Koagülopatilerde Genetik Anormallikler
Hemoglobinopatilere gelince, kan pıhtılaşması ile ilişkili anormalliklere yol açan artan sayıda hastalığa özgü mutasyon tanımlanmıştır. Pıhtılaşma faktörlerini kodlayan genlerdeki nokta mutasyonlarının gösterilmesi, tanısal ve ailesel tarama çalışmaları için kullanılır.
Yaygın olarak kullanılan bir test, faktör V Leiden mutasyonunun PCR tabanlı tespitidir. Normal popülasyonun %2-6'sının bu mutasyonu taşıdığı tahmin edilmektedir ve alellerin homozigotluğunun 80 kat artmış tromboz riski taşıdığı bildirilmektedir.
Mutasyonun tespiti, biri hem normal faktör V hem de FV Leiden için tamamlayıcı olan bir sens primeri ve normal FV aleli veya FV Leiden aleli için tamamlayıcı olan ikinci bir antisens primeri olan diziye özgü primerleri kullanır.
FV genotipinin doğası daha sonra, normal veya FV Leiden'e özgü primer, amplifiye edilmiş bir ürün üreteceğinden, amplifikasyon ürünlerinin analizi ile belirlenebilir.
Özet
Akış sitometrisi ve moleküler biyoloji, lösemi ve lenfoma tanısında birlikte hayati bir rol oynamıştır. Belirli hematolojik bozukluklarla ilişkili anormal immünofenotipik ve genetik belirteçlerin tanınması, hematolojik maligniteler için sınıflandırma sisteminin yeniden analizine yol açmıştır.
Yakın zamanda yayınlanan Dünya Sağlık Örgütü (WHO) sınıflandırma sistemi bu gelişmeleri daha fazla dikkate almakta ve morfolojik gözlemlerle birlikte immünolojik ve genetik özelliklerden yararlanmaya çalışmaktadır. Bu, prognoz ve tedavi modaliteleri açısından daha klinik değeri olan bir sınıflandırma sistemi üretir.
Bu hastalıkların tedavisinde gelecekteki atılımlar, hastalığın spesifik immünolojik veya genetik özelliklerini hedefleyebilecek modalitelerden gelecektir. Farklı hastalık oluşumları içinde bile, belirli bir hasta için kesin prognostik görünümün, bazıları henüz tanımlanamayan birçok genin ekspresyonunu içeren çeşitli faktörlere bağlı olduğu açıktır.
Heyecan verici bir gelişme, binlerce genin nicelleştirilmesine izin veren DNA mikrodizileri tekniğini içerir. Farklı genler, katı bir substrat üzerindeki cDNA fragmanları ile temsil edilir ve bunlardan binlerce tanesi tek bir cam slayt üzerine yerleştirilebilir.
Etiketli cDNA veya RNA probları hastanın hücrelerinden hazırlanır ve mikrodiziye hibridize edilir. Mikrodizi elemanına hibritlenen prob miktarı, hastanın hücresindeki karşılık gelen genden mRNA ekspresyonu ile orantılıdır.
Gen ifadesinin bu son derece güçlü, geniş resmi gelecekte kesinlikle bize malign süreçte yer alan faktörler hakkında artan bir bilgi sağlayacak ve umarım hematolojik neoplazmların tedavisinde gelişmelere yol açacaktır.
Kobalamin nerede satılır
Kobalamin hangi besinlerde bulunur
Metilkobalamin siyanokobalamin farkı
Metilkobalamin içeren ilaçlar
Günlük B12 ihtiyacı
Kobalamin eksikliği
Kobalamin Nedir
Metilkobalamin B12
Hematinik İncelemeler
Anemi, kan kaybından, kırmızı hücrelerin yok edilmesinden veya kırmızı hücre üretimindeki bir başarısızlıktan kaynaklanabilir. Hücre üretememe en sık olarak "hematinik" demir, vitamin B12 ve folatın ayrı veya birleşik eksikliklerinden kaynaklanır. B12 Vitamini, kimyasal adı olan kobalamin ile daha iyi bilinir ve burada isimlendirme kullanılır.
Aneminin laboratuvar araştırması için başlangıç noktası kan sayımıdır. Makrositoz ve pansitopeni, kobalamin ve folat eksikliğinin neden olduğu megaloblastik anemilerde karakteristik bulgular iken, mikrositoz ve hipokromi demir eksikliğini karakterize eder.
