Polarizasyon Mikroskobu
Polarizasyon mikroskobu iki polarize edici filtre içerir: birincisi, genellikle döndürülebilen "polarizör", lamba ve kondansatör arasında yer alır ve bu nedenle numuneye yalnızca bir düzlemde salınan aydınlatıcı ışınlar sağlar; ve ikincisi, genellikle sabit olan ve objektif lens ile göz merceği arasında yer alan "analizör" olarak adlandırılır.
Işık yolunda hiçbir örnek olmadığını varsayarsak, iletilen düzlemlerin çakıştığı ve görüntünün en parlak görüneceği tek bir polarizör konumu olacaktır. Tersine, bu yönelimde 90 ° 'de iletilen iki düzlem çaprazlanır ve bu da göz merceklerine ulaşan ışığın sönmesi ile sonuçlanır.
Polarizasyon mikroskobu, polarize gelen ışığı, kırılma indisinin iki yönüne paralel düzlemlerde salınan iki bileşene ayırmak için "çift kırılma" numunelerinin özelliğinden yararlanır. İki bileşen, örnek içinde farklı şekilde geciktirilir, bu da bir faz farkı ortaya çıkarır.
Bu bileşenler aynı düzlemi paylaşmadıkları için bu, girişime yol açmaz. Ancak, analizöre ulaşıldığında yalnızca analizöre paralel olan bileşenler iletilir ve artık aynı düzlemi paylaştıkları için müdahale edebilirler. Numune aşamasının döndürülmesi, yapıcı girişim miktarının değiştirilmesine izin vererek, gözlem altındaki çift kırılmalı yapıların parlaklığında sonuç olarak bir değişikliğe neden olur.
Kuartz ve "birinci dereceden kırmızı plaka" filtresini içeren "dengeleyiciler" adı verilen bilinen çiftefingans nesneleri, ışık yoluna yerleştirilebilir ve bilinmeyen yapıların çift kırılma özelliklerini hesaplamak için kullanılabilir, böylece bunların tanımlanmasına yardımcı olur.
Polarizasyon mikro kapsamı aynı zamanda, optik sistemin kendisinin getirdiği iki kırılma miktarını en aza indiren özel "gerilimsiz" objektif lenslerin kullanımından da yararlanır. Polarizasyon mikroskobu, örneğin sinoviyal sıvıda sodyum asit ürat ve kalsiyum pirofosfat dihidratı ayırt etmede uygulama bulmuştur. Bununla birlikte, genel olarak, laboratuar teşhisinde polarize mikroskopi uygulamaları sınırlıdır ve nadirdir.
Nomarski diferansiyel girişim kontrast mikroskobu (DIC), polarizasyon ve faz kontrast mikroskopisinin bir kombinasyonunu temsil eder ve en çok boyanmamış şeffaf numuneleri inceltmek için uygundur.
Başarılı uygulama, çapraz polarizör ve analizör filtreleri ve iki Wollaston prizma ışın ayırıcı içeren özel olarak tasarlanmış bir cihaz gerektirir. Işın bölücülerin getirdiği faz farkları ile birlikte, numune tarafından uygulanan ilave ışık geciktirme, arka planın gri, sol taraftaki kenarların parlak, merkezi alanların gri ve sağ tarafın karanlık olduğu bir görüntü oluşturur.
Mikrografi nedir
Mikrografi nedir Parkinson
Suyun mikroskop görüntüleri
Mikrografi ftr
Mikroskop
Mikrografilerin yönetimi nedir
Mikroskop fotoğrafı
Elektron mikroskobu
Bu, ışık yolundaki nesnelere, mitokondri ve çekirdek gibi organellerin açıkça tanımlandığı neredeyse üç boyutlu bir görünüm verir. DIC mikroskobu, canlı organizmaların incelenmesi için idealdir. Ayrıca idrar tortusu gibi ıslak numunelerin rutin çalışmasında da iyilik bulmuştur.
Modern mikroskobik tekniğin hiçbir tartışması, epi-flüoresan mikroskobunun önemli bir modifikasyonunu temsil eden eş odaklı mikroskopiye en azından kısa bir referans olmaksızın tamamlanmış sayılmaz. Konfokal mikroskopi ile daha önce tartışılan yöntemler arasındaki en büyük fark, alan aydınlatmasından ziyade nokta aydınlatmasına dayanmasıdır.
