G6PD Eksikliği (Glukoz 6-fosfat dehidrojenaz)
Kırmızı hücre, glikoz metabolizmasının pentoz fosfat şant yolundaki ilk enzimin eksikliğinden dolayı azaltılmış bir indirgeyici enerjiye sahiptir. Genellikle cinsiyete bağlı çekinik bir durumdur: hastalık erkeklerde X kromozomunda bir etkilenmiş genle ifade edilir, ancak dişilerin etkilenmiş iki gene ihtiyacı vardır.
Bir tanesi etkilenen dişiler, Lyon hipotezine göre, hangi hücrelerde hangi X kromozomunun inaktive edildiğine bağlı olarak değişken ekspresyon gösterecektir. Çoğunlukla siyahi ve Akdenizli popülasyonlarda görülür ve dünya nüfusunun %3'ünü etkiler. G6PD aktivitesi retikülositlerde mevcuttur ancak bu bireylerde hızlı ve erken düşer.
Bu nedenle oksidan kimyasallara ve ilaçlara (örn. sülfonamid antibiyotikler) maruz kalındığında kırmızı hücre bütünlüğü azalır. Heinz cisimleri özel olarak hazırlanmış kan filmlerinde görülür. Teşhis, G6PD testiyle yapılır, ancak yalnızca kararlı durumda (hemolitik krizlerden sonra olduğu gibi aşırı sayıda retikülosit olduğunda değil). Bazı bölümlere yiyecekler (klasik olarak bakla - 'favizm') ve ilaçlar neden olur.
6GPD eksikliği için tarama
Pentoz fosfat yolu içinde NADP, G6PD tarafından NADPH'ye indirgenir. Bu ürün ultraviyole ışık altında floresan verir. Bu, floresan nokta testinin temelini oluşturur.
Tam kan aşağıdakilerle karıştırılır:
Glikoz 6-fosfat.
NADP.
Parçalayıcı ajan (genellikle saponin)
Tampon
Daha sonra filtre kağıdına lekelenmeden önce 5-10 dakika inkübe edilir, kurutulur ve uzun dalga UV ışığı altında incelenir. Normal numuneler parlak bir şekilde flüoresans yapacak, eksik numuneler flüoresan etmeyecek veya sadece zayıf olacaktır. Herhangi bir anormal tarama testi, bir G6PD testi ile onaylanmalıdır; burada G6PD tarafından NADPH üretimi, optik yoğunlukta zaman içinde bir değişiklik ile spektrometrik olarak ölçülür.
Enzim eksikliği olanlar ne yememeli
G6PD eksikliği diyet
G6PD eksikliği askerlik
G6PD eksikliği anestezi
glukoz 6-fosfat dehidrogenaz nedir
Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
bebeklerde glukoz-6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
Enzim eksikliği öldürürmü
Piruvat kinaz eksikliği
Piruvat kinaz eksikliği "otozomal resesif" bir durumdur (her iki genin anormal olması, bir kişinin durumu kalıtım yoluyla alması) ve başka bir enzim sorunudur - daha nadir görülen G6PD dışı hastalıkların en yaygınıdır. Hücreler deforme olur ve savunmasız hale gelir. Kan filmi poikilositleri (anormal şekilli kırmızı hücreler) gösterir ve bunlar bir ilaç uyarısı olmadan kendiliğinden hemolizlenir. Transfüzyon gerekebilir.
Piruvat kinaz eksikliği taraması
Piruvat kinaz, reaksiyonun katalizörüdür: ADP + fosfoenolpiruvat ! ATP + piruvat
Bu reaksiyonun ürünü olan piruvat daha sonra laktat dehidrojenaz (LDH) tarafından katalize edilen aşağıdaki reaksiyona ilerler:
Piruvat ş NADH ! laktat + NAD
NADH, uzun dalga UV ışığı altında floresan verirken NAD olmaz. Bu nedenle, tam kan ADP, fosfoenolpiruvat ve NADH ile inkübe edildiğinde, normal numunelerde NADH, sonuçta bir floresan kaybıyla NAD'ye oksitlenir. Eksik numuneler parlak bir şekilde floresan verecektir.
Anormal bir PK tarama testi, NADH'nin NAD'ye oksidasyonunun zaman içinde fotometrik olarak absorbanstaki bir değişiklikle ölçüldüğü, enzimin tam bir tahlili ile teyit edilmelidir.