Kan ve kemik iliğinin mikroskobik incelemesi karakteristik bulgular verir, ancak megaloblastik anemi durumunda folat ve kobalamin eksikliğini ayırt edemez.
Kandaki vitaminlerin ve demirin ölçümü önemli bir değere sahiptir, ancak sonuçlar folat ve kobalamin arasındaki olası etkileşimlere, birlikte var olan diğer patolojilere, bağlayıcı proteinlerin etkilerine ve hafif eksiklik durumlarının olası varlığına dayalı olarak dikkatli bir yorum gerektirir.
Demir durumunda, yeterli demir depolarının varlığında fonksiyonel bir eksiklik meydana gelebilir. Tüm bu faktörler, tespit edilen eksikliklerin nedeninin açıklığa kavuşturulmasına ve demir fazlalığının araştırılmasına yönelik yöntemler ile birlikte kısaca tartışılmaktadır.
Kobalamin (B12 vitamini) ve Flat
Kobalamin ve folat, bir dizi tek karbon transferi için esastır ve mevcut bağlamda bunların en önemlileri DNA sentezi ile ilgilidir. İki vitamini içeren metabolik yolların basitleştirilmiş bir görünümü Şekil 33.1'de gösterilmektedir. Folatın aktif formu tetrahidrofolattır (THF) ve bu, 5-metil THF (>N–CH3), 5,10-metilen THF (>N–CH2–N<) gibi farklı oksidasyon durumlarındaki tek karbon birimini taşır ve kullanır.
Pürinlerin sentezinde tek bir karbon eklemesi (formattan 10-formil THF yoluyla) iki kez gereklidir ve pirimidin sentezinde üridinin timidine dönüştürülmesinde metilen THF kullanılır. 5-metil THF ve kobalamin, homosisteinin metionine metilasyonu için birlikte gereklidir.
Metiyoninin çoğu ayrıca DNA, RNA, hormonlar, nörotransmiterler, membran lipidleri ve miyelin bazik proteini içeren çok çeşitli metilasyon reaksiyonlarında gerekli olan evrensel bir metil grubu donörü olan S-adenosilmetiyonine dönüştürülür.
Bu son işlevin başarısızlığı, ciddi kobalamin eksikliği ile ilişkili kordun subakut dejenerasyonu ile sonuçlanır. Kobalamin ayrıca metilmalonik asidi süksinik aside dönüştüren mutaz için temel bir kofaktördür.
Hem kobalamin hem de folat, kanda proteine bağlı formlarda bulunur. Kobalamin için ana bağlayıcı protein, transkobalamin II'dir. Kronik miyelojenöz lösemide, granülositler tarafından büyük miktarlarda üretilen transkobalamin III, sahte olarak yüksek ölçülen serum kobalamin konsantrasyonlarına neden olabilir.
Kanda Kobalamin ve Folat Analizi
Laboratuvar analiz yöntemleri, genellikle çok sayıda numuneyi analiz etme ihtiyacından güçlü bir şekilde etkilenir. Bu, manuel müdahale gerektiren prosedürlere veya sürekli otomatik bir sürece kolayca dahil edilemeyen adımlara engel olur.
Her iki vitaminin analizi için erken yöntemler, vitaminlerden birine mutlak gereksinim duyan organizmaların büyümesine bağlıydı. Kobalamin için bu Euglena gracilis veya Lactobacillus leichmannii ve folat için klorofenikole dirençli Lactobacillus casei idi.
Büyüme, gerekli tüm diğer besinlerin fazla olduğu kültür ortamının bulanıklığındaki artışla ölçülmüştür. Bu tahliller biyolojik olarak aktif vitaminin bir ölçüsü olarak hala değere sahip olsa da, rutin uygulamada rekabetçi protein bağlama tahlilleri ile değiştirilmiştir.
Rekabetçi protein bağlama deneyleri
Bu tahlillerin prensibi, kobalamin açısından özetlenebilir ve şematik olarak gösterilmektedir. Kobalamini güçlü ve spesifik olarak bağlayan bir protein, doğal kobalamin (örnek) ve etiketli bir kobalamin karışımına eklenir. Bağlayıcı protein, vitamin ve etiketli analogundan önemli ölçüde daha düşük bir konsantrasyonda bulunur.
