G6PD Eksikliği (Glukoz 6-fosfat dehidrojenaz)
Kırmızı hücre, glikoz metabolizmasının pentoz fosfat şant yolundaki ilk enzimin eksikliğinden dolayı azaltılmış bir indirgeyici enerjiye sahiptir. Genellikle cinsiyete bağlı çekinik bir durumdur: hastalık erkeklerde X kromozomunda bir etkilenmiş genle ifade edilir, ancak dişilerin etkilenmiş iki gene ihtiyacı vardır.
Bir tanesi etkilenen dişiler, Lyon hipotezine göre, hangi hücrelerde hangi X kromozomunun inaktive edildiğine bağlı olarak değişken ekspresyon gösterecektir. Çoğunlukla siyahi ve Akdenizli popülasyonlarda görülür ve dünya nüfusunun %3'ünü etkiler. G6PD aktivitesi retikülositlerde mevcuttur ancak bu bireylerde hızlı ve erken düşer.
Bu nedenle oksidan kimyasallara ve ilaçlara (örn. sülfonamid antibiyotikler) maruz kalındığında kırmızı hücre bütünlüğü azalır. Heinz cisimleri özel olarak hazırlanmış kan filmlerinde görülür. Teşhis, G6PD testiyle yapılır, ancak yalnızca kararlı durumda (hemolitik krizlerden sonra olduğu gibi aşırı sayıda retikülosit olduğunda değil). Bazı bölümlere yiyecekler (klasik olarak bakla - 'favizm') ve ilaçlar neden olur.
6GPD eksikliği için tarama
Pentoz fosfat yolu içinde NADP, G6PD tarafından NADPH'ye indirgenir. Bu ürün ultraviyole ışık altında floresan verir. Bu, floresan nokta testinin temelini oluşturur.
Tam kan aşağıdakilerle karıştırılır:
Glikoz 6-fosfat.
NADP.
Parçalayıcı ajan (genellikle saponin)
Tampon
Daha sonra filtre kağıdına lekelenmeden önce 5-10 dakika inkübe edilir, kurutulur ve uzun dalga UV ışığı altında incelenir. Normal numuneler parlak bir şekilde flüoresans yapacak, eksik numuneler flüoresan etmeyecek veya sadece zayıf olacaktır. Herhangi bir anormal tarama testi, bir G6PD testi ile onaylanmalıdır; burada G6PD tarafından NADPH üretimi, optik yoğunlukta zaman içinde bir değişiklik ile spektrometrik olarak ölçülür.
Enzim eksikliği olanlar ne yememeli
G6PD eksikliği diyet
G6PD eksikliği askerlik
G6PD eksikliği anestezi
glukoz 6-fosfat dehidrogenaz nedir
Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
bebeklerde glukoz-6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
Enzim eksikliği öldürürmü
Piruvat kinaz eksikliği
Piruvat kinaz eksikliği "otozomal resesif" bir durumdur (her iki genin anormal olması, bir kişinin durumu kalıtım yoluyla alması) ve başka bir enzim sorunudur - daha nadir görülen G6PD dışı hastalıkların en yaygınıdır. Hücreler deforme olur ve savunmasız hale gelir. Kan filmi poikilositleri (anormal şekilli kırmızı hücreler) gösterir ve bunlar bir ilaç uyarısı olmadan kendiliğinden hemolizlenir. Transfüzyon gerekebilir.
Piruvat kinaz eksikliği taraması
Piruvat kinaz, reaksiyonun katalizörüdür: ADP + fosfoenolpiruvat ! ATP + piruvat
Bu reaksiyonun ürünü olan piruvat daha sonra laktat dehidrojenaz (LDH) tarafından katalize edilen aşağıdaki reaksiyona ilerler:
Piruvat ş NADH ! laktat + NAD
NADH, uzun dalga UV ışığı altında floresan verirken NAD olmaz. Bu nedenle, tam kan ADP, fosfoenolpiruvat ve NADH ile inkübe edildiğinde, normal numunelerde NADH, sonuçta bir floresan kaybıyla NAD'ye oksitlenir. Eksik numuneler parlak bir şekilde floresan verecektir.
Anormal bir PK tarama testi, NADH'nin NAD'ye oksidasyonunun zaman içinde fotometrik olarak absorbanstaki bir değişiklikle ölçüldüğü, enzimin tam bir tahlili ile teyit edilmelidir.
Bağışıklık Hemolizleri
Çeşitli koşullar (Tablo 34.4'te listelenenler gibi), daha kısa bir ömre sahip olan antikor kaplı kırmızı hücrelerle sonuçlanır. İmmün hemoliz, laboratuvardaki termal aktivite (ve aglütinasyon) aralığına bağlı olarak laboratuvarda 'sıcak' ve 'soğuk' tiplere ayrılır, klasik olarak ılıkta 37 C ve soğukta 4 C, ancak bazen küçük örtüşmedir.