Bağışıklık Hemolizleri
Çeşitli koşullar (Tablo 34.4'te listelenenler gibi), daha kısa bir ömre sahip olan antikor kaplı kırmızı hücrelerle sonuçlanır. İmmün hemoliz, laboratuvardaki termal aktivite (ve aglütinasyon) aralığına bağlı olarak laboratuvarda 'sıcak' ve 'soğuk' tiplere ayrılır, klasik olarak ılıkta 37 C ve soğukta 4 C, ancak bazen küçük örtüşmedir.
Pozitif olacak (DCT, Şekil 34.4) geniş bir tarama doğrudan Coombs (anti-globulin) testinin yanı sıra, sıcak immün hemolizde daha spesifik bir profil (IgG, kompleman) veren reaktifler kullanılabilir. Soğuk immün hemoliz şüphesinde, kan örneğini serum ayrılana kadar sıcak tutmak, ardından yetişkin (antijen içeren) ve göbek bağı (antijen taşıyan) hücrelere karşı test etmek olağandır.
DCT genellikle sadece kompleman reaktifi ile pozitiftir ve kan filmi, ısıtılmadıkça aglütinasyon gösterir. Sıcak ve soğuk koşullar arasındaki ayrım tedavi için önemlidir. Sıcak immün hemolizlerde, antikor üretiminin etkisini durdurmayı veya buna müdahale etmeyi amaçlayan steroidler ve diğer immünosupresif tedaviler genellikle yararlıdır.
Splenektomi sıklıkla işe yarar. Bununla birlikte, soğuk immün hemolizlerde sitotoksik kemoterapi (bazen) ve hastayı sıcak tutmak (neredeyse her zaman) yardımcı olur, ancak steroidler veya splenektomi değil. Otoaglütinasyon çapraz eşleşmeyi engellediğinden, immün hemolizde genellikle transfüzyondan kaçınılır.
Hastanın klinik durumu zaman zaman transfüzyon gerektirir ve kesinlikle kırmızı hücre eksikliği nedeniyle yenik düşmesine izin verilmemelidir, bu durumda 'en az uyumsuz' kan verilir.
Yenidoğanın hemolitik hastalığı (HDN)
Rh+ fetüsündeki Rh-pozitif hücreler, Rh annenin dolaşımına geçer, örn. hamilelik sırasında kanama veya düşük yapma tehdidi. Bu, annenin anti-D (anti-rhesus) antikorları üretmesine neden olur ve bu antikorlar daha sonra aynı veya sonraki gebeliklerde fetüse geçer ve kırmızı hücreleri kaplar ve bebek Rh+ ise hemolize neden olur.
ABO grubu uyumsuzlukları benzer sorunlara neden olabilir, ancak daha az önemdedir. Doğumdan sonra yüksek konjuge olmayan bilirubin seviyeleri (hemolize bağlı olarak) kan-beyin bariyerini geçecek ve beyin hasarıyla birlikte 'kernikterus'a neden olacaktır. Değişim transfüzyonunu içerebilen tedavi bunu önleyecektir.
Kan filminde sferositler görülebilir ve DCT pozitif olacaktır. Ağır vakalarda bebek hidropik olacaktır (anemi/sarılık/ödemle şişmiş). Potansiyel feto-maternal kanama zamanlarında, annenin antikor üretimi, Rh+ hücrelerini temizlemek için intramüsküler enjeksiyon yoluyla anti-D'nin pasif olarak uygulanmasıyla engellenebilir, bu da annenin kendi yanıtını üretmesini engelleyecektir.
Anti-D'nin bu şekilde profilaktik kullanımı, modern bilimsel tıbbın başarı öykülerinden biridir, bu nedenle etkilenen bebekler artık nadirdir. Bunlar intrauterin transfüzyon (zor bir manevra!) veya yenidoğanın değişim transfüzyonu ile erken doğum indüksiyonu ile tedavi edilebilirler.
Uyumsuz Transfüzyon
Uyumsuz transfüzyon, immün aracılı bir hemoliz oluşturur. ABO uyumsuzluğunda (çok nadir görülen bir durumdur, ümit edilir) hastanın doğal olarak oluşan anti-A veya anti-B antikorları (veya her ikisi) nedeniyle donör hücreler intravasküler olarak yok edilir.
