Deaminazın Aktivitesi – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
DENEY : Jelatinaz Aktivitesi
Jelatin basit bir proteindir. Çözelti içindeyken 25 ° C’nin üzerindeki sıcak sıcaklıklarda sıvılaşır. Oda sıcaklığında veya altında katı hale gelir. Jelatinaz enzimini üreten bakteriler bir jelatin ortamında büyüdüğünde, enzim jelatin molekülünü parçalar ve ortam soğuk havalarda bile katılaşamaz.
Jelatinaz üretimini saptamak için alternatif bir yöntem, yeşil bir jelatin emülsiyonu ile kaplanmış X-ışını filminin kullanılmasıdır. Jelatinaz üreten organizmalar, emülsiyonu şeritten çıkarır.
Amaç
Bakteri türlerini ayırt etmede jelatinaz testinin faydasını gözlemlemek
Malzemeler
Besleyici jelatin ortamı tüpleri
1 1⁄4 inç açıkta, gelişmemiş X-ışını filmi veya jelatin şerit şeritleri
0,5 ml steril salin içeren tüpler
Serratia marcescens ve Providencia stuartii’nin eğimli kültürleri
Prosedürler
1. İki kültürün her birini ayrı bir jelatin tüpüne inoküle edin, inokülasyon telini katı ortam kolonundan aşağı doğru deler.
2. İnoküle edilmiş tüpleri ve inoküle edilmemiş bir tüpü 35 ° C’de inkübe edin.
3. Wokültürlerin her birini 0,5 ml tuz ayrı bir tüpüne aşılayın.
4. Her salin süspansiyonuna bir X ışını veya jelatin film şeridi yerleştirin.
5. Tüpleri 35 ° C’de inkübe edin. Jelatin emülsiyonunun şeritten çıkarılması için 1, 2, 3, 4 ve 24. saatlerde gözlemleyin. Şeffaf şerit desteğinin müteakip görünümüne bakın.
6. 24 saat sonra, besin jelatintüplerini inceleyin. Aşılanmamış kontroller, iki aşılanmış kültürler sıvı olmalıdır. Üç tüpü de 30 dakika buzdolabına koyun. Bu sürenin sonunda tüm tüpler katılaşırsa, bunları inkübatörde değiştirin. Herhangi bir tüp sıvılaştırılmışsa ancak diğerleri katıysa, bu sonucu kaydedin.
7. Tüpler yeniden inkübe ediliyorsa, bunları 24 saatte bir inceleyin ve prosedür 6’da olduğu gibi her seferinde 30 dakika buzdolabına koyun.
Amonyaktan üre sentezi
Karaciğer üre amonyak
Ornitin Döngüsü
Karaciğerde üretilen ürenin izlediği yol
Ornitin transkarbamilaz
Üre döngüsü Biyokimya pdf
Üre oluşumu denklemi
Karbamoil fosfat sentetaz 1
Deoksiribonükleaz (DNaz) Aktivitesi
Bazı mikroorganizmalar, deoksiribonükleik asit (DNA) molekülüne saldıran bir enzim salgılar. Bu, substrat DNA’sını içeren plakalı bir agar ortamının, enzimi üreten bir organizma kültürü ile aşılanmasıyla gösterilebilir.
Aşılanmamış ortam opaktır ve kültür büyüdükten sonra da öyle kalır. Plaka daha sonra zayıf hidroklorik asitle doldurulursa, DNaz üreten kolonilerin çevresinde bir temizleme bölgesi belirir. Bu temizleme, büyük DNA molekülünün enzim tarafından parçalanması ve son ürünlerin eklenen asitte çözünmesi nedeniyle oluşur.
Bozulmamış DNA, zayıf asitte çözünmez, bunun yerine onun tarafından çökeltilir; bu nedenle, plakanın geri kalanındaki veya DNaz üretmeyen kolonilerin etrafındaki ortam daha opak hale gelir. DNA’nın DNaz tarafından parçalanmasını göstermenin bir başka yolu da plakayı% 0.1 toluidin mavisi ile doldurmaktır. Bozulmamış DNA maviye boyanacak ve DNaz üreten koloniler pembe bir bölge ile çevrelenecektir.
Amaç
DNase yapan ve üretmeyen bakteri türlerini ayırt etmek
Malzemeler
Bir DNA agar plakası
1 N HCl veya% 0.1 toluidin mavisi içeren damlalıklı şişe
Eğik Escherichia coli ve Serratia marcescens kültürleri
Prosedürler
1. DNA plakasını ikiye bölerek alt kısmına bir işaret koyun.
2. Plağın bir tarafını Escherichia coli ile yoğun bir şekilde aşılamak için eğik kısımdan büyümeyi etrafındaki dairesel bir alanda ovalayarak çeyrek büyüklüğünde oluşturun.