Mikroorganizmaların Saptanması ve Tanımlanması için
Antijen Tespiti ve Nükleik Asit Testlerinin Prensipleri
Kültür dışı teknolojilerin klinik değerlendirmeleri, bunların rutin kültür kadar güvenilir ve bazı durumlarda daha iyi olduğunu göstermiştir (yani, aranan mikropu tespit etmede daha hassas). Sonuç, canlı, çoğalan organizmaların büyümesini gerektirmez, sadece belirli mikrobiyal hücre yapılarının veya ürünlerinin tespitini gerektirir.
Diğer bir avantaj, bu yöntemlerin, henüz laboratuvarda yetiştirilemeyen bulaşıcı ajanları tespit edebilmesidir. Önemli bir örnek, hastane ortamında hızla yayılan infantil ishalin yaygın bir nedeni olan rotavirüstür.
Bu viral ajan artık hızlı, kültürsüz bir yöntemle doğrudan bebek dışkı örneklerinde tespit edilebildiğinden, tanınması olası çapta bulaşmayı önlemeye yardımcı olur.
Genellikle iki tür kültür dışı yöntem mevcuttur. Tiplerden biri, klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarında günlük kullanıma giren bir teknoloji olan mikrobiyal antijenlerin saptanmasına dayanır.
Bölüm VIII’de yapacağınız deneylerde bazı örnekler yer almaktadır. İkinci tür kültür dışı yöntem, mikrobiyal nükleik asitleri tespit etmek için, bazen bir hasta örneğinde bulunan küçük miktarlarda mikrobiyal DNA veya RNA’yı büyük ölçüde genişleten (büyüten) tekniklerle kombinasyon halinde problar kullanır.
Bu tartışma, bu antijen saptama ve nükleik asit analizlerinin prensiplerini anlamanıza yardımcı olacaktır.
Antijen testi
Antijen Nedir
PCR testi
Antikor Nedir
Antikor testi
Antikor testi sonucu
Antikor değeri kaç olmalı
Igm pozitif ne demek
Antijen Tespit Testleri
Tüm mikroorganizmalar, bileşimleri doğası gereği genellikle protein veya karbonhidrat olan çeşitli farklı antijenler içerir. Antijenler, mikrobiyal hücre duvarı, kapsül veya hücre içi veya hücre dışı enzimlerin bileşenleri olabilir.
Hayvan vücudunda, bu antijenler, antikor adı verilen spesifik protein molekülleri üreterek yanıt veren konakçı bağışıklık sistemi tarafından yabancı maddeler olarak tanınır. Antikorlar, üretimlerini ortaya çıkaran antijene spesifik olarak bağlanır.
Örneğin, Egzersiz 7’de, bastırma reaksiyonunda kendine özgü antikoru ile bağlanan Streptococcus pneumoniae’nin antijenik karbonhidrat kapsülünü öğrendik.
Spesifik bir mikrobiyal antijenin varlığını tespit etmek için bir antikorun kullanılması, immünoassay olarak adlandırılır. İmmünolojik testlerin hassasiyeti, anti-vücut preparatının kalitesine bağlıdır.
İmmünolojik testlerin erken geliştirilmesinde, antikor preparatları yalnızca belirli bir mikroorganizma üzerinde belirli bir antijenle (antijenik belirleyici olarak bilinir) reaksiyona girecek kadar saf değildi.
Sonuç genellikle, ortak bir antijenik determinantı paylaştıkları için test edilenin dışında bir mikroorganizmanın tespit edildiği yanlış pozitif bir reaksiyondu.
İmmünolojideki gelişmeler sayesinde, monoklonal antikor olarak bilinen daha spesifik bir antikor türü artık büyük miktarlarda üretilebilmektedir.
Daha önce kullanılan poliklonal antikorların aksine, monoklonal antikorlar, bir mikroorganizmaya özgü olan ve başkaları tarafından paylaşılmayan antijenik belirleyicilerle reaksiyona girer.
Sonuç olarak, yanlış pozitif test reaksiyonları büyük ölçüde azalır ve artık klinik mikrobiyoloji laboratuvarında çok çeşitli antijen saptama testleri gerçekleştirilebilir.
Birçok immünolojik test mevcuttur, ancak üç ana tip ortak kullanımdadır: immünofloresans, lateks aglütinasyonu ve enzim immün testi veya EIA.
Bu immünolojik testler için, monoklonal antikorlar, bir antijen-antikor reaksiyonunun gerçekleşip gerçekleşmediğini saptamak için bir yol sağlayan bir “işaretçi” molekül ile etiketlenir (buna eklenir). Poliklonal vücut önleyici preparatlar bazen özel amaçlar için kullanılır. Bu üç ifadenin ilkeleri kısaca açıklanmıştır.
