Geç faz projeleri için, aktif içerik için ikinci bir tanımlama yöntemi gereklidir. Yakın zamanda kızıl ötesi (NIR) cihazları, kimlik testi için kullanılan geleneksel ince katman tekniğinin yerini almıştır. NIR, tabletler ve sıvılar için yüksek verimli kimlik testi gerçekleştirebilir. NIR, iki, üç veya hatta daha fazla aktif bileşen içeren formülasyonlarda sınırlamaya sahiptir. Bu kombinasyon ürünleri için CE ikinci kimlik belirleme seçeneği olabilir.
Saflık Testleri
ICH Yönergesi Q3A, bir ilaç maddesinin insan kullanımı için saflık gereksinimleri konusunda oldukça spesifiktir. Q3B, ilaç ürünleri için karşılık gelen kılavuzdur. Bir ilaç maddesinin uygulanan günlük dozuna dayalı olarak, safsızlıklar için eşikler Tablo 7 ve 8’de verildiği gibi belirlendi.
Raporlama Eşiği: Bir safsızlığın bildirilmesi gereken (W) üzerindeki bir limit. (Miktar belirleme sınırı, raporlama eşiğinden küçük veya ona eşit olmalıdır.) Tanımlama Eşiği: Bir kirliliğin tanımlanması gereken (W) üzerindeki sınır. Nitelik Eşiği: Bir kirliliğin nitelendirilmesi gereken (W) üzerindeki sınır.
Verilen yüzdeler, izole edilmiş ilaç maddesine atıfta bulunulan ağırlık / ağırlık yüzdeleridir. Nitelendirmenin bu terimde toksikolojik araştırma yoluyla ilaç maddesinin bir safsızlığının olası biyolojik etkisinin değerlendirilmesi anlamına geldiğinden bahsedilmelidir. Ek olarak, bu sınırlar yalnızca herhangi bir özel toksikolojik uyarı göstermeyen safsızlıklar için verilir.
Tanımlanmış veya potansiyel bir safsızlığın toksikolojik değerlendirmesi yüksek bir toksisite potansiyeli gösteriyorsa (örn., Genotoksisite, mutajenite), bir ilacın ppm aralığında (ağırlık / ağırlık) daha sert sınırlar gerekecektir. Bu normalde UV tespitli bir CE aralığının dışındadır ve CEMS gibi diğer daha hassas tespit teknikleri dikkate alınmalıdır.
Kılcal damardan geçen küçük ışık yolu nedeniyle, UV dedektörleri için yanıt faktörleri (absorpsiyon / konsantrasyon), HPLC’ye kıyasla çok daha küçüktür. Bu nedenle, enjekte edilen numunenin konsantrasyonu genellikle daha yüksektir. Aşırı yükleme etkileri, ilacın çözünürlük sınırları veya doğrusal olmayan etkiler, konsantrasyon aralığının üst sınırını temsil eder.
Genel bir kural olarak, ana ilaç maddesinin tepe noktası 200 mAU aralığında olmalıdır. Raporlama sınırına kadar hesaplanarak ve tepe yüksekliğinin doğrusal olarak azalacağı varsayıldığında, 0,1 mAU (ilaç ürünleri için 0,2 mAU) yüksekliğinde bir tepe tespit edilebilir ve tekrar tekrar ölçülebilir olmalıdır. UV tespiti ile bir CE yönteminin hassasiyetini artırmanın yolları Tablo 9’da listelenmiştir.
HPLC cihazı çalışma prensibi
Hplc dedektörleri nelerdir
HPLC pik yorumlama
HPLC PDF
Analitik saflık
HPLC Makale
HPLC sonuç değerlendirme
HPLC cihazı Kısımları
Genel Saflık Testleri
Bir ilaç maddesinin veya bir ilaç ürününün genel saflığını değerlendirmek için genel saflık testleri yapılır. Bilinen ve bilinmeyen safsızlıklar nicelendirilecek ve tüm safsızlıkların toplamı rapor edilecektir. Çoğu durumda, tüm safsızlıkların toplamı için ek bir şartname belirlenir. Safsızlıklar kimyasal sentezden (reaktifler, öncüler, yan ürünler, imalat sırasında bozunma) veya bir ilaç maddesinin bozunmasından kaynaklanabilir. İdeal bir saflık yöntemi, yukarıdakilerin tümünü hassas, kesin ve sağlam bir şekilde ayırmalı ve nicelendirmelidir.
Endüstride bu test için ortak standart, küçük moleküller için HPLC’dir. Bununla birlikte, HPLC benzer yapıya ve hidrofobikliğe sahip bileşikleri ayıracaktır. Kimyasal karakter bakımından çok farklı bazı yüklü bileşikler veya bileşikler, HPLC kolonunda geciktirilmeyecek, kolon başlığına adsorbe edilmeyecek veya kolondan ayrıştırmada çok geç kalacaktır.