Bu, spesifik bir derinlikte numunelerle taranan ince odaklanmış bir lazer ışınıyla sağlanır (Şekil 6.6). Üretilen görüntü, numunenin farklı bölgeleri tarafından yayılan farklı ışık yoğunluklarından oluşturulmuş, bilgisayarda oluşturulmuş bir kompozittir.
Bu nedenle, görüntü kalitesi nihayetinde elektronik kameranın ışık hassasiyeti ve çözünürlüğüne ve ayrıca mikro-kapsam optik elemanların kalitesine ve enstrüman kurulumuna bağlıdır. Konfokal mikroskopi, geleneksel flüoresan gözlemiyle ilişkili odak dışı bulanıklıktan yoksun ve nispeten kalın (<100 mm) numuneler içinden çok keskin görüntüler sağlayabilir.
Fotomikrografi
İyi fotomikrografi, bilimsel laboratuarlarda bir sanat olarak kalır ve birkaç metinde daha uygun ayrıntılarla ele alınır. Mikroskoptan türetilen görüntülerin kalıcı ve kullanışlı bir kaydını oluşturma yeteneği, tanısal patolojinin birçok alanında önemlidir ve sonuç olarak çoğu laboratuar bir veya daha fazla fotomikroskobu içerir.
Örneğin, fotomikrografi, zamanla solma eğilimi gösteren floresanla boyanmış numunelerin kaydedilmesi için özellikle yararlıdır. Uygun aletler, basit bir adaptörle bağlanmış geleneksel bir 35 mm kamera gövdesine sahip temel laboratuvar mikroskoplarından, karmaşık ışık ölçüm sistemleri ve bir veya daha fazla entegre kameralı mikroskoplara kadar çeşitlilik gösterir.
Hem geleneksel tüp tipi hem de şarj bağlantılı cihaz (CCD) ve tamamlayıcı metal oksit yarı iletken (CMOS) kameralar olan elektronik kameraların ışık hassasiyeti, çözünürlüğü ve satın alınabilirliğindeki son gelişmeler, onları bu amaç için giderek daha popüler hale getirmiştir.
Ayrıca, güçlü kişisel bilgisayarların ve özel yazılımların hazır kullanılabilirliği, mikroskop otomasyonu, dijital görüntü işleme ve analizi ve ayrıca veri yönetimi açısından en yoğun klinik veya araştırma laboratuvarının ihtiyaçlarını kolayca karşılar.
Giderek daha uygun fiyatlı dijital sistemlere rağmen, birçok klinik laboratuvar hala geleneksel film kameralarına güveniyor. Geleneksel fotomikrografların kalitesi birkaç faktöre bağlıdır.
Kaydedilen çözünürlük mikroskobun optik bileşenlerinin kalitesinden açıkça etkilenir, ancak aynı zamanda fotografik görüntünün keskinliğini belirleyen film 'greninin' boyutuna da bağlıdır.
Ne yazık ki, fotoğraf filminin ışık hassasiyeti veya 'hızı' tane boyutuyla ters orantılıdır ve bu iki parametre arasında uygun filmin doğru seçimini bir uzlaşı haline getirir. Numune renginin doğru şekilde yorumlanması, öncelikle fotografik emülsiyonların spektral hassasiyetinin insan gözününkinden farklı olması nedeniyle dikkatli bir değerlendirme gerektirir.
Bu nedenle, orijinal numunenin görünümünün aslına uygun bir sunumunu kaydetmek için aydınlatıcı ışığın (lamba voltajı ayarlandıkça değişir) 'renk sıcaklığı' ile ilgili olarak renk telafi eden filtrelerin dikkatli seçimi de gereklidir.
Dijital fotomikrografi ve video mikroskopi, coğrafi olarak uzak bölgeler arasında uzaktan danışma, eğitim ve araştırmada giderek daha fazla yer buluyor. En basit haliyle, telepatoloji, dijital görüntüler de dahil olmak üzere, siteler arasında, muhtemelen elektronik posta yoluyla verilerin tek yönlü aktarımını içerir.
