (BOS) bakteriyel antijenler lateks aglütinasyon kullanılarak tespit edilebilir.
Bir varyasyon, bir bakteriyel ürünün saptanmasıdır, örn. antibiyotikle ilişkili ishalin bir nedeni olan dışkıdaki Clostridium difficile toksinini tespit etmek için bir enzim immünolojik testinin kullanılmasıdır.