Kültür Ortamının Depolanması – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Paradoksal olarak, 1966’da, Columbia agar adı altında yeni bir tanımlanmamış kanlı agar besiyeri yayınlandı. Farklı protein kaynaklarından kasıtlı bir pepton karışımı içeriyordu, farklı enzimlerle hidrolize edildi, böylece mümkün olan en büyük [moleküler ağırlık (MW) 1⁄4 5000] ‘den tek amino asitlere (MW 1⁄4 100) kadar geniş bir peptit spektrumu oluşturdu.
Formülü 1 gr nişasta, 5 gr sodyum klorür ve 12 gr agar oluşturdu. Karmaşık, tanımlanmamış bir besiyeri olan Columbia agar, çok çeşitli güç üreyen patojenik organizmaların geri kazanılması için broth ve agar formlarında en yaygın kullanılan zenginleştirme besiyeri haline gelmiştir. Bu, bu tür medyayı sentetik veya tanımlanmış formülasyonlarla değiştirmek isteyenler için gerçekliğin umuda karşı bir zaferi gibi göründü.
Tanımlı ve tanımsız ortam ikilemi hala cevapsız kalmaktadır. Protein hidrolizatlarının ve büyüme faktörlerinin, zorluğa neden olma olasılığı en yüksek iki malzeme grubu olduğu görülmektedir. Görünüşe göre amino asit karışımları karmaşık bir peptit karışımının yerini alamaz.
Stresli veya doğal olarak acil organizmaların iyileşmesini sağlamak için çeşitli büyüme faktörlerinin geniş bir seçimine ihtiyaç duyulabilir. Columbia agar ile karşılaştırılabilir tanımlanmış bir besiyerinin maliyet-fayda esasına göre geliştirilmesi veya gerekçelendirilmesi olası değildir.
Büyüme Çevresel Faktörler
Temel büyüme besinlerinin varlığı, tek başına istenen organizmaların optimal büyümesini garanti etmez. Tüm kültür besiyerleri ışığa, ısıya ve havaya maruz kalırsa oksidasyona duyarlıdır; buna foto-, termo- ve kemo-oksidasyon denir. Bir zamanlar kemo-heterotrofik aerobik ve fakültatif anaerobik organizmaların oksidasyon süreçlerinden çok az etkilendiği ve sadece zorunlu anaerobların zarar gördüğü düşünülüyordu.
İyi korunan birkaç tür dışında hepsinin oksidasyon etkilerine karşı savunmasız olduğu artık açıktır. Yakalanan ekstra elektronlardan oluşan toksik oksijen radikalleri (süperoksit, single’lar, hidroksiller) nükleik asitlere ve enzimlere zarar verebilir. Organizmalar, bu toksik radikalleri nötralize edebilen koruyucu enzimler üreterek kendilerini korumaya çalışırlar. Katalaz, süperoksit dismutaz ve peroksidazlar örnektir.
Bazı amino asitler, toksik oksidanların etkili temizleyicileridir. Aynı amaçla kültür ortamına koruyucu ajanlar eklenebilir, örn. tam kan, odun kömürü, piruvat, indirgenmiş demir tuzları. Özellikle savunmasız olan organizmalar için bu ajanların dahil edilmesi gerekli olabilir, örn. Neisseria, Bordetella, Campylobacter, Legionella.
Tioglikolat ve sistein gibi sülfidril bileşikleri, toksik oksitleyici maddeleri nötralize edecek olan –SH grupları ile oksidasyon-indirgeme potansiyelini (Eh) azaltmak için anaerobik ortama eklenir. Bazı ortamlar, özellikle sistein, glikoz, fosfatlar ve bazı metaller içeren ortam olmak üzere, otoklavlamada oto-oksitlenir.
Kültür PASAJLAMA nedir
Tripsinizasyon
Hücre pasajlama nasıl yapılır
Hücre kültürü pdf
Bitki doku kültürü PDF
Hücre kültürü uygulamaları
Hücre kültürü kitap PDF
Hücre kültürü Nasıl yapılır
Su Aktivitesi (aw)
Mikroorganizmaların içinde büyüyebilecekleri “serbest” suya sahip olmaları gerekir ve bu özellikle agar plakaları için geçerlidir. Besin maddelerinin koloniye transferi ve ondan toksik atıkların akışı, agarda bulunan serbest suya bağlıdır. Su, proteinler veya polimerlerle o kadar sıkı bir şekilde “bağlanabilir” veya kompleks oluşturabilir ki, organizmalar onu kullanamaz. Buz, bağlı suyun bir biçimidir ve diğer biçimler genellikle “yarı buz” olarak tanımlanır.