Bununla birlikte, mikroskop otomasyonundaki yukarıda bahsedilen gelişmeler, uygun fiyatlı ve erişilebilir yüksek bant genişliğine sahip İnternet bağlantıları ile birlikte, uzak bir mikroskobun etkileşimli kontrolünü içeren (numune konumu, odaklanma, büyütme, aydınlatma vb. dahil) gerçekten dinamik tele-patoloji anlamına gelir. .) ve eşzamanlı canlı görüntülü telefon bağlantıları, rutin klinik patolojide heyecan verici bir gerçeklik haline geliyor.
Kalite Kontrol
Laboratuvar standartlarının sıkılaştırıldığı günümüz dünyasında, harici kalite kontrolün yanı sıra rutin iç gözetim son derece arzu edilir. Pek çok ülke, genel olarak, ‘hedef’ laboratuvar tarafından seçilen antijenlerin boyanmasının değerlendirilmesine bağlı olan dış kalite değerlendirme şemalarına sahiptir.
Örnekler, basit vakaların ve daha fazla zorluğun beklenebileceği bölümlerin bir kombinasyonudur (örneğin, antijen sunan hücreler üzerinde yüzey Ig hafif zincirlerinin boyanması). Bu, laboratuarların tekniklerini meslektaş incelemesinin ışığı altında geliştirmelerine ve standartlaştırmalarına olanak sağlamalıdır.
Otomasyon
İmmünohistokimya, otoma- tasyon arenasına nispeten geç girdi. Bunun nedeni muhtemelen başlangıçta rutin kullanım için uygun olan nispeten az sayıda antikorun mevcut olmasıdır. Ancak son zamanlarda, herhangi bir meşgul laboratuvar, herhangi bir teşhis “çalışmasında” sayısız bölüme uygulanan geniş bir reaktif paneline sahip olacak ve otomasyon çağrısı artmıştır.
Önceki cihazlar yarı otomatikti ve büyük ölçüde zamandan tasarruf sağladı. Örneğin çoklu tampon yıkamalarının sıkıntısını ve benzerlerini azaltarak manipülasyon ve reaktif hacimleri vb. daha sonra, daha otomatik makineler piyasaya çıktı.
Bunlar, elbette, öncüllerinden çok daha pahalıdır, ancak mikro işlemci kontrollüdür, kullanıcının gereksinimlerine göre programlanabilir ve bazı durumlarda, diğer boyama türlerine tabi tutulan diğerleriyle eşzamanlı olarak bölümlerin işlenmesini sağlar.
Görüntüleme
IHC boyamasını ölçmek artık giderek daha fazla mümkündür. Geçmişte, özellikle kromojen bağlanma seviyesinde IHC reaksiyonlarının stokiyometrisini iyi anlamamamız nedeniyle bu çok zordu.
Ancak sistemler artık mevcuttur, örn. Applied Imaging’in Ariol SL-50’si, yüksek verimli donanım ve görüntü analiz yazılımı ile IHC (ve FISH) slaytlarının nicelendirilmesine ve analizine olanak tanır. Bu aynı zamanda, birden fazla patoloğun sistem tarafından taranan slayt panellerini değerlendirmesine ve bulgularını doğrudan hastane sistemlerine rapor etmesine olanak tanıyan “sanal ağ oluşturma” ya da olanak tanır.
TARAMALI Elektron Mikroskobu
Transmisyon Elektron Mikroskobu
Elektron mikroskobu
Geçirimli Elektron Mikroskobu
Taramalı Elektron Mikroskobu kullanım alanları
Taramalı elektron mikroskobu pdf
Elektron Mikroskobu çalışma prensibi
TARAMALI Elektron Mikroskobu sunum
Patolojide Elektron Mikroskobu
İnsan hücreleri içeren insan dokuları veya sıvıları, esas olarak teşhis amacıyla, yani klinisyenler tarafından tanınabilen ve tedavi edilebilen farklı hastalık kategorilerinin tanımlanması için örneklenir.
Hasta yönetimini optimize etmek için mikroskobik olarak doğrulanmış bir teşhis genellikle gereklidir ve en azından kanser alanında pek çok saf klinik tanı histopatolojik mikroskobik inceleme ile yeniden belirlenir.
Parafin balmumu içine gömülü doku kesitlerinin hematoksilen ve eozin (H&E) ile boyanmış kesitlerinin ışık mikroskobik incelemesi, insan katı doku teşhisi için en önemli teknik prosedürdür. Burada bir patolog, bir teşhisi sağlamak için brüt bulgular ve klinik veriler bağlamında mimari dahil olmak üzere hücre ve matris görünümlerini değerlendirir.
