Hangi anti-DNA testi seçilmeli?
İdeal tahlil, hastalık aktivitesini güvenilir bir şekilde yansıtmanın yanı sıra, lupus tanısı için yeterince duyarlı ve spesifik olmalıdır. Açıklanan üç testin tümü, aktif hastalığı olan hastalarda >%90 duyarlılıkla birinci kriteri karşılar. Özgüllük açısından, Crithidia ve Farr testleri (özgüllük >%90) ELISA'dan üstündür.
ELISA tahlillerinin, düşük aviditeli antikorları saptama eğilimleri nedeniyle, lupusu olmayan hastaların önemli bir azınlığında yanlış pozitif DNA antikoru sonuçları ürettiği bilinmektedir. Bu dezavantaja rağmen, ELISA tahlilleri, yüksek hassasiyetleri, otomasyon kolaylığı, sonuçları güvenilir bir şekilde nicelleştirme yetenekleri (seri izleme için faydalıdır) ve tahlilde radyoizotop eksikliği nedeniyle klinik uygulamada giderek daha fazla kullanılmaktadır.
Farr testi, hastalık izleme için eşit derecede uygundur ve özellikle böbrekleri içeren hastalık alevlenmelerinin gelişimini öngörmede gerçekten ELISA'dan üstün olabilir.
Yakın zamanda yapılan bir randomize Hollanda çalışmasında, immünosupresif tedavide önleyici artışlar alan anti-dsDNA seviyelerinde %25 artış olan hastalarda, konvansiyonel olarak tedavi edilen kontrol grubuna kıyasla nükslerde önemli bir azalma olmuştur (Bootsma ve ark.).
Lupus hastalarının küçük bir kısmı, DNA antikorlarında eşlik eden bir artış olmaksızın nüks edebilir; benzer şekilde, her üç testte de sürekli olarak yüksek antikor seviyeleri bulunmasına rağmen hastaların az bir kısmı klinik olarak stabil veya asemptomatik olabilir.
Lupus ve Antifosfolipid Sendromu
Fosfolipidlere (APA) karşı antikorlar, tromboz belirteçleri olarak işlev görür ve lupuslu hastaların üçte birinde görülür. 'Antifosfolipid sendromu' (APS) terimi, trombozu ve yüksek fosfolipid antikor seviyeleri olan hastaları tanımlamak için kullanılmıştır. Ağırlıklı olarak venöz trombozla sonuçlanan diğer trombofilik durumların aksine, APS'li hastalarda hem arteriyel hem de venöz damarlarda tromboz gelişebilir.
Klinik belirtiler, hangi organın iskemiye dönüştüğüne bağlıdır. APA, ELISA ile veya fosfo-lipid bağımlı pıhtılaşma tahlillerinin (aktive kısmi tromboplastin zamanı-APTT) uzatılmasıyla saptanabilir.
Asidik bir fosfolipid olan kardiyolipin kullanılarak antijen olarak ELISA ile saptanan APA, enfeksiyon (bakteriyel, viral, protozoal), ilaç tedavisi ve diğer bağ dokusu hastalıkları olan hastalarda birçok yanlış pozitif tanımlandığından, her zaman gerçek bir tromboz belirteci olarak hareket etmeyebilir. Aslında, geçmişteki yanlış pozitif VDRL, VDRL'de bulunan kardiyolipin'e yönelik APA'nın varlığından kaynaklanmaktadır.
Mevcut ELISA testlerinin trombozla ilişkili ve trombozla ilişkili olmayan APA arasında ayrım yapamaması, yüksek APA düzeylerinin klinik önemini yorumlamada zorluklara yol açmıştır.
Antifosfolipid sendromu belirtileri
antifosfolipid sendromu - ekşi
Antifosfolipid sendromu bitkisel tedavisi
Antifosfolipid sendromu gebelik
Sekonder antifosfolipid sendromu
Antifosfolipid sendromu Kadınlar Kulübü
Antifosfolipid sendromu laboratuvar
Antifosfolipid sendromu tanı kriterleri
Bu ayrım önemlidir, çünkü trombozla ilişkili APA'lı hastalar, muhtemelen ömür boyu yoğun, uzun süreli antikoagülan tedaviye ihtiyaç duyarlar. Son kanıtlar, trombozla ilişkili APA'nın, kendi başına fosfolipidlerden ziyade büyük ölçüde 2 glikoprotein I'e (2GPI, fosfolipitleri bağlayan bir serum protein ko-faktörü) yönelik olduğunu göstermektedir.
