Doku Patolojisinde Kantitatif Yöntemler
Ölçüm uygulaması, gözlemleri objektif, tekrarlanabilir ve güvenilir bir şekilde karşılaştırmak için bir araç sağladığından, bilimsel araştırmanın neredeyse tüm yönlerinin merkezinde yer alır.
Teşhis patolojisi, başlangıcından itibaren, büyük ölçüde doku morfolojisinin mikroskopi ile görsel olarak değerlendirilmesine, hastalığı sınıflandırmak için görsel teşhis ipuçlarının kullanımına ve bu sürecin nasıl gerçekleştirilebileceğini anlatmak için tanımlayıcı, dilsel kriterlerin kullanımına dayanmaktadır.
Histoloji ve sitopatolojide klinik olarak ilgili morfolojik ipuçlarını belirlemede muazzam ilerlemeler kaydedilmiş olsa da, tanısal patoloji öznel bir süreç olmaya devam etmektedir ve bu, genellikle hem farklı patologlar arasında hem de farklı durumlarda aynı patolog tarafından tanısal sınıflandırmada zayıf tekrarlanabilirlikle sonuçlanmaktadır.
Displazi gibi erken malignitenin derecelendirilmesi böyle bir örnek sağlar. Çalışmalar servikal displazi derecelendirmesinde 0.15, oral displazide 0.27 ve bronş pre-invaziv lezyonlarında 0.55 kadar düşük (kappa) değerler göstermiştir. farklı gözlemciler arasındaki uzlaşmanın bir ölçüsüdür ve 0 (uzlaşma yok) ile 1 (mükemmel uyum) arasında değişir.
Servikal sitolojide,% 2'lik hata oranları 0,46 gibi düşük değerlerle belirtilmiştir ve doku bölümlerinden servikal intraepitelyal neoplazinin derecelendirilmesi vakaların% 36'sına kadar anlaşmazlık göstermiştir.
Bu sonuçlar, morfolojik değişiklikleri çıplak gözle doğru ve tutarlı bir şekilde derecelendirebilmekte var olan zorluğun altını çizmektedir. Bu nedenle, umutsuzca ihtiyaç duyulan nesnelliği, tutarlılığı ve tekrarlanabilirliği sağlayan tanıya yeni yaklaşımları keşfetme fırsatları vardır.
Histolojik ve sitolojik özelliklerin ölçümünün, patolojide tanısal kararlar alma becerimizi önemli ölçüde geliştirebilecek objektif veriler sağlayabileceği uzun zamandır kabul edilmiştir. Patolojide ölçüm, morfometri, kantitatif mikroskopi, kantitatif patoloji, görüntü analizi ve matematiksel morfoloji dahil olmak üzere birçok farklı şey olarak adlandırılmıştır. Patolojide ölçümün bir dizi farklı avantajı vardır.
Çıplak gözle gördüğümüz morfolojik değişiklikleri sayısal terimlerle tanımlamamızı sağlar. Bu bize objektif, tekrarlanabilir ve doku morfolojisindeki değişiklikler hakkında istatistiksel olarak belirli hipotezleri test etmek için kullanılabilen nicel veriler sağlar.
Buna ek olarak, ölçüm çıplak gözle kolayca görülemeyen ince, "alt görsel" özelliklerin algılanmasına olanak tanır. Her iki durumda da ölçüm, morfolojik anormalliklerin objektif yorumlanması ve insan hastalıklarının kantitatif sınıflandırması için paha biçilemez bir araç olabilir.
Patoloji doku takibi AŞAMALARı
Patoloji nedir
patoloji nedir, ne iş yapar
Ameliyat sonrası patoloji sonucu
Patoloji sonucu temiz çıkarsa
Patolojik nedir
Patoloji raporu yorumlama
Patoloji bölümü
Yöntemler
Mikroskopiden kantitatif bilgi elde etmemize izin veren çeşitli yöntemler vardır. Basit doğrusal ölçümler, herhangi bir mikroskobun oküler tüpüne yerleştirilebilen, üzerine mikroskobik bir cetvel veya belirli boyutlarda bir ızgaranın oyulduğu düz bir cam parçası kullanılarak bir göz parçası ızgarası kullanılarak yapılabilir.
Bu, numunenin görüntüsünü kaplar ve kantitatif verileri çıkarmak için kullanılabilir. Basit bir ayarda bu, doğrusal derinlik veya kalınlık mesafelerini ölçmek için kullanılabilir.
