Trombotik Miyokardiyal
CZE, trombotik miyokardiyal ve serebral enfarktüsler alanında potansiyel uygulamaları olan bir serin proteaz olan rekombinant doku plazminojen aktivatörünün (rt-PA) karbohidrat bağımlı mikroheterojenliğini analiz etmek için alternatif bir yöntem olarak incelenmiştir.88 Yüksek çözünürlüklü ve tekrarlanabilir kompleks zincirler taşıyan rt-PA glikoproteinlerinin ayrılması, ya 100 mM fosfat tamponu pH 6.6 ya da 1.25 mM 1,4-diaminobütan içeren 100 mM trişin tamponu pH 8.2 kullanılarak elde edildi.
Aynı katkı maddesinin uygulanmasının, rekombinant insan faktör VIIa’nın çeşitli glikoformlarının CZE analizi için gerekli olduğu kanıtlanmıştır. Ayırma, temel olarak farklı N-asetilnöraminik asit içeriğine dayanıyordu. Yüksek mannozlu bir glikoprotein olan rekombinant insan kemiği morfojenetik proteini 2 (rhBMP-2), basit bir fosfat tamponu kullanılarak CZE ile dokuz glikoforma ayrıldı pH 2.5.90 Herhangi bir bitişik tepe çifti arasındaki fark yalnızca bir mannoz kalıntısı idi.
Birkaç yıl sonra, rhBMP-2 analizi için bir CZE / ESI / MS yöntemi oluşturulmuştur.91 UV ve MS verilerinin kombinasyonu, glikoform piklerinin kimliklerinin belirlenmesinde hesaba katılmıştır. İnterlökinler de glikoproteindir. Bakterilerde eksprese edilen doğal rekombinant insan interlökin-2’nin (IL-2) CZE analizi, birkaç rekombinant türün varlığını gösterdi. Farklı glikosile edilmiş ve glikosile edilmemiş proteinlerin çözünürlüğü, 100 mM fosfat tamponu pH 2.5 ile sağlandı. 10 dakikadan az çalışma süreleri yeterliydi.
CZE ve mikro-LC, rekombinant insan IL-4.93 analizine uygulanmıştır. Hem ana protein hem de triptik sindirimi için ayırmalar iyi tekrarlanabilirlik sergilemiştir. Desmodus tükürük plazminojen aktivatörü, potansiyel glikosilasyon için altı bölgeye sahip büyük, karmaşık bir proteindir ve LC-UV, CZE-UV, LC / ESI / MS ve MALDI / TOF / MS ile analiz edilmiştir.
Protein bütünlüğü, üç spesifik ayrıntı seviyesinde araştırıldı: bozulmamış protein, proteolitik sindirimler ve proteolitik sindirimden fraksiyonlar. Optimal CZE koşulları, bir fosfatla deaktive edilmiş erimiş silika kapiler, 100 mM NaCl içeren 100 mM sodyum fosfat tamponu pH 2.4 ve 200 ve 280 nm’de UV izleme kullanımını ima etti. Peptidler için enjeksiyonu 1 mM fosforik asitten oluşan bir arkadan gelen elektrolit takip etti. Bu kesintili tampon sistemi zirveleri keskinleştirmeye hizmet etti.
Miyokardiyal Nedir
Müsküler bridge ne demek
Müsküler bridge belirtileri
Muskuler bridge hakkındaki tüm sorular
Kalp kası bandı hastalığı belirtileri
Miyokardiyal köprüleşme nedir
Muscular bridge
Müsküler bridge Tedavisi
Son olarak, LIF tespiti ile CZE, biyofarmasötiklerin safsızlık profillemesindeki önemli sorunları ele almak için başka bir seçenektir, çünkü ana bileşenin% 0.01’inden daha az miktarlarda mevcut safsızlıkların belirlenmesini göstermiştir. Saflaştırılmış rekombinant insan faktörü XIII’de ve insan IL-2 reseptörüne karşı bir monoklonal antikorda eser safsızlıkların varlığı, proteinlerin CZE analizi ve triptik sindirimleriyle kanıtlanmıştır.
BGE, 10 mM sodyum tetraborat tamponu pH 8.1’den oluşuyordu ve elektroferogramlar, UV soğurma analoglarından önemli ölçüde daha az karmaşıktı. Bununla birlikte, doğal floresans saptama (FD) ile CZE’nin bir dezavantajı, hem triptofan hem de tirozin kalıntılarından yoksun peptitlerin saptamadan kaçmasıdır.
Bu bölümün son kısmı kısaca terapötik peptitlerin CZE analizi ile ilgilidir. Bu konuyla ilgili daha kapsamlı makaleler başka bir yerde bulunabilir.962101 Proteinler gibi, terapötik kullanım için sentezlenen peptidler de saflıkları açısından titizlikle test edilmelidir. Sentetik peptitler, eksik reaksiyonlardan veya çok sayıda yan reaksiyondan kaynaklanan yakından ilişkili peptit safsızlıkları içerebilir. Kılcal duvara adsorpsiyon gibi protein analizinde karşılaşılan tuzaklar, çoğunlukla peptit analizi için de geçerlidir.
Luteinize edici hormon salgılayan hormon analog gozerelin, nonapeptiddir ve sıklıkla parenteral enjeksiyonla uygulanır. Sulu parenteral peptit çözeltileri, hidroliz, oksidasyon ve rasemizasyon gibi her türlü bozunmaya eğilimlidir. Çalıştırma tamponu olarak% 10 (m / m) asetik asit pH 2.3 kullanan goserelin analizi için bir CZE / MS sistemi, peptidi ve onun bozunma ürünlerini ayırabilir.
Düşük pH’ın bir sonucu olarak, EOF minimaldi, esas olarak elektroforetik hareketi ve dolayısıyla nispeten yüksek çözünürlüğü garanti etti. Yöntem, goserelin stabilite çalışmasına uygulandı; pH 5 veya 9’da bozulan numuneler analize tabi tutulmuştur. Anti-kanser peptit ilacı buserelininin yan bileşiklerini karakterize etmek için duyarlılığı artıran alanla güçlendirilmiş numune istiflemesinden (FASS) yararlanılmıştır.
FASS, düşük iletkenliğe sahip numune çözeltilerinden yüksek iletken tamponlarla doldurulmuş kapilerlere elektrokinetik enjeksiyona karşılık gelir. Amplifikasyon etkisi, hidrodinamik enjeksiyondan sonra basit istifleme kullanımına göre çok daha yüksektir. 250 mM potasyum sülfat içeren 60 mM potasyum fosfat tamponu pH 3.0 içeren bir BGE ile bir CZE yöntemi tamamen doğrulanmış ve stres koşulları altında buserelin implantlarının davranışını incelemek için yararlı bulunmuştur.
G-radyasyonu kullanılarak sterilizasyondan sonra yan bileşenlerde artış belirlenebilir. Aynı safsızlıklar, g-ışınları ile muamele edilmeyen, ancak birkaç ay boyunca saklanan numunelerde tespit edildi. Sentetik bradikininin saflık testinde CZE’nin yüksek çözülme gücü gösterilmiştir.
Poliakrilamid kaplı kapiler ve düşük pH’lı 50 mM potasyum fosfat elektrolitlerinin kullanılması, numune adsorpsiyonunu ve EOF’yi uygun şekilde ortadan kaldırmıştır. Protegrin IB-367, agresif kanser kemoterapisi ile ilişkili ağrılı bir oral komplikasyon olan oral mukoziti tedavi etmek için geliştirilmiş 17 amino asitli polikatyonik bir peptiddir. İlaç maddesinin elektroforetik saflığı ve potansiyel safsızlık seviyeleri CZE tarafından incelenmiştir.
Peptit ve kesik analoglar arasındaki ayırma ve çözünürlük, LC yöntemlerine kıyasla çok daha büyük olduğunu gösterdi. Yöntem doğrulandı ve kantitasyon amacıyla dahili bir standart kullanıldı. Löprolid sentezi sırasında elde edilen çok bileşenli bir peptid karışımının karakterizasyonunu gerçekleştirmek için sıralı bir LC / MS ve CZE kombinasyonu kullanılmıştır.
Numuneler ilk önce LC / MS ile analiz edildi ve parçalandı ve ikinci aşamada toplanan fraksiyonlar CZE ile ayrıldı. İki tekniğin kombinasyonu, bunların bireysel seçicilik özelliklerinde bir artışla sonuçlandı. Daha sonra, aynı yazarlar, buserelin, bradikinin ve enkefalinler dahil olmak üzere geniş terapötik kullanım ve farmasötik açıdan ilgi çekici bir dizi peptit hormonunun ayrılması ve sınıflandırılması için bir CZE / ESI / MS yöntemi oluşturdu.
PH 2.85 çalışma tamponu, 50mM asetik asit ve 50mM formik asit içeriyordu. Önerilen yöntemin ana doğrulama parametreleri belirlendi. Asparagin ve aspartik asit, özellikle deamidasyona, izomerizasyona ve enantiomerizasyon reaksiyonlarına duyarlı olan peptidler ve proteinlerdeki en kararsız amino asitler arasındadır.