Su aktivitesinin biyolojik aralığı 0,97 (1,00 saf sudur) ila 0,61 (kurutulmuş tuzlu balık yüzeyi) arasındadır. Sadece kserofilik küfler en düşük rakamda (yavaşça) büyüyebilir. Su aktivitesini düşürmek ve stafilokoklar veya küfler için seçici hale getirmek için ortama (sodyum klorür veya gliserin) solütler eklenmedikçe, sıvı ortam genellikle tüm organizmaların büyümesi için uygundur.
Yeni hazırlanmış agar plakalarında tatmin edici düzeyde serbest su bulunur, ancak depolamada buharlaşma, agar yüzeyinin su aktivitesini azaltır. Aşırı kurutulmuş veya fazla uzun süre saklanmış agar plakları inhibe edici hale gelir, küçük koloniler gösterir ve “stresli” inokülayı geri kazanamaz.
Kültür Ortamının Depolanması
İyi bir temel kural, yeni hazırlanmış medyanın, depolanan medyadan daha iyi olmasıdır. Bununla birlikte, medyayı kullanımdan hemen önce hazırlamak nadiren mümkündür ve bir tür depolama kaçınılmazdır. Fazla uzun depolamadan kaçınmak için saklanan medya kesinlikle dönüşümlü olarak kullanılmalıdır. Tüm medya kapları tarihli ve parti numaralandırılmış olmalıdır.
Foto-oksidasyonu önlemek için kültür ortamı ışıktan uzakta saklanmalıdır. Tüm sıvı ortam, tercihen vidalı kapaklı kapaklar kullanılarak, kapalı tüplerde veya şişelerde saklanmalıdır. 15–22 C’de daha iyi saklanan tiyoglikolat et suyu dışında 2–8 C’de saklayın. Antibiyotikler veya diğer değişken bileşenler içermeyen sıvı ortam, serin ve ışıktan uzakta haftalarca saklanabilir.
Dökülen plaklar 2–8 C de shrink film ile sarılmış olarak saklanmalıdır. Bu, tüm nemi her bir torba içinde sıvı havuzları şeklinde hapseden polietilen torbalara tercih edilir. Hazırlanan plakaların raf ömrü, formülasyona ve saklama ve laboratuvara taşıma koşullarına bağlıdır.
Yarı geçirgen filme sarılan ve genişletilmiş polistiren kutularda doğru sıcaklıkta saklanan plakalarla, aylarca raf ömrü olduğu iddiaları ortaya atıldı. Hiç kimse bu çağda tabak tutmamalı veya kullanmaya teşebbüs etmemelidir. Yararlı bir kontrol, depolama sırasında su kaybını ölçmektir. % 5’lik bir ağırlık kaybı, plakaların son bir duruma ulaştığını gösterir.
Kalite Testleri
Mikrobiyoloji laboratuvarlarının büyük çoğunluğu susuz veya hazırlanmış formda kültür ortamı satın alır. Kalite testi sorumluluğu büyük ölçüde üreticilere düşmüştür ve test protokollerinin ayrıntılarını ve sonuçlarını bireysel alıcılara sağlamalıdırlar.
Bununla birlikte, bu testlerin yeni üretilmiş ortamlarda gerçekleştirileceği ve hem teslimattan önce hem de sonra saklama süresinin ortamın kalitesini düşürebileceği takdir edilmelidir.
Ortam hazırlayıcılarının artan kullanımı, çözülmemiş kültür ortamının otoklavlanmasının karmaşık, öngörülemeyen oksidatif etkilerinden agar kültür ortamını korumuştur. Düşen pH değerleri ve renkte koyulaşma, karbonhidrat-peptit komplekslerinin oluşmasına neden olan aşırı ısınmayı gösterir.
Satın alınan kültür besiyerini test ederken, seçilen üç uygun organizma suşu yeterli olmalıdır. Standart organizma türleri satın alınabilir ve kantitatif gelişim değerlendirmesi yapılmalıdır. Seçici besiyeri, istenmeyen organizmaların inhibisyonunun yanı sıra seçilen suşların zenginleştirilmesi için test edilmelidir.
Hücre kültürü kitap PD Hücre kültürü Nasıl yapılır Hücre kültürü pdfiBitki doku kültürü PDF Hücre kültürü uygulamaları Hücre pasajlama nasıl yapılır Kültür PASAJLAMA nedir Tripsinizasyon