Öte yandan stereoloji, görüntüyü kaplayan nokta veya çizgi probları kullanan bir yaklaşımdır. Basit olmasına rağmen, iki boyutlu görüntülerden (yani doku bölümleri) üç boyutlu ölçümleri (örneğin hacim, yüzey alanı, uzunluk) çıkarmak için hala önemli bir değere sahip olan eski ve köklü bir tekniktir.
Bu yöntemler artık patolojik araştırma ve uygulamalarda nadiren uygulanmaktadır. Bunun nedeni, etkisiz olmaları değil, daha ziyade otomasyon ve çok sayıda numunenin analizinin, bilgisayarı patolojide ölçüm için merkezi araç haline getirmesidir.
Bu, uygun yazılımla, doku ve hücre örneklerinin mikroskobik görüntülerinden doğrusal, stereolojik ve daha karmaşık morfolojik parametreleri ölçmekten daha fazla yeteneğe sahip olan standart kişisel bilgisayarların her yerde bulunmasıyla daha da geliştirilmiştir.
Bilgisayarlar
Bilgisayarların tıbbi uygulama ve araştırmanın birçok yönü üzerinde büyük bir etkisi olmuştur. Patolojide, bilgisayarlar artık patoloji raporu oluşturma, örnek tanımlama ve dijital fotomikroskopi için hasta bilgi sistemleri olarak laboratuvar altyapısının önemli bir parçasını oluşturmaktadır.
Bilgisayarlar ayrıca ışık mikroskobunda doku ve hücre ölçümü için ana araç haline geldi. Bir doku veya hücre yapısının profil koordinatları ile sunulduğunda, yazılım, alan, çevre, maksimum çap, minimum çap, şekil faktörü vb. Gibi bu profille ilgili çeşitli ölçümleri çok hızlı bir şekilde hesaplayabilir.
Bu bilgiler elektronik olarak bir veri tabanında saklanabilir ve teşhis gruplarını, farklı prognozlu hastalardan alınan doku örneklerini ve tedaviyi takiben morfolojik değişiklikleri karşılaştırmak için istatistiksel olarak analiz edilebilir. İki tür bilgisayar tabanlı teknik genel olarak tanımlanabilir.
Bilgisayar Destekli İnteraktif Ölçüm
Bu yaklaşım, ölçülecek doku veya hücre yapılarının sınırlarının izlenmesi veya işaretlenmesi için tamamen insan kullanıcısına dayanır. Fare veya daha özel bir dijital kalem ve çizim tableti olabilecek ekli bir çizim cihazına sahip bir bilgisayardan oluşur. Belirli bir nesnenin sınırını izleyerek, x; y koordinatlar sistem tarafından kaydedilir.
Bunlar, boyut ve şeklin özelliklerini ölçmek veya dansitometrik ölçümlerin hesaplanabileceği sınırı tanımlamak için kullanılabilir. Basit fotomikrograflardan, video kamera kullanılarak bilgisayar ekranına aktarılan canlı görüntülerden veya dijital olarak depolanan görüntülerden sınırlar izlenebilir.
Çoğu masaüstü bilgisayar, etkileşimli ölçüm cihazları olarak işlev görecek şekilde kolayca ayarlanabilir. Ölçümü kolaylaştırmak için yazılım ticari olarak mevcuttur. Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından geliştirilen ücretsiz yazılım da Scion Imaging'den edinilebilir. Bu nedenle bu yaklaşım ucuzdur, uygulaması kolaydır ve çok çeşitli uygulamalarda kullanılmıştır.
Patolojide Dijital Görüntüler
Mikroskobik görüntüleri dijital olarak kaydedebilmemiz, çok sayıda görüntüyü uygun ve yönetilebilir bir biçimde elektronik olarak saklama ve ayrıca niceliksel değerlendirme için bu görüntülerden sayısal bilgileri hızla çıkarma becerimiz üzerinde büyük bir etkiye sahip olmuştur.
Hareketsiz dijital kameralar, standart bir adaptör kullanılarak bir mikroskoba kolayca takılabilir. Burada kamera, görüntüyü daha sonra işleme ve analiz için bir bilgisayara aktarılan dahili bir hafıza kartına kaydeder.
Alternatif olarak, dijital veya analog video kameralar bir mikroskoba bağlanabilir ve görüntüler, uzman bir görüntü sayısallaştırma kartı aracılığıyla doğrudan bilgisayar tarafından dijitalleştirilebilir. Her iki yaklaşım da işe yarar, ancak özel uygulamalar için deklanşör hızı, kazanç ve renk sıcaklığı gibi kamera ayarlarının kontrolü hayati önem taşır.
Deneyde, Escherichia coli bakterisi için bir bakteriyofaj litik olan kolifaj T2’yi inceleyeceğiz.