Hasta daha önce tarif edildiği gibi çok hızlı bir şekilde hastalanabilir ve hemoglobinüri geliştirecektir. Transfüzyon durdurulmazsa veya hasta anestezi altındaysa, durum ölümcül olabilir.
Diğer antijenlere bağlı uyumsuzluk reaksiyonları genellikle anemi ve sarılık ile ekstravasküler hemolize neden olur. İyileşme olağandır ancak alyuvar antijenlerine karşı allo-antikorlar nedeniyle bundan sonra çapraz eşleşme sorunları olacaktır.
Sıcaklık Etkileri
NPC’de sıcaklığın etkisine ilişkin erken gözlemler, genel bir kural olarak, sıcaklıktaki bir artışın tutmada bir azalmaya yol açtığını gösterdi; ancak bu genelleme, çözücüdeki spesifik polar değiştiriciye bağlıdır; örneğin etanol, tutulmada bir artışa neden oldu.
Daha yeni çalışmalar, sıcaklık etkilerinin durağan fazın doğasına bağlı olduğunu ve incelenen en polar fazın, sıcaklık artışıyla birlikte tutmada en büyük azalmayı sağladığını göstermiştir.
Sıcaklığın alıkonma üzerindeki değişken etkisinin alternatif bir açıklaması, durağan faza adsorbe edilen nispi su miktarlarına atfedilmiştir, bu da durağan fazın polaritesiyle ilgilidir. Bu etkilerin bir özeti gösterilmektedir. Bununla birlikte, genel olarak, 40 ° C’nin üzerindeki sıcaklıklar, tutmada bir artışa neden olurken, bunun altında, tutmada bir azalma vardır.
Diğer Hususlar
Normal faz sabit fazlar genellikle ters faz sabit fazlardan daha az kararlıdır. Yaygın bir bulgu, çözünen maddenin karbonil grupları ile Schiff bazlarının oluşumu yoluyla amino kolonlarının bozulmasıdır, ancak bir yeniden etkinleştirme yöntemi önerilmiştir.
NPC’nin temel avantajı, suda sadece az çözünür olan türleri ve ayrıca çok hidrofilik olan ve ters faz desteğinde tutulmayan türleri ayırma yeteneğidir.
Dahası, NPC desteklerinin mevcudiyeti, numunenin hidrofilikliğinin bir başka seçicilik özelliği olarak kullanılmasına izin verir. NPC, RPC kadar popüler olmasa da, şimdiye kadar yüksek organik çözücü konsantrasyonlarında kararsız olarak kabul edilen birçok biyomolekülün, NPC kullanılarak verimli bir şekilde kromatografiye tabi tutulabileceğinin farkına varılmasıyla birlikte giderek daha fazla kullanılmaktadır.
Dad dedektör nedir
HPLC dedektörleri
Sıvı Kromatografisi Nedir
Rid dedektör nedir
Hplc Nedir
HPLC cihazı
Hplc nasıl kullanılır
Yüksek basınçlı Sıvı Kromatografisi
Yüksek Performanslı Ters fFazlı Kromatografi
Kullanılan tüm kromatografik teknikler arasında ters fazlı HPLC, bu kromatografik modda gerçekleştirilen tüm analitik ayırmaların en az% 60’ı ile en popüler olanıdır. Ters fazlı kromatografi terimi, ilk olarak, sulu elüentler ile parafin yağı ve n-oktan’ın sabit bir fazı üzerinde sıvı-sıvı kromatografisi gerçekleştiren Howard ve Martin (1950) tarafından türetilmiştir.
Böyle bir bölme sisteminde, bir polar sabit faz ve daha az polar bir mobil faz kullanan geleneksel metodoloji, mobil fazın durağan fazdan daha polar olmasıyla tersine çevrildi.
Ters faz kromatografisi, durağan faz ile hareketli faz arasındaki çekici kuvvetlerin baskın olduğu diğer çoğu kromatografi tekniklerinden farklıdır. Ters fazlı kromatografide, durağan faz genellikle inert bir hidrokarbondur ve genellikle çözünen madde ile tek etkileşimler hidrofobiktir ve seçiciliğe solvent etkileri hakimdir.