3. Plakanın diğer tarafını da aynı şekilde Serratia marcescens ile aşılayın.
4. Plakayı 35 ° C’de 24 saat inkübe edin.
5. Plakayı gelişim açısından inceleyin.
6. Sıvı ile ince bir şekilde kaplanana kadar agar yüzeyine 1 N HCl veya% 0.1 toluidin mavisi damlatın.
7. Plakanın her iki tarafındaki büyümenin etrafındaki alanları, açıklık veya opaklık kanıtı için veya varsa pembe bir renk için inceleyin, toluidin mavisi kullanın.
DENEY : Deaminazın Aktivitesi
Çoğu bakteri, spesifik olarak tek tek amino asitleri parçalayan bir dizi enzime sahiptir. İşlemde molekül üzerindeki amin grubu çıkarılır ve amino asit bozulur, reaksiyon deaminasyon olarak bilinir.
Bu tür bir değişikliği etkileyen deaminazlar, spesifik oldukları belirli amino asit substratı için adlandırılır. Bu deneyde, bazı bakteriler tarafından üretilen bir fenilalanin deaminazın (PDase) etkilerini göreceğiz.
Amino asit fenilalanin, PDaz üreten bakterilerin büyüdüğü bir kültür ortamına dahil edildiğinde, substrat fenilpirüvik aside indirgenir.
Reaksiyon, yeşil bir bileşik oluşturmak için yeni üretilen asitle reaksiyona giren ferrik iyonlar eklenerek görünür hale getirilir. Aşılandığında renksiz olan bir besiyerinde yeşil bir rengin görünümü, deaminaz aktivitesinin kanıtıdır.
Amaç
PDaz’ın aktivitesini gözlemlemek ve onu üreten bakterileri üretmeyenlerden ayırt etmek
Malzemeler
Fenilalanin agar eğimleri
% 10 demir klorür içeren damlalıklı şişe
Eğik Escherichia coli ve Providencia stuartii kültürleri
Prosedürler
1. İki kültürün her birini ayrı bir fenilalanin agar eğimi üzerinde inoküle edin.
2. Yeni kültürleri 35 ° C’de 24 saat inkübe edin.
3. Tüpleri yoğun gelişim açısından inceleyin. Yeterliyse, her yatağın yüzeyine birkaç damla% 10 demir klorür çözeltisi dökün.
4. Yeşil renk oluşması için tüpleri gözlemleyin.
Sorular
1. Katalizör nedir?
2. Enzim ve alt tabakayı tanımlayın.
3. Üreaz varlığında üreye ne olur?
4. Katatal reaksiyonun alt tabakası nedir? Neden apositivekatal testte kabarcık üretilir?
5. Organizmalar kan içeren bir ortamda test ediliyorsa neden yanlış pozitif katalaz testi sonuçlanır?
6. Jelatinaz varlığında neden jelatin sıvılaştırılır?
7. Pozitif bir DNase testini açıklayın.
8. Deaminaz nedir?
9. Her enzim için onu üreten bir bakteri türünü belirtin.
Mikroorganizmaların Saptanması ve Tanımlanması için Antijen Tespiti ve Nükleik Asit Testlerinin Prensipleri
16–18 Egzersizlerinde gördüğünüz gibi, çoğu bulaşıcı hastalığın laboratuvar tanısı kültürde izolasyonu ve ardından klinik bir örnekten bir mikrobiyal ajanın tanımlanmasını içerir.
Tanılar, daha sonra Egzersiz 33’te öğreneceğiniz gibi, bir hastanın serumundaki antikorları tespit ederek de yapılabilir. Bu geleneksel prosedürlerin bazılarının yerini, mikroorganizmaların veya bunların ürünlerinin varlığını doğrudan hasta örneklerinde tespit eden yeni ve daha hızlı yöntemlerle yerleştirilmektedir.
Ayrıca kültür dışı yöntemler olarak adlandırılan bu yöntemler, kültürde halihazırda üreyen organizmaları tespit etmek için biyokimyasal testler yerine kullanılabilir. dakikalar veya saatler içinde yapılabilir.
Böylece sonucun hekime bildirilme süresi kısalmakta ve hastaya uygun tedavi daha erken uygulanabilmektedir.
Amonyaktan üre sentezi Karaciğer üre amonyak Karaciğerde üretilen ürenin izlediği yol Karbamoil fosfat sentetaz 1 Ornitin Döngüsü Ornitin transkarbamilaz Üre döngüsü Biyokimya pdf Üre oluşumu denklemi