H&E kesitlerinin ışık mikroskobu histolojik tanının temeli olmaya devam ederken, elektron mikroskobu (EM), immünohistokimya, AgNOR boyama, akış sitometrisi, sitogenetik ve ‘moleküler’ teknikler gibi yeni teknikler [gen yeniden düzenleme analizi, floresan yerinde hibridizasyon ve polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) analizi] artık hastalık ve tanı anlayışımızı geliştirmek için ek bilgiler sağlayabilir.
Tanısal elektron mikroskobu, 1960’ların sonlarından ve 1970’lerin başlarından beri önemlidir. Bununla birlikte, 1980’lerin başından itibaren, özellikle immünohistokimya, vazgeçilmez bir teknik haline geldi ve EM uygulamasındaki düşüşten sorumlu oldu.
Daha uygun ve kullanışlı bir teknik olarak görülür ve bu nedenle, aksi takdirde EM’ye yönelik olabilecek kaynakları çekmiştir. Bununla birlikte, EM, alt hücresel düzeyde morfoloji hakkında benzersiz bir bilgi türü sağlar ve bu nedenle, bazıları tanısal uygulamalara sahip olan hastalık hakkında yeni bilgiler sağlayabilir.
Bunun nedeni kısmen, tamamen morfolojik özelliklerin tanıda önemli olduğu birçok koşulun varlığının yanı sıra, tümör teşhisinde özel öneme sahip bir teknik olan immünohistokimyanın sınırlılıkları nedeniyle de ortaya çıkmaktadır.
Mevcut literatür, EM’nin hem araştırmada hem de ışık mikroskobu ile sorunlu olan insan hastalığı vakalarının teşhisinde devam eden değerine tanıklık etmektedir.
Ultrastrüktürel girdinin olmaması, muhtemelen bir teşhis bölümünün performansını düşürür, çünkü EM, patologların ışık mikroskobuna dayalı yorumlarını sürekli olarak doğrulayabilir veya çürütebilir. Böylelikle belirli bir tanının konulduğu güveni arttırır. EM’nin patologları daha iyi patologlar yaptığına dair bazı gerçeklere dair bir sözdür.
EM’nin rutin bir teşhis departmanında ne ölçüde kullanıldığı, mevcut uzmanlık (hem teknik hem de yorumlama) ve önemli ölçüde departman başkanının felsefesi ve geçmişi tarafından belirlenir.
Geçmişte EM kullanmış ancak artık ona güvenmeyen, immünohistokimyanın teknoloji açısından değişmeye devam etmesine rağmen, tanı problemlerini çözmek için immünohistokimyayı ve daha yeni moleküler teknikleri tercih edenler var ve özgüllük hakkında bir soru var.
Aksine, diğerleri EM’yi daha büyük ölçüde kullanırlar ve bunlar genellikle büyük iş yükünün ya da örneklerin çoğunun sevk doğasının daha fazla sayıda zor vakaya yol açtığı büyük ya da uzmanlaşmış kurumlarda pozisyonları işgal eder.
EM’nin değerini ölçmek zordur. Örneğin, tüm tümörlerin% 5’ine kadarının EM araştırmasını hak edecek kadar sorunlu olabileceği, neoplastik olmayan renal örneklerin% 25’inin de EM’ye ihtiyaç duyabileceği söylenmiştir.
Sayılar ne olursa olsun, H&E bölümünde yorumlama zorluğu olduğunda EM uygulanmalıdır. EM bu koşullarda her zaman yapmaya değerdir çünkü bireysel bir durumda hangi sonuçların ortaya çıkacağını tahmin etmek asla mümkün değildir ve bazen kişi tamamen beklenmedik ve yeni bulguların zevkini yaşar.
Dahası, EM ve immünohistokimya (ve diğer tüm yeni teknikler) tamamlayıcı olarak görülmelidir ve örneğin hem immünohistokimya hem de EM’den gelen bilgilerin bir lezyonun her ikisinden de daha eksiksiz bir resmini verebileceği yaygın olarak ifade edilen bir duygudur. kendi başına teknik. Bazen, her iki tekniğin de kullanılması nedeniyle resim karmaşık hale gelebilir, bunlar çelişebilir, ancak bu daha fazla araştırma için bir teşvik olarak kabul edilebilir.