Mevcut tahlillerde iki 2GPI kaynağı bulunur: ELISA plakalarını bloke etmek için kullanılan insan serumu test numuneleri ve sığır serumu. 2GPI ile immobilize kardiyolipinin etkileşiminin, konformasyonunu değiştirerek immünojenik hale getirdiği düşünülmektedir.
Konvansiyonel ELISA tahlillerinin trombozla ilişkili ve trombozla ilişkili olmayan APA arasında ayrım yapamaması nedeniyle, antijen olarak saflaştırılmış 2GPI kullanan tahlillere büyük ilgi vardır. Varlıkları şu anda antifosfolipid sendromu için tanı kriterlerine dahil edilmemesine rağmen, anti-2GPI antikorları, ELISA ile saptanan geleneksel kardiyolipin antikorlarından daha güçlü tromboz öngörücüleridir.
Fosfolipid bağımlı pıhtılaşma deneylerine müdahale eden APA, bir fosfolipid-protrombin kompleksini tanır ve lupus hastalarında ortaya çıktıklarından dolayı lupus antikoagülanları (LAC) olarak adlandırılır. LAC terimi, kanamadan ziyade in vivo tromboz ile ilişkili olduğu için yanlış bir isimdir.
Normal plazmanın eklenmesiyle düzelmeyen uzamış bir APTT'den LAC'nin varlığından şüphelenilir, bu da bir inhibitörün varlığını düşündürür. LAC antikorlarının gösterilmesi, pıhtılaşmanın işlevsel düzensizliğini gösterdiğinden, bu antikorlar, ELISA tarafından gösterilen APA'ya göre tromboz ile daha yakından ilişkilidir.
Lupuslu hastaların çoğunda kardiyolipin antikorlarının yanı sıra LAC (%70) olacaktır, ancak hastaların az bir kısmında kardiyolipin antikorları veya LAC (her kategoride %15) olacaktır.
Nöropsikiyatrik sistemik lupus eritematozus (NPSLE)
Laboratuvar araştırmasının rolü
SLE'de nörolojik tutulum, hastalıklarının bir noktasında hastaların üçte ikisini etkileyen önemli bir sorundur. Bu tür hastaların yaklaşık %20'si bunu aktif sistemik hastalık zemininde yaparken, vakaların çoğunda sistemik hastalık sessizdir veya sadece hafif derecede aktiftir.
SLE ve nörolojik özellikleri olan bir hastayla karşı karşıya kalan hekim, doğrudan lupus (birincil) nedeniyle nörolojik hastalık, ikincil neden olarak fırsatçı enfeksiyon ve steroid psikozu arasında önemli bir ayrım yapmalıdır, çünkü çoğu hasta o sırada immünosupresif tedavide olacaktır. sunumun.
Altta yatan çok sayıda patojenik mekanizmayı yansıtan çok çeşitli klinik sunumlar görülmektedir. Çeşitli klinik sunumları açıklamak için en az üç hipotez öne sürülmüştür: anti-nöronal antikorlar, fosfolipid antikorlarla ilişkili tromboz ve sitokin kaynaklı hastalıktır.
Ne yazık ki, şu anda mevcut olan SLE laboratuvar belirteçlerinin hiçbiri birincil nörolojik lupus tanısı için yeterince spesifik değildir. Birkaç çalışma, serum veya beyin omurilik sıvısındaki (BOS) anti-DNA ve kompleman (C3, C4) düzeylerindeki anormalliklerin, SLE'de nörolojik ve nörolojik olmayan hastalık arasında ayrım yapmadığını göstermiştir.
Nöronlara (beyin dokusu ile çapraz reaksiyona giren lenfositotoksik antikorlar ve doğrudan nöronal antijenlere karşı hedeflenen antikorlar) karşı yönlendirilen antikorlar için başlangıçtaki istek, nörolojik tutulum olmayan lupus hastalarında varlıklarını gösteren çalışmalarla, nörolojik lupus için spesifik belirteçler olarak azaltılmıştır.
Aynı şekilde, ribozomal P proteinlerine karşı yönlendirilen antikorların, lupus psikozunun spesifik belirteçleri olduğu yönündeki son iddialar, psikozu olmayan SLE hastalarının %50'ye varan kısmında gösterilerek çürütülmüştür.