Bu nedenle, bir ilaç maddesinin saflığını farklı bir ortogonal ayırma mekanizması sağlayan ayrı bir yöntemle değerlendirmek çok önemlidir. İlaç ürününün ortogonal taraması tavsiye edilebilir ancak günümüzde bir gereklilik değildir.
Ayrıca CE ve ince tabaka kromatografisi (TLC), orijinal enjeksiyon bölgesinde tutulan maddeleri tespit etme avantajına sahiptir. CE’de, ya basınç uygulanabilir ya da EOF’nin kendisi yüksüz ya da yavaş molekülleri dedektörden geçirir. Bu durumda, piklere enjeksiyon tıkacının kendisinden mi yoksa bileşikle mi ilgili olduğunu açıklamak için boş numune çözücü enjeksiyonu numune ile karşılaştırılmalıdır.
Ortogonal bir CE yöntemi geliştirilirken, halihazırda bilinen maddelerin ayrılmasına değil, olası yeni tanımlanmamış maddelerin tespiti üzerinde vurgu yapılmalıdır. Çeşitli ayırma ve saptama ilkelerine sahip bir dizi jenerik yöntemle bir tarama, tanımlanan tüm safsızlıkları ayırmak için geliştirilen tek bir yöntemden daha avantajlı olabilir.
Tablo 10, yayınlanmış veya literatürde bulunan basit jenerik yöntemlere ilişkin örnekler vermektedir. Ek olarak, kullanıma hazır ayırma kitlerinin kullanılması, test hazırlığı süresini kısaltacaktır. Sabit EOF’ye ve analizin daha yüksek tekrarlanabilirliğine yol açan stabilize edici dinamik kaplama kullanan CE ayırma kitlerindeki son gelişmeler, çeşitli satıcılardan (örn. Analis, Microsolv, TargetDiscovery) satın alınabilir.
Geliştirmenin erken bir aşamasında, yapısal olarak benzer bazı yan ürünlerin kimliği, toksikolojik olarak nitelikli olmasına rağmen bilinmemektedir. Bu durumda, bilinmeyen safsızlıkların pik alanları ilaç maddesininki ile karşılaştırılır. Daha sonraki geliştirmede, kimyasal yapılar tanımlandı, ilaç maddesinin tepe alanı ile ilgili safsızlıklar arasındaki bir düzeltme faktörü, genellikle ayrı bir deneyde her iki bileşiğin UV tepki faktörlerinin belirlenmesinden sonra hesaplanır.
Bu, her olası safsızlığı ayrı bir standart olarak enjekte etmek yerine, rutin analiz için yalnızca bir ilaç maddesi standardı kullanma avantajını sağlar. Bununla birlikte, her iki durumda da, ilaç maddesinin tüm konsantrasyon aralığı boyunca doğrusallığın kontrol edilmesi gerektiği belirtilmelidir. Doğrusal değilse, yüksek konsantrasyonlu standart çözelti ile karşılaştırıldığında pik alan yüzdesi veya kalibrasyonların kullanılması tavsiye edilmez. Bu durumlarda, olası safsızlık konsantrasyonu aralığında bir kalibrasyon standardı enjekte edilmelidir.
Kiral Saflık Testleri
CE’nin yüksek tepe kapasitesi, ayırma hızı ve çok sayıda kiral seçicinin mevcudiyeti ve sistemlerin basitliği temelinde kiral CE, kiral HPLC ayrımlarından üstündür. Bu, son yıllarda kiral CE ile ilgili çok sayıda yayın tarafından da yansıtılmaktadır. Kiral HPLC, düşük tepe kapasitesi (geniş tepe noktaları), sistem kararlılığı (genellikle normal faz sistemleri), sütunların basınç duyarlılığı (genellikle selüloz esaslı sütun malzemeleri) ve sonuç olarak uzun ayırma sürelerinden muzdariptir.
Teoriye göre, enantiyomerlerin ayrılması, CE ayırma tamponuna şiral bir katkı maddesi gerektirirken, diastereomerler de kiral seçici olmadan ayrılabilir. Kiral CE ayrımlarının çoğu, basit veya kimyasal olarak değiştirilmiş siklodekstrinlere dayanır. Bununla birlikte, şiral taç eterler, doğrusal oligo- ve polisakaritler, makrosiklik antibiyotikler, kiral kaliksarenler, kiral iyon eşleştirme maddeleri ve kiral yüzey aktif maddeler gibi diğer katkı maddeleri de kullanılabilir. Diastereomerlerin ayrılması için birkaç kiral olmayan ayırma örneği bulunabilir.