Amaç
Bir kolifajın titresini plak tahlil yöntemi ile belirlemek için,
Malzemeler
Escherichia coli suşu B’nin gecelik et suyu kültürü
Kolifaj T2 (et suyunda 1: 100 süspansiyon)
4,5 ml triptik soya suyu içeren test tüpleri
2,5 ml yumuşak triptik soya agarı (% 0,7) içeren test tüpleri
Oda sıcaklığında triptik soya agarı plakaları
Steril 1.0- ve 5.0-ml pipetler
Pipet ampulü veya diğer pipetleme cihazı
Prosedürler
1. Yumuşak agar tüplerini eritin ve 50 ° C su banyosuna koyun.
2. 4,5 ml triptik soya suyu içeren 8 tüplü bir raf hazırlayın. Tüplerin her birini şu şekilde etiketleyin: 10 3, 10 4,
10 5, 10 6, 10 7, 10 8, 10 9 ve “Kontrol edin.”
3. 8 yumuşak agar tüpünü ve 8 triptik soya agar plakasını yukarıdaki sırayla 10 4 ile başlayıp 10 10 ile biten şekilde etiketleyin ve
bir kontrol edin.
4. 1,0 ml’lik bir pipetle 0,5 ml 1: 100 kolifaj süspansiyonunu çıkarın ve triptik soya suyu tüpüne koyun. Etiketli 10 3. Pipeti atın.
5. Yeni bir pipetle, birkaç kez yukarı ve aşağı pipetleyerek, 10 3 etiketli tüpteki süspansiyonu karıştırın (bir ampul veya
diğer pipetleme cihazı). Bu tüpten 0,5 ml alın ve 104 etiketli broth tüpüne aktarın. Pipeti atın.
6. Kolifajı 104 etiketli tüpten 105 etiketli tüpe aktararak 5. adımı tekrarlayın ve bu şekilde 0,5 ml faja kadar devam edin.
10 8 etiketli tüpten 10 9 etiketli tüpe aktarılmıştır.
7. Yeni bir pipetle, 10 9 etiketli tüpün içeriğini karıştırın ve ardından bu tüpten 0,5 ml’yi bir kap içine atın. Tüp etiketli kontrole herhangi bir kolifaj eklemeyin.
8. 5.0 ml’lik bir pipet kullanarak, gece boyunca 0.5 ml E. coli kültürünü aşağıdakiler de dahil olmak üzere erimiş yumuşak agar tüplerinin her birine aktarın.
kontrol tüpü. Bakteriyel aşıyı ekledikten sonra, her bir tüpü 50 ° C su banyosuna geri koyun, ancak hızlı bir şekilde sonraki adımları izleyin.
9. Ardından, sonraki prosedür, bir iş ortağınızla çalışmanızı daha kolay gerçekleştirecektir. “Kontrol” etiketli tüpten (kolifaj dilüsyonları serisinde), “Kontrol” etiketli yumuşak agar tüpüne 0,1mlofthetrypticsoybroth transfer edin. Pipeti yerleştirmeden veya herhangi bir yüzeye dokunmadan, tüpü partnerinize verin. Partneriniz, tüpü avuç içleri arasında yuvarlayarak ve ardından yumuşak agarı “Kontrol” etiketli triptik soya agar plakasının yüzeyine yerleştirerek içeriği karıştırmalıdır. Plak daha sonra döndürülmeli ve yumuşak agar yayılacak şekilde eğilmelidir. Daha sıkı agar plakasının yüzeyi boyunca eşit olarak yumuşak agar sertleşene kadar plağı bir kenara koyun.
10. Adım 9’daki ile aynı 1.0 ml’lik pipeti kullanarak, 0.1 ml kolifaj süspansiyonunu 10 9 etiketli triptik soya suyu tüpünden çıkarın ve 10 10 etiketli yumuşak agar tüpüne aktarın. Et suyu ve yumuşak agar tüplerindeki etiketlerin aynı olmadığını (ancak her ikisinin de doğru olduğunu) unutmayın. Tüpü, içeriği dikkatlice 10 10 etiketli agar plakasının üzerine yerleştirecek olan partnerinize verin.
Maya ve küf arasındaki fark
Mayalar
Küflerin genel özellikleri
Mayaların genel özellikleri
Mayaların özellikleri
Gıdalarda mayalar
Peynirde maya küf
Maya Nedir Mikrobiyoloji
11. Her kolifaj dilüsyonundan 0.1 ml’yi bir sonraki yüksek dilüsyon ile etiketlenmiş yumuşak agar tüpüne aktararak 10. adımı tekrarlamaya devam edin, 10 etiketli yumuşak agar tüpündeki 103 dilüsyon ile sona erene kadar 4. bir yüzeye dokunarak kontamine ettiğinizi düşünmediğiniz sürece aynı pipeti kullanın. Her durumda, partneriniz yumuşak agar tüpünün içeriğini karşılık gelen triptik soya agar plakasının üzerine katmanlamalıdır.