NPSLE gibi görünen enfeksiyon vakalarının teşhis edilebilmesi için tüm nöropsikiyatrik SLE hastalarında BOS muayenesi zorunludur. SLE'de nörolojik tutulumla ilgili yakın tarihli bir prospektif çalışmada, vakaların yaklaşık %50'sinde altta yatan neden enfeksiyon (kriptokok, tüberküloz ve piyojenik menenjit) olmuştur.
Yalnızca BOS'ta oligoklonal bantların varlığı birincil NPSLE'yi destekler ancak enfeksiyonla da ortaya çıkabilir. Spesifik bir laboratuvar belirtecinin yokluğunda, NPSLE tanısı büyük ölçüde geleneksel klinik sezgiye bağlı kalır.
Moleküler Yöntemler
Bu çalışmanın son baskısından bu yana, tanısal moleküler bakteriyoloji alanında önemli gelişmeler meydana geldi. Bu tekniklerden çok azının araştırma ve referans laboratuvarından klinik bakteriyoloji laboratuvarına geçiş yaptığı hala doğru olsa da, ticari olarak temin edilebilen test kitlerinin sayısındaki artış, bunu yakın gelecekte, özellikle de nispeten yüksek maliyetli ise, belirgin bir olasılık haline getirmektedir. bu moleküler yöntemlerden biri ele alınabilir. Bazı örnekler aşağıda verilmiştir.
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ve gen probları, klinik örneklerde Mikobakteri tüberkülozunun hızlı bir şekilde tanımlanmasında umut vaat etmektedir. Bu yavaş büyüyen organizmanın geleneksel yöntemlerle tanımlanması genellikle birkaç hafta sürer.
Benzer şekilde, genital Chlamydia trachomatis enfeksiyonunun teşhisi için PCR veya ligaz zincir reaksiyonu gibi nükleik asit amplifikasyon testleri önerilir. Dışkı örneklerinde PCR, verotoksin üreten Escherichia coli (VTEC) tarafından üretilen verotoksinleri kodlayan genleri tespit etmek için kullanılır, örn. E. coli O157.
Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae ve Haemophilus influenzae DNA’sının BOS veya tam kanda multipleks PCR ile eşzamanlı tespiti, bakteriyel menenitisin hızlı teşhisinde paha biçilmezdir. Gerçek zamanlı PCR (Roche Diagnostics, Mannheim, Almanya) kullanılarak metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) ve vankomiye dirençli Enterococcus spp olur.
Bu yöntemler, etkili antimikrobiyal kemoterapi ve enfeksiyon kontrol önlemlerinin erken başlatılmasını sağlamalı ve böylece klinik sonuçları iyileştirmelidir. Yöntemlerin daha kapsamlı bir tartışması için diğer bölümlere bakın.
Mikrobiyolojide kullanılan moleküler yöntemler
Moleküler tanı yöntemleri nelerdir
Moleküler genetik tanı yöntemleri nelerdir
Mikrobiyolojide kullanılan moleküler yöntemleri nelerdir
Moleküler Teknikler
Moleküler Biyolojide kullanılan yöntemler pdf
Moleküler mikrobiyoloji PDF
Hibridizasyon yöntemleri
Kültürü Takip Eden Kimlik
Saf Kültür
Bir bakteri tanımlamanın ilk adımı saf bir kültür oluşturmaktır. Bunun yapılmaması, gecikmiş veya yanıltıcı laboratuvar raporlarına yol açan yaygın bir hatadır.
Klinik materyal, gelişimin çoğu iyi izole edilmiş kolonilerden oluşacak şekilde birincil izolasyon besiyerine plakalanmalıdır. Bu şekilde elde edilen koloniler, iyi aydınlatma altında büyüteçli bir el merceği ile dikkatlice incelenmeli ve inceleme için tekli koloniler seçilmeli ve düz bir tel ve sabit bir el kullanılarak seçici olmayan bir ortama aktarılmalıdır.
Bu işlem, saf kültürün yeterli büyümesini sağlayamazsa, tekrarlanmalıdır. Bu aşamada atılan kısa yollar, tanımlamayı geciktirecek, reaktifleri israf edecek ve muhtemelen yanıltıcı sonuçlar doğuracak, bakteriyolog ve klinisyenin hayal kırıklığına ve ağırlaşmasına ve muhtemelen hasta için yanlış tedaviye yol açacaktır.
Seçici veya inhibe edici birincil izolasyon ortamı genellikle sonraki biyokimyasal ve diğer tanımlama tekniklerine müdahale ettiğinden, bu aşamada seçici olmayan bir ortamın kullanılması gerektiğine dikkat edin.