Pozitif olacak (DCT, Şekil 34.4) geniş bir tarama doğrudan Coombs (anti-globulin) testinin yanı sıra, sıcak immün hemolizde daha spesifik bir profil (IgG, kompleman) veren reaktifler kullanılabilir. Soğuk immün hemoliz şüphesinde, kan örneğini serum ayrılana kadar sıcak tutmak, ardından yetişkin (antijen içeren) ve göbek bağı (antijen taşıyan) hücrelere karşı test etmek olağandır.
DCT genellikle sadece kompleman reaktifi ile pozitiftir ve kan filmi, ısıtılmadıkça aglütinasyon gösterir. Sıcak ve soğuk koşullar arasındaki ayrım tedavi için önemlidir. Sıcak immün hemolizlerde, antikor üretiminin etkisini durdurmayı veya buna müdahale etmeyi amaçlayan steroidler ve diğer immünosupresif tedaviler genellikle yararlıdır.
Splenektomi sıklıkla işe yarar. Bununla birlikte, soğuk immün hemolizlerde sitotoksik kemoterapi (bazen) ve hastayı sıcak tutmak (neredeyse her zaman) yardımcı olur, ancak steroidler veya splenektomi değil. Otoaglütinasyon çapraz eşleşmeyi engellediğinden, immün hemolizde genellikle transfüzyondan kaçınılır.
Hastanın klinik durumu zaman zaman transfüzyon gerektirir ve kesinlikle kırmızı hücre eksikliği nedeniyle yenik düşmesine izin verilmemelidir, bu durumda 'en az uyumsuz' kan verilir.
Yenidoğanın hemolitik hastalığı (HDN)
Rh+ fetüsündeki Rh-pozitif hücreler, Rh annenin dolaşımına geçer, örn. hamilelik sırasında kanama veya düşük yapma tehdidi. Bu, annenin anti-D (anti-rhesus) antikorları üretmesine neden olur ve bu antikorlar daha sonra aynı veya sonraki gebeliklerde fetüse geçer ve kırmızı hücreleri kaplar ve bebek Rh+ ise hemolize neden olur.
ABO grubu uyumsuzlukları benzer sorunlara neden olabilir, ancak daha az önemdedir. Doğumdan sonra yüksek konjuge olmayan bilirubin seviyeleri (hemolize bağlı olarak) kan-beyin bariyerini geçecek ve beyin hasarıyla birlikte 'kernikterus'a neden olacaktır. Değişim transfüzyonunu içerebilen tedavi bunu önleyecektir.
Kan filminde sferositler görülebilir ve DCT pozitif olacaktır. Ağır vakalarda bebek hidropik olacaktır (anemi/sarılık/ödemle şişmiş). Potansiyel feto-maternal kanama zamanlarında, annenin antikor üretimi, Rh+ hücrelerini temizlemek için intramüsküler enjeksiyon yoluyla anti-D'nin pasif olarak uygulanmasıyla engellenebilir, bu da annenin kendi yanıtını üretmesini engelleyecektir.
Anti-D'nin bu şekilde profilaktik kullanımı, modern bilimsel tıbbın başarı öykülerinden biridir, bu nedenle etkilenen bebekler artık nadirdir. Bunlar intrauterin transfüzyon (zor bir manevra!) veya yenidoğanın değişim transfüzyonu ile erken doğum indüksiyonu ile tedavi edilebilirler.
Uyumsuz Transfüzyon
Uyumsuz transfüzyon, immün aracılı bir hemoliz oluşturur. ABO uyumsuzluğunda (çok nadir görülen bir durumdur, ümit edilir) hastanın doğal olarak oluşan anti-A veya anti-B antikorları (veya her ikisi) nedeniyle donör hücreler intravasküler olarak yok edilir.
Hasta daha önce tarif edildiği gibi çok hızlı bir şekilde hastalanabilir ve hemoglobinüri geliştirecektir. Transfüzyon durdurulmazsa veya hasta anestezi altındaysa, durum ölümcül olabilir.
Diğer antijenlere bağlı uyumsuzluk reaksiyonları genellikle anemi ve sarılık ile ekstravasküler hemolize neden olur. İyileşme olağandır ancak alyuvar antijenlerine karşı allo-antikorlar nedeniyle bundan sonra çapraz eşleşme sorunları olacaktır.