İmmünofloresan
İmmünofloresan testlerinde, antikorlar floresan adı verilen bir floresan boya ile etiketlenir. Antikorlar, bir preparatta kendi spesifik antijenleri ile birleştiğinde, parlak floresans, bir ultraviyole aydınlatıcı ve özel filtreler ile donatılmış bir floresan mikroskobu ile görselleştirilebilir.
Test, bir klinik numunenin bir smearını bir mikroskop lamı üzerine yerleştirerek ve uygun bir reaktifle sabitleyerek gerçekleştirilir. Doğrudan floresan antikor (DFA) testi olarak bilinen en basit yöntemde, floresan etiketli antikor preparasyonu doğrudan numune lamına uygulanır, daha sonra inkübe edilir, yıkanır ve flüoresan mikroskobu altında görüntülenir. Pozitif bir test, preparasyonda parlak şekilde floresan veren organizmaların varlığı ile gösterilir.
Dolaylı floresan antikor (IFA) testi için iki antikor preparatına ihtiyaç vardır. Floresan boya ile işaretlenmemiş olan ilki, tespit etmek istediğimiz mikrobiyal ajana karşı antikorlar içerir.
Örnek yaymada ajan varsa antijen-antikor reaksiyonu oluşur. Bu kombinasyonu saptamak için fluoresin ile etiketlenmiş ikinci antikor preparasyona uygulanır.
Bu ikinci antikor, birinci, etiketlenmemiş antikor ile reaksiyona girecek şekilde hazırlanmıştır. Yine, pozitif bir sonuç mikroskop altındaki parlak floresan ile gösterilir.
Doğrudan ve dolaylı floresans analizlerinin prensibini göstermektedir. Floresan antikor testleri, bakteriler, virüsler ve protozoa dahil çeşitli mikrobiyal ajanların neden olduğu enfeksiyonları teşhis etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır.
Lateks Aglütinasyonu
Lateks aglütinasyon tahlillerinde, antikorlar, antijen-antikor etkileşimini saptamak için işaretçi olarak görev yapan lateks (polistiren) taneciklere eklenir. Her bir lateks partikülünün çapı yaklaşık 1 mm’dir ve binlerce antikor molekülü ile yüklenebilir.
Antikor kaplı latex partikülleri süte benzer bir süspansiyon oluştururlar, ancak spesifik antijen içeren bir preparatla karıştırıldıklarında ortaya çıkan antijen-antikor kompleksi, görünür kümelenme ile sonuçlanır. Lateks partikül aglütinasyon reaksiyonu ile ilişkili olayları gösterir.
Lateks aglütinasyon testleri genellikle küçük hacimlerde lateks partikülleri ve sıvı klinik numune kullanılarak bir cam slayt veya özel olarak işlenmiş bir karton yüzey üzerinde gerçekleştirilir.
Reaktif, bir karıştırıcı kullanılarak klinik numune ile karıştırılır ve lam, lateks partiküllerinin kümelenmesi açısından görsel olarak incelenmeden önce elle birkaç dakika sallandırılır veya mekanik bir cihazla döndürülür. Renkli plaka 24, pozitif ve negatif lateks aglütinasyon slayt testlerinin görünümünü göstermektedir.
Klinik laboratuvarlarda, lateks aglütinasyon testleri, doğrudan serum veya beyin omurilik sıvısı örneklerinde çözünür mikrobiyal antijenleri tespit etmek veya kültür plakalarından geri kazanılan çeşitli bakteri türlerini tanımlamak için kullanılır.
(a) Direkt floresan antikor (DFA) testinde, aranan mikroorganizmaya özgü antikor, boya floresein ile konjuge edilir. Antikor preparatı, bir slayta sabitlenmiş bir numuneye eklenir. Spesifik mikroorganizma mevcutsa, preparat bir floresan mikroskobu altında görüntülendiğinde floresan olacaktır.
(b) Dolaylı floresan antikor (IFA) testinde, mikroorganizmaya özgü antikor, boya ile konjuge değildir, ancak slayt üzerindeki spesifik mikroorganizmaya bağlanacaktır. Floresein ile etiketlenmiş ikinci bir antikor preparatı, birinci, etiketlenmemiş antikor ile reaksiyona girecek şekilde hazırlanmıştır ve mikroskobik olarak bakıldığında floresan verecektir.