12. Tüm plaklar sertleştikten sonra, bir sonraki oturuma kadar bunları 37 ° C’de inkübe edin.
13. Plakları, E. coli suşu üzerindeki kolifajın litik aktivitesinin kanıtı açısından inceleyin. Temiz bir alan veya “plak”, bir bakteri hücresine bağlanan ve giren bir viral partikülün, hücreyi parçaladığı ve bitişiğindeki istila ettiği her noktada görünür.
14. Plakları gösteren plakları, eşit bir bakteri büyümesi “çimenliği” göstermesi gereken kontrol plağıyla karşılaştırın.
15. Plak sayısının 30 ile 300 arasında olduğu bir tabak seçin ve sayın. Orijinali hesapla aşağıdaki formül kullanılarak kolifajın konsantrasyonu (plak oluşturan birimler veya PFU) ve PFU / ml orijinal süspansiyon sayısı plak 1 / plaka dilüsyonuna bakın.
16. Sonuçlarınızı kaydedin ve diğer grupların sonuçlarıyla karşılaştırın.
Sorular
1. Mikoplazmalar nedir? Nasıl tanımlanırlar?
2. Mikoplazmalar ışık mikroskobu ile incelenebilir mi? Varsa ne tür hazırlıklar yapılıyor?
3. Bakteri hücre duvarının işlevleri nelerdir? Yokluğu bakterilerin davranışını nasıl etkiler?
4. Mikoplazmalar diğer bakterilerden nasıl farklıdır?
5. Virüsler diğer mikroorganizmalardan nasıl farklıdır?
6. Rickettsiae nasıl bulaşır?
7. Önemli klamidyal hastalıkları adlandırın.
8. Virüsler laboratuvarda nasıl tanımlanır?
9. Arbovirüs nedir?
10. Lizojenik bakteriyofaj nedir? Bazı hastalıklarda neden önemlidir?
11. Hücre kültürünü tanımlayın.
12. Elektron mikroskobunun ışık mikroskobundan farkı nedir? Prensiplerini açıklayın.
13. Bir prionun kısa bir tanımını girin.
14. Prionların neden olduğu üç insan hastalığını adlandırın.
15. Prion hastalıkları neden yavaş viral enfeksiyonlar olarak adlandırılır?
16. Aşağıdaki tabloyu doldurun.
Mantarlar: Mayalar ve Küfler
Tıbbi mikoloji, topluca mantarlar (tekil, mantar) olarak adlandırılan patojenik mayalar ve küflerin incelenmesi ve tanımlanmasıyla ilgilenir. Bir dizi önemli mikotik hastalığa aşina olmanız gerekir.
Mayalar, tomurcuklanarak, yani yavru hücreleri oluşturup sıkıştırarak çoğalan tek hücreli mantarlardır. Maya hücreleri, bakteri hücrelerinden çok daha büyüktür (yaklaşık beş ila sekiz kat). En iyi bilinen (ve en kullanışlı) tür ekmek yapımında ve şarap ve bira üretiminde kullanılan fermantasyonlarda kullanılan “fırıncı mayası” Saccharomyces cerevisiae’dir.
Küfler çok hücreli, daha yüksek mantar formlarıdır. Miselyum adı verilen bir matta bolca örülmüş hif adı verilen filamentlerden oluşurlar. Üreme için özel yapılar, hiflerden ortaya çıkar ve her biri yeni mantar büyümesi oluşturmak için filizlenebilen conidia (sporlar olarak da adlandırılır) üretir.
Bir küfün gözle görülür büyümesi genellikle bulanık bir görünüme sahiptir, çünkü miselyum vejetatif büyüme tabanından yukarı doğru uzanır ve konidia taşıyan özel hifleri havaya iter.
Bunu küflü ekmek veya diğer yiyeceklerde sık sık gördünüz ve muhtemelen farklı küflerin konidiyal pigmentlerinden dolayı renklerinin (siyah, yeşil, sarı) değiştiğini de fark etmişsinizdir.
Doğada bulunan binlerce maya ve küf türünün çoğu saprofitiktir ve hastalığa neden olamaz. Aslında, çoğu belirli gıdaların (peynirler gibi) işlenmesinde ve bir antimikrobiyal madde kaynağı olarak son derece faydalıdır. Örneğin penisilin notatum, penisilin üreten küftür.