Tipik olarak, ters fazlı kromatografide kullanılan mobil fazlar, ya tek başına su ya da su artı bir organik modifiye ediciden oluşur, ancak son zamanlarda sulu olmayan mobil fazlarda daha fazla ilgi ifade edilmiştir. Bu farklı mobil fazlar, sırasıyla düz sulu, karışık sulu ve susuz ters faz kromatografisi anlamına gelen PARP, MARP ve NARP kısaltmalarıyla sonuçlanmıştır.
Ters faz kromatografisinin genel modundaki varyasyonlar bol olmakla birlikte, bu alanda hızlı gelişmeler devam ederken, bu bölümün sonraki bölümlerinde genişletilecek olan tekniğin genel bir taslağı verilebilir.
Sabit faz genellikle n-oktadesil ligandlarının kovalent olarak bağlandığı küresel silika partiküllerinden oluşur. Diğer popüler ligandlar, n-oktil ve fenildir. Silika mikropartiküllerinin çapı genellikle analitik uygulamalar için 25 um’den küçüktür, ancak hazırlayıcı HPLC’de bu çap genellikle daha büyüktür.
Sabit faz genellikle 4-5 mm iç çapa ve 50-300 mm uzunluğa sahip paslanmaz çelik analitik kolonlar halinde paketlenir, ancak son zamanlarda daha kısa kolonlar ve daha küçük çaplı paketlere doğru bir eğilim vardır.
En popüler mobil fazlar sulu veya sulu artı metanol veya asetonitril gibi organik bir değiştiricidir. Mobil fazlar genellikle analitik bir kolondan 0.5-2 ml / dk’da pompalanırken, hazırlayıcı kolonlardan akış hızları genellikle çok daha yüksektir.
Ters faz modunun popülaritesi, potansiyel kromatografi için sahip olduğu sayısız avantaj nedeniyle anlaşılabilir bir durumdur. Bu avantajların en büyüğü, hareketli faz bileşiminin çeşitliliği yoluyla geniş bir çözücü etkisinin kullanılmasına izin veren sabit fazın eylemsizliğidir; örneğin, tuzların eklenmesi ve hareketli faz pH ve sıcaklığının değiştirilmesi.
Bu bölümde, yukarıda tartışılan ters fazlı kromatografinin her yönü, potansiyel kromatografi mobil faz ve durağan fazın birçok olası kombinasyonu boyunca yönlendirmeye vurgu yapılarak daha ayrıntılı olarak ele alınacaktır.
Sabit Fazlar
Ters faz kromatografisinde en yaygın kullanılan sabit faz, silikaya kovalent olarak bağlanmış oktadesilsilan gruplarından (ODS) oluşur; bununla birlikte, farklı kromatografik karaktere sahip bir dizi farklı ODS paketi kullanılmaktadır ve bunlar bu bölümde ele alınacaktır. Ek olarak, ODS’nin yanı sıra bir dizi farklı fonksiyonel grup silikaya bağlanabilir ve bunlardan daha popüler olanlarından bazıları da tartışılacaktır.
Oktadesilsilan (ODS) Salmastralar
ODS ambalajları genel olarak monomerik ve polimerik fazlara ayrılabilir. Monomerik fazlar genellikle bağlı ligand tarafından daha homojen bir silika kaplamasına sahiptir ve nispeten daha düşük bir karbon yüküne sahiptir, bu da yüksek oranda serbest silanol gruplarına neden olabilir.
Bu nedenle, tamamen uç başlıklı olmayan monomerik ambalajlar, geleneksel solvofobik etkileşimlere ek olarak bölme etkilerinin ortaya çıkması nedeniyle karışık bir kromatografik ayırma mekanizması sergileyebilir. Monomerik fazlar genellikle polar çözünen maddelerin ayrılması için polimerik ODS fazlarından daha etkilidir.
Polimerik fazlar genellikle nispeten yüksek bir karbon yüklemesine sahiptir, ancak yoğun hidrofobik zincirlerin doğası nedeniyle polar bileşikler için zayıf kütle transfer özellikleri gösterir.
Polimerik fazlar genellikle orta polariteli çözünen maddelerin ayrılması için ve ayrıca polar olmayan bileşikler için tavsiye edilir. Ayrıca, polimerik fazlar daha yüksek bir karbon yüklemesine sahip olduğundan, kolonlar yüksek bir numune yükleme kapasitesine sahiptir ve preparatif kromatografi için daha yararlı da olabilir.