Blog

Geleneksel floresan detektörü aşağıdaki bileşenlerden oluşur: (1) Bir ışık kaynağı, ksenon veya cıva arkı veya kuvars halojen. (2) Bir filtre veya monokromatör kullanan bir dalga boyu seçici 254 nm ve 520 nm (eksitasyon) ve 420 nm ve 680 nm (emisyon) arasında bir dizi filtre mevcuttur. Işık, numuneden her yönde yayılır, ancak genellikle eksitasyon radyasyonuna dik açılarda izlenir. Bu, daha az ışık görüldüğü için daha düşük bir hassasiyetin elde edildiği anlamına gelebilir; bununla birlikte, küvet bölmesinin içine bir parabolik reflektör yerleştirilirse, daha fazla ışık toplanabilir. (3) Bir fotoçoğaltıcı; bu, geniş bir dalga boyu aralığında iyi hassasiyet sağlar. (4) Boyutu 1 ila 40 µl arasında değişebilen bir numune hücredir. Diğer yenilikler, geleneksel ışık kaynaklarından daha monokromatik olan ve bu nedenle yabancı ışıktan etkilenmeyen bir lazer ışık kaynağının piyasaya sürülmesidir. Floresan detektörlerinin artan hassasiyeti, mobil fazda kirletici materyalin varlığının büyük bir problem haline gelebileceği anlamına gelir. Bunu engellemenin bir yöntemi, çözücüleri kullanımdan önce bir flüoresan reaktif üzerinde damıtmaktır. Kırılma İndisi (RI) Algılama Kırılma indisi tespiti, HPLC'de kullanılan en popüler ikinci tahribatsız yöntemdir. RI tespiti, farklı matrislerden geçerken bir ışık demetinin yönündeki değişiklik ilkesini kullanır. Bu değişikliği izlemek için farklı yöntemler kullanılmıştır. Fresnel prizması Bu yöntem, bir cam prizmanın yüzeyinden ve hareketli fazdan iletilen ışık miktarındaki değişikliği ölçer. İki paralel ışık demeti prizmadan geçerek detektöre odaklanır. Arayüzden iletilen ışık dağıtılır ve yansıyan ışığı bir fotosel üzerine odaklamak için bir toplama merceği kullanılır. Çözünen madde numune hücresinden geçtiğinde, ışık huzmesi farklı bir şekilde kırılır. Işık kaynağı olarak bir tungsten lamba kullanılır. Bu tür cihaz, Laboratuvar Veri Kontrolü tarafından sağlanır. Maddelerin kırılma indisi değerleri Camın kırılma indisi Kırılma indisi formülü Dalga boyu kırılma indisi ilişkisi Havanın kırılma indisi Işığın kırılma indisi formülü Kırılma indisi Soruları Renklerin kırılma indisi Sapma refraktometresi Bu yöntem, paralel bir ışık demetinin iki ortamın ara yüzünü geçerken kırılmasını ölçer. Bir tungsten lambadan gelen bir ışık huzmesi akış hücrelerinden geçirilir ve geri yansıtılır ve bir fotosel üzerine odaklanır. Akış hücrelerinden biri referans hücre, diğeri ise örnektir. Çözünen madde numune hücresine girdiğinde ışık saptırılır. Bu tür bir alet Su tarafından sağlanır. İnterferometrik refraktometre Bu yöntem, hücrelerden geçtikten sonra iki ışının girişimiyle örnek ve referans arasındaki iki ışık ışınının geçiş hızındaki farkı ölçer. Işık huzmeleri akış hücrelerinden geçer ve yeniden birleştirilir ve bir fotoçoğaltıcıda toplanır. Örnek ve referans arasındaki bağıl ışık hızı değiştikçe, ışınlar asenkron hale gelir, iki ışının paraziti yıkıcı hale gelir ve fotoçoğaltıcıya ulaşan enerji azalır (Optilabs). Bu kategorilere yapılan son eklemeler, hem Fresnel optiği hem de saptırma refraktometresinin (LKB) bazı özelliklerini içermektedir. Düzenleme gösterilmiştir. Kırılma indisi monitörlerinin, gradyan kromatografisi ile kullanılamaması gibi büyük bir dezavantajı vardır. Ek olarak, sıcaklık ve basınç değişikliklerinden kaynaklanan taban çizgisi kayması da bir sorundur; bununla birlikte, izokratik ayırmalar için (özellikle boyut dışlama kromatografisinde) yöntem basittir ve genellikle sorunsuzdur. Ancak hassasiyet mikrogram aralığındadır. Radyoaktivite Monitörleri Radyo-etiketli bileşikler sıklıkla metabolik yolları, ilaç farmakokinetiğini ve farmakodinamiği analiz etmek için kullanılır ve ayrıca ekstraksiyon etkinliklerini ölçmek için dahili standartlar olarak kullanılır. Son on yıla kadar, bu radyo-etiketli bileşikler, zahmetli ve zaman alan kantifikasyon tekniklerinden önce ince tabaka kromatografisi, kağıt kromatografisi veya kolon kromatografisi ile rutin olarak ayrıldı, ör. kazıma, elüsyon vb. HPLC'nin gelişi, radyo-etiketli bileşiklerin hızlı bir şekilde ayrılmasını sağladı, ancak daha sonra bir fraksiyon toplayıcı ile numune alikotlarının toplanmasını ve ardından bir sintilasyon spektrometresinin sayılmasını gerektirdi; analiz edilecek. Daha sonra, sürekli akışlı radyoaktivite monitörleri geliştirilmiştir. Çoğu radyoaktivite monitörü, yüksek sürekli verimlilik sağlamak için genellikle özel reflektörlere sahip iki fotoçoğaltıcı tüp arasında konumlandırılan farklı tiplerdeki akış hücrelerini kullanır. Foto çoğaltıcılardan gelen sinyal darbeleri, gürültü ve kemilüminesanstan gelen katkıları bastırmak için tesadüfen ölçülür. Fotoçoğaltıcı tüplerden gelen sinyaller güçlendirilir ve ardından genellikle çeşitli veri azaltma işlemlerine tabi tutulur. Akış hücreleri üç şekilde mevcuttur: Heterojen. Akış hücreleri, elüentin tam olarak UV detektörünün akış hücresinden geçtiği şekilde geçtiği katı sintilatör granülleri içerir. Radyoaktivite detektörü, bu akış hücresi ile kullanıldığında bir UV detektöründen önce ya da sonra konumlandırılabilir. Homojen. Eluat, akış hücresinden geçmeden önce sıvı sintilant ile karıştırılır. Numune sayıldıktan sonra atığa verilir. Yüksek enerji. Elüent, sintilatör materyalinden izole edilir, ancak akış hücresi, granüler veya sıvı sintilatör ile çevrilidir. Faydalı seçenekler sağlayabilecek, farklı üreticilerin ekipmanlarıyla ilişkili çeşitli özellikler vardır. Birkaç üretici, bir kolondaki elüatın bir kısmının bölünmesine ve bir fraksiyon toplayıcıya götürülmesine izin veren bir ayırıcı-karıştırıcı tesisi sunar. Kolondan kalan eluatın geri kalanı daha sonra akış hücresinden geçmeden önce ölçülü bir sintilatör hacmi ile otomatik olarak karıştırılır. Bazı makinelerin bir sınırlaması, gradyan HPLC sistemlerinde mobil fazın değişen söndürme özellikleriyle başa çıkamamalarıdır. Bazı radyoaktivite detektörleri, bir gradyan kromatografik çalışmada doğru tepe belirlemeleri vererek, DPM değerlerinin otomatik olarak hesaplanmasına izin veren standart bir eğrinin depolanmasına izin vererek bunu telafi eder. Benzer şekilde, bu tesis, daha düşük enerjili izotopun sayma penceresine daha yüksek enerji izotopunun dökülmesini belirleyerek karma izotop izlemeye izin verir. Artık birçok üretici, ayrıntılı veri toplama ve işlemeye izin veren mikrobilgisayarlarla bağlantılı makineleri pazarlamaktadır. Bu tesisler, çok sayıda düşük enerji zirvesine sahip olabilen bilinmeyen numuneleri izlerken son derece faydalıdır. Radyoaktivite monitörlerinin sayım verimliliği ve algılama hassasiyeti, makineye, akış hücresinin türüne ve izotopa göre değişir. Bununla birlikte, iyi bir makinenin tipik özellikleri de gösterilmektedir.