Spesifik Olmayan Antikor Bağlanması
Okuyucular, birincil antikorların, büyük ölçüde Fc fraksiyonları aracılığıyla doku kesitlerine spesifik olmayan şekilde bağlanabileceğine dikkat etmelidir. Sorunun poliklonalde meydana gelmesi monoklonal reaktiflerden çok daha fazladır. Bu genellikle uygun, bağışık olmayan serum ile “bloke etme” yoluyla üstesinden gelinebilir.
“Antijen Alma” Yöntemleri
Enzim ön işlemi
1970’lerin sonlarında, immün boyamanın, sıklıkla, pronaz veya tripsin gibi belirli proteolitik enzimlerle ön işleme tabi tutulmasıyla güçlendirilebileceği bulundu. Bu tür işlemlerin kesin temeli belirsizdir, ancak belirli antijenik grupların, önleyen yan zincirlerin çıkarılmasıyla biyokimyasal olarak “maskesinin kaldırıldığı” ve birincil antikora erişim sağlandığı varsayılmaktadır. Enzimler oldukça litiktir ve düzenli kullanımdan önce “titrasyon”, doku bozulmasını önlemek için gereklidir.
Mikrodalga ön işlem
1990’larda belirli epitopların sulu ortamdaki doku kesitlerinin kontrollü mikrodalga ışıması kullanılarak uygun bir şekilde “maskesinin kaldırılabileceği” ortaya çıktı. Enzim ön işleminde olduğu gibi, mikrodalgaların başarısının ardındaki mekanizma açık olmaktan uzaktır; yine de, bu teknik son birkaç yılda çok geniş uygulama alanı bulmuştur.
Enzim yöntemleri gibi, mikrodalga tedavisi de yalnızca bazı durumlarda belirli antijenlerin görselleştirilmesini iyileştirmekle kalmaz, aynı zamanda daha önce hiçbiri mümkün olmadığında saptamayı da sağlayabilir. Enzim muamelesinde olduğu gibi, mikrodalga zamanlamasının “titrasyonu” gereklidir.
Bir başka yeni gelişme, immün boyamayı iyileştirmek için bölümlerin basınçla pişirilmesinin kullanılmasıdır. Bu muhtemelen mikrodalga fırınların dikkatli kullanımından daha tehlikelidir! Basınçlı pişirme ayrıca mikrodalga fırınlarda da yapılabilir; otoklavlama, buharda pişirme ve basit kaynatma da bazı merkezlerde kullanılmıştır.
Geri alma metodolojisi ile, slayt yüzeyinden doku kaybını önlemek için önceden kaplanmış mikroskop slaytlarının kullanılması esastır. Pozitif yüklü slaytlar ticari olarak mevcuttur; alternatifler arasında slaytların poli-L-lisin, APES veya Vectabond ile kaplanması yer alır.
Antijen Nedir
antijen-antikor nedir
Antijen-antikor birleşmesi
Antijen-antikor reaksiyonları
İmmünolojik yöntemler nedir
İmmünokimyasal yöntemler
antijen-antikor birleşmesi özellikleri
Antijen çeşitleri
Kontroller
Herhangi bir yeni antikoru test etmeden önce belirli temel kontrollerin kurulması çok önemlidir ve ideal olarak, bu kısıtlamalardan en azından bazıları günlük tanı temelinde uygulanmalıdır. Pozitif kontroller, söz konusu antikor ile reaktif elementlere sahip olduğu bilinen bölümlerin dahil edilmesini içerir.
Bu, günlük teşhis IHC’de en önemli ve düzenli olarak kullanılan kontroldür. Bazen, bilinen pozitif kontrollerin küçük parçalarını içeren ve test bölümü ile aynı slayda monte edilen kompozit parafine balmumu gömülü doku bloğu hazırlamak yararlıdır. Bu, patoloğun aynı anda hem pozitif hem de negatif boyanmış yapıları görmesini sağlar.
Teşhis veya araştırma kullanımından önce yeni bir antikor değerlendirildiğinde, bir dizi daha titiz kontrol gereklidir. Bunlar şunları içerecektir: saf antijen / epitop ile “bloke etme” (yani, anti-cismi hedef antijeni ile önceden adsorbe etme); birincil antikorun ihmal edilmesi (veya izotip uyumlu bir kontrol ile değiştirilmesi) veya tek başına kromojenik reaksiyonun sekansında ve uygulamasında başka antikorlar. Bu tür kontroller, birincil antikor bağlanmasının özgüllüğünü ve pozitif bir reaksiyon sonucunda var olma ihtiyacını kontrol eder.
Çift Etiketleme Yöntemleri
Belirli bir hücre veya dokuda birden fazla antijen veya epitop gösterebilmek genellikle önemlidir. Bir örnek (kappa) ve! (lambda) hafif zincirler bir lenfositoid lezyonda klonaliteyi belirlemek içindir.
Sorulan soru elbette “İyi huylu veya kötü huylu lenfoid doku bölümü mü?” Bir bölümdeki hücrelerin içinde / üzerinde monoklonalitenin sergilenmesi günlük terimlerle maligniteyi göstermelidir ve bunu gösterme veya gösterememe yeteneği hasta yönetimini etkileyecektir.
Birden fazla antijen / epitopu göstermek için, farklı renklerde kromojenik substratlar kullanılır ve preparat buna göre değerlendirilir. IHC ayrıca ‘AgNOR yöntemi, geleneksel histokimya ve in situ hibridizasyon gibi diğer tekniklerle birleştirilebilir.
Poliklonal karşı monoklonal antikorlar
IHC ile ilgili ilk çalışmalar, memelilerde antijenik preparatlara karşı yetiştirilen poliklonal antiserumlar kullanılarak gerçekleştirildi. Bu antiserumlar, polipikti ve bu nedenle, farklı kurucu antikorların oldukça değişken mikroskobik bölgelere bağlanmasıyla, kesitler üzerinde genellikle “temiz” olmayan boyama modelleri verme eğilimindeydi.
Poliklonal antikorun hedef antijeni içeren, matrise bağlanan bir kolondan geçirildiği “afinite saflaştırma” yöntemi, reaktiflerin spesifitesini geliştirdi. Monoklonal antikorların ortaya çıkmasıyla, epitopların çok daha ‘daha temiz’ ve daha spesifik lokalizasyonu ve böylece hücre ve doku türlerinin daha iyi tanımlanması mümkün hale geldi.
Bununla birlikte, önemli bir erken sorun, birçok poliklonal antikorun aksine, monoklonal antikorların çoğunun rutin, arka parafine gömülü kısımlara başarılı bir şekilde uygulanamamasıydı.
Buna göre, ilk çalışmaların çoğu, nispeten zayıf morfolojik koruması ile donmuş kesit malzemesinin mevcudiyetine bağlıydı. Ancak günümüzde, yüksek afiniteli monoklonal antikorların ortaya çıkmasıyla, çoğu, özellikle antijen geri kazanma yöntemlerinin kullanılmasının ardından parafin kesitlerine başarıyla uygulanabilmektedir.
Bununla birlikte, donmuş kesitler, parafin balmumu kesitlerine göre hala bir avantaj sunabilir, çünkü ilki, yüzey antijenlerinin daha iyi görselleştirilmesini sağlayabilir.
İmmünohistokimya uygulamaları
Teşhis laboratuarında IHC’nin sayısız uygulamasının kapsamlı bir açıklamasını vermek bu kitabın kapsamı ve amacının çok ötesinde olacaktır. Bu teknolojinin tanıda ve rutin hücresel patolojide prognozun bir göstergesi olarak kullanılabileceğini söylemek yeterli.
IHC, lenfomalar ve küçük hücreli karsinomlar, melanomlar ve seminomlar, mezotelyomalar ve adenokarsinomlar ve B ve T hücreli lenfomalar arasında ayrım yapmamızı sağladı. Ayrıca, Sitomegalovirüsten Toxoplasma’ya kadar uzanan mikroorganizmaları tanımlayabiliriz ve önceki bölümde tartışıldığı gibi, hücre proliferasyonunu ve apoptotik durumu değerlendirebiliriz.
Ek olarak, hormonlar, hormon reseptörleri, büyüme faktörleri, yapışma molekülleri ve onkogen ürünleri, belirli moleküller için ligandlar gibi IHC tarafından gösterilebilir. Ancak bir uyarı olarak, paylaşılan epitopların mutlaka paylaşılan soyları göstermediği vurgulanmalıdır.
Örneğin, Hodgkin hastalığının Reed-Sternberg hücreleri ve adenokarsinom hücrelerinin her ikisi de CD15 eksprese eder, ancak bu hücre tiplerinin ortak soydan olduğu öne sürülmemiştir! IHC’nin uygulanması için giderek daha önemli olan bir alan, klinisyenin belirli bir malignite için en uygun tedaviyi daha doğru bir şekilde düzenlemesine yardımcı olabilecek prognoz değerlendirmesi alanında yatmaktadır.
Örnekler, Ki67 antikoru aracılığıyla büyüme fraksiyonunun değerlendirilmesinde yatmaktadır. Ayrıca, örneğin, bcl-2 onkoproteininin ekspresyonu, yüksek dereceli lenfomalarda nispeten zayıf bir prognoz sağlar. Östrojen ve progesteron reseptörü ve HER2 durumunun araştırılması da meme karsinomlarının tedavisinde büyük önem taşımaktadır.