Kimlik Sanatı
Acemi bakteriyolog, bir düzine kadar farklı türde komensal bakteri içerebilen birincil izolasyon plakası ve hemen hemen her bakterinin hastalığa neden olabileceği bilgisiyle karşı karşıya kaldığında, emekli olmadan önce anlamlı bir rapor hazırlamaktan çaresiz kalmalıdır!
Bununla birlikte, örneklenen alan bilgisi, klinik tablo, olası patojenler ve komensal flora bilgisi ile birlikte bu plakaların incelenmesindeki deneyim, tanımlama ve duyarlılık testi gerektiren organizmalar hakkında makul ölçüde doğru bir fikir verecektir. Bu yaklaşım, bakteriyologun, patojenin hızlı bir şekilde tanımlanmasına yol açması muhtemel olan ilk test aralığını seçmesine izin verir.
Bu, en olası nedensel organizmayı doğrulayamazsa, araştırmacı açık fikirli hareket etmeli ve araştırmaları genişletmelidir. Aşamalı yöntem olarak adlandırılan bu yöntem, organizmanın birkaç temel özelliğinin oluşturulmasını gerektirir ve bunlardan organizma tanımlanana kadar tablolara göre sonraki testler seçilir.
Son olarak, her şey başarısız olursa, blunderbuss yöntemi, akla gelebilecek her testin yapıldığı ve sistematik bakteriyolojinin standart metinlerinde listelenenlerle karşılaştırıldığı yerde benimsenebilir. Bu nadiren gereklidir, ancak örneğin yeni bir türü doğrulamak için gerekli olacaktır.
Ön Tanımlama
Bakterilerin aerobik veya anaero-bisik koşullar altında büyüme yeteneği, büyüme gereksinimleri, koloni morfolojisi, besiyeri üzerindeki etkisi (örn. Kanlı agar üzerinde hemoliz), sıvı ortamda hareketlilik, spor oluşturma yeteneği ve Gram üzerinde görünüm ve reaksiyon boyama, bir ön tanımlamanın yapılmasına izin verir. Birkaç basit, hızlı testin müteakip uygulanması, tanımlamayı tamamlamak için hangi başka testlerin (varsa) gerekli olduğunu gösterecektir.
Gram boyaması
Usta bir zanaatkar gibi, yetenekli bakteriyolog kolonyal morfoloji ve Gram boyama sonuçlarına göre tanımlamayı tamamlamak için gereken araçları seçer. Bu testler, aşağıda listelenen geniş kategorilere göre gruplandırılabilir. Tanımlanacak organizmaya bağlı olarak sırayla veya aynı anda gerçekleştirilebilirler. Her gerçekleştirildiklerinde dikkatlice kontrol edilmeleri gerekir, örn. bilinen reaksiyonlara sahip kontrol suşları kullanılarak yapılır.
Enzim Tespiti
Bir bakterinin bir enzim üretme yeteneği, onu bir substrata maruz bırakarak ve ortaya çıkan ürünü saptayarak test edilir.
Yaygın testler şunlardır:
1. Katalaz testi. Katalaz üreten organizmalar, hidrojen peroksite maruz kaldıklarında 30 saniye içinde görünür kabarcıklar üretirler. Bu test, katalaz pozitif olan stafilokokları, katalaz negatif olan streptokoklardan ayırmaya yardımcı olabilir.
2. Oksidaz testi. Bu, sitokrom oksidazın varlığını test eder. Pseudomonas gibi oksidaz pozitif bakteriler, bir renk değişikliği oluşturmak için reaktif tetrametil-p-fenilendiamin dihidroklorürü oksitleyebilir. Enterobacteriaceae oksidaz negatiftir.
3. Üre testi. Bazı türler, üreyi amonyağa ayıran güçlü bir enzim üretir; bu, büyüme ortamına dahil edilen bir pH indikatörü kullanılarak bir renk değişikliği ile tespit edilebilir. Bu test, bir bağırsak kommensali olan üreaz pozitif Proteus mirabilis’i üreaz negatif Salmonella spp. ve önemli bağırsak patojenleri olan Shigella spp olur.
4. Koagülaz testi. Staphylococcus aureus, in vitro plazmayı koagüle eden bir enzime sahiptir. Diğer stafilokoklar negatiftir.
Bu liste kapsamlı değil. Birçok başka test mevcuttur ve bunlar genellikle ticari kitlere dahil edilir.
Antijen Tespiti
Spesifik antiserumlarla hücre antijenlerinin tespiti, bakteriyolojide organizmaları belirlemek ve tiplendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır.