Edinilmiş Kromozom Anormallikleri – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Kromozom Analizi Sitogenetikçi, tüm kromozom çiftlerinin tanınan normal bantlama paternini gösterdiği konusunda tatmin olursa, normal bir karyotip rapor edilebilir. Karyotipler, ISCN terminolojisi kullanılarak açıklanmıştır. Genel olarak, bu şu sıraya sahiptir: toplam kromozom sayısı, cinsiyet kromozomu yapısı, anormalliğin tanımı (varsa) ve bunların her biri virgülle ayrılır. Böylece normal dişi karyotip formülü 46,XX ve normal erkek karyotipi 46,XY'dir. Bir kromozom anormalliği tespit edildiğinde, uygun karyotip formülü atanır. Her tür yapısal anormallik, ilişkili bir ISCN kısaltmasına sahiptir, örn. yer değiştirme için 't', ters çevirme için 'i' vb yer alır. İlgili kromozomlar ve herhangi bir kesme noktası, atanan karyotipik formüle dahil edilir, örn. Şekil 36.10'da gösterilen anormal karyotip 46,XY,t(5;14)(p15.2;q24.1) formülüne sahiptir. Bu, kromozom 5'in p kolunda 15.2 bandında kırıldığını, kromozom 14'ün ise q kolunda bant 24.1'de kırıldığını gösterir. Anormallik belirsizse veya mikroskobik inceleme ile kırılma noktaları net değilse, karyotiplerin hazırlanması, anormalliğin tam yapısını karakterize etmeye yardımcı olabilir. Eskiden bu, anormal hücrelerin fotomikroskopi kullanılarak fotoğraflanmasını, filmin geliştirilmesini, filmin basılmasını, kromozomların standart karyotip sırasına göre kesilmesini ve yeniden düzenlenmesini içeriyordu. Günümüzde, tanısal sitogenetik laboratuvarlarında karyotip üretimi, özel görüntü analiz sistemleri kullanılarak önemli ölçüde kolaylaştırılmıştır. Bu sistemler, mikroskobu, analiz edilecek metafaz yayılımının dijital görüntüsünü yakalamak için kullanılan bir dijital kameraya bağlar. Özelleştirilmiş sitogenetik yazılım daha sonra, çıktısı alınabilen ve/veya elektronik olarak saklanabilen nihai bir karyotip üretmek için bir bilgisayar ekranında kromozomların düzenlenmesini sağlar. Genetik bozukluklar nelerdir Sayısal kromozom anomalileri Genetik bozukluk neden olur Kalıtsal bozukluklar Tedavisi olmayan genetik hastalıklar Genetik bozukluk tedavisi Kromozom anomalileri Yapısal kromozom anomalileri Edinilmiş Kromozom Anormallikleri İçin Kromozom Analizi Malignitelerin (lösemiler ve katı tümörler) sitogenetik analizi, ilişkili edinilmiş kromozom anormalliklerini saptamak için rutin olarak gerçekleştirilir. Bu tür anormalliklerin tespiti, hastalık teşhisi, hasta prognozu ve tedaviye yanıtın izlenmesi ile ilgili hayati bilgiler sağlar. Edinilmiş kromozom anormallikleri için kromozom analizi, yapısal analizden birkaç önemli farklılık taşır. Edinilmiş kromozom anormallikleri klonaldir ve sadece malign hücrelerle sınırlıdır. Ek olarak, malign hücrelerden elde edilen metafazlar, malign olmayan hücrelere kıyasla tipik olarak daha düşük morfoloji (kısa ve zayıf bantlar) gösterir. İlk olarak, sitogenetik uzmanının küçük klonal anormalliklerin saptanmasını sağlamak için daha fazla sayıda hücreyi analiz etmesi önemlidir (yani, saptanan tüm hücreler anormal klona ait olmayabilir) ve ikinci olarak, önlemek için tüm metafazların temsili bir seçiminin incelenmesi önemlidir. Daha kaliteli fakat muhtemelen habis olmayan hücrelerin yanlışlıkla seçilmesi gerekir. Moleküler Sitogenetik Rutin tanısal sitogenetik alanındaki en son önemli gelişme, 1980'lerde moleküler sitogenetik tekniklerin tanıtılması olmuştur. Floresan in situhibridizasyon (FISH) tekniği ile insan karyotipinin belirli bölgelerini vurgulamak için kullanılabilecek çok çeşitli ticari olarak temin edilebilen problar mevcuttur. FISH, herhangi bir bantlama tekniğinin sınırlarını aşan bazı çok ince anormalliklerin tespit edilmesini sağlar. FISH probları, bantlama teknikleri kullanılarak tespit edilen karmaşık veya tanımlanamayan kromozom anormalliklerini hızlı ve doğru bir şekilde karakterize etmek için de kullanılabilir. Ayrıca, FISH probları, bölünen metafaz yayılımları mevcut olmasa bile, numunelerin önemli sitogenetik anormallikler açısından taranmasına olanak da tanır. Amniyotik sıvı örnekleri, kromozom preparatları üretmek için kültürde yeterli hücrenin büyümesini 2 haftaya kadar beklemek yerine 24 saat sonra FISH tarafından belirli anormallikler için taranabildiğinden, bu hızlı doğum öncesi tanıyı mümkün kılmıştır. FISH, mitotik hücrelerin elde edilmesinin zor olabileceği malignite çalışmalarında da özellikle de yararlıdır. Tüm rutin tanısal sitogenetik laboratuvarları, rutin bantlama yöntemlerini tamamlayan bu FISH testlerine artık çok fazla güveniyor. Birçok durumda FISH testleri aslında alternatif tam karyotip analizinden daha da uygundur. Floresan Hibridizasyonu Floresan in situ hibridizasyon (FISH), güncel genetik araştırma alanlarında önemli bir rol oynayan güçlü bir tekniktir. Kendileri floresan olan veya immünofloresan mikroskopi ile tespit edilebilen kimyasallarla etiketlenmiş tek sarmallı nükleik asit moleküllerinin (sondalar) belirli hedef nükleik asit dizilerini tanımlamak için kullanıldığı bir dizi ilgili prosedürü ifade eder. Sitolojik preparatlarda da bulunması söz konusu olabilir. Teknik doğrudan, ilk olarak 1960'larda Speigleman tarafından öncülük edilen ve mikroskop lamları üzerinde sabit materyaldeki nükleik asit dizilerini tanımlamak için radyo-etiketli problar kullanılarak birkaç grup tarafından uyarlanan orijinal nükleik asit hibridizasyon deneylerinden türetilmiştir. Erken örnekler, Xenopus oositlerinin nükleollerindeki ribozomal RNA genlerinin ve metafaz fare kromozomlarında sentromerik uydu DNA'nın tanımlanmasını içeriyordu. Protokoller o zamandan beri büyük ölçüde gelişmesine rağmen, temel adımlar büyük ölçüde değişmeden kaldı. Tekniğin tüm varyasyonları, bir nükleik asit probu, bir sitolojik preparasyon ve bir saptama sistemi içerir. Tekniğin varyasyonları ve uygulamaları ile karşılaşılmadan önce sistemdeki temel adımlar bu noktada açıklanacaktır. Prob Seçimi Birçok durumda DNA'nın genomik bir klonu kullanılabilir, ancak daha sonra görüleceği gibi, kromozom boyama için başka DNA kaynakları da kullanılabilir. Günümüzde nadiren yapılmasına rağmen bazı uygulamalarda RNA molekülleri kullanılabilir. Prosedür sonunda hibridize materyali tespit etmek için prob kullanımdan önce etiketlenmelidir. Prob tespitinde bir faktörün bir probun uzunluğu olduğunun farkına varmak önemlidir. Aynı etiketleme ve algılama sistemleri altında, daha küçük bir sonda her zaman daha uzun bir sondadan daha zayıf bir sinyal verecektir. Bazı durumlarda 500 baz çifti kadar küçük problar saptanabilse de, yaklaşık 40 kb klonlanmış DNA içeren bakteriyofajdan türetilen vektörler olan kozmidler en popüler prob kaynaklarıdır. Bakteriyel yapay kromozomlar (BAC'ler), P1 yapay kromozomlar (PAC'ler) veya maya yapay kromozomları (YACS'ler) gibi daha büyük ekleri taşıyan vektörlerde klonlanmış DNA, her durumda daha da iyi çalışacaktır.

Nükleer Uzaysal Ölçümler – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri

Geleneksel tanıda, nükleer kromatin veya kromatin fenotipinin dağılımı, bir hücrenin biyolojik davranışı hakkında hayati bilgiler sağlayan görsel bir ipucudur. Bize dijital görüntülerle sağlanan sayısal bilgileri kullanarak, bir çekirdek içindeki gri değerlerin uzamsal dağılımını değerlendirerek kromatin organizasyonunu ölçebiliriz.

Çekirdek dijital olarak her pikselin yoğunluğunu temsil eden bir sayı matrisi ile temsil edildiğinden, çekirdek içindeki gri değerlerin uzamsal dağılımını ölçen bir dizi istatistiksel özellik çıkarılabilir.

 Bu özellikler kümesi topluca “doku” olarak adlandırılır ve kromatin fenotipinin objektif bir ölçüsünü sağlar. Kromatin organizasyonundaki görsel olarak belirgin değişiklikler için niceliksel destek sağlamanın yanı sıra, bu önlemlerin çıplak gözle görülmeyen kromatin özelliklerini gösterdiği gösterilmiştir.

Bu özellikler, daha sonra tartışılacak olan malignite ile ilişkili değişikliklerin (MAC’ler) tanımlanmasında yaygın olarak kullanılmıştır. Geleneksel olarak, doku analizi, Feulgen reaksiyonu kullanılarak spesifik olarak DNA için boyanan çekirdekler üzerinde gerçekleştirilmiştir.

Ancak daha yakın zamanlarda, hematoksilin nükleer doku ölçümü için kullanılmış ve çok etkili olduğu gösterilmiştir. Bu lekenin uygulanması kolaydır ve rutin tanısal patolojide kullanılan yaygın boyadır. Bununla birlikte, stokiyometrik bir reaksiyon sağlamaz ve dikkatli bir standardizasyon ve kontrol gerektirir.

Akış sitometrisi gibi diğer yöntemler, klinik örneklerde DNA içeriğinin ve ploidi değişikliklerinin daha hızlı ölçülmesine izin verir. Bununla birlikte, bilgisayarlı görüntüleme kullanan DNA sitometrisi, bir doku bölümü veya yayma içindeki tanımlanmış hücre popülasyonlarının daha spesifik bir analizine izin verir.

Nükleer Uzaysal Ölçümler

Nükleer kalabalık, çekirdekler arasındaki mesafeler ve dokularda oluşturdukları modeller, altta yatan hastalığın derecesi ve özellikle pre-invazif lezyonların ciddiyeti hakkında benzersiz ipuçları sağlar.

Nükleer aralığı ölçmek için, çoğu iki boyutlu uzayda bir dizi noktanın uzamsal özelliklerini belirleyen grafik teorisine dayanan çeşitli yaklaşımlar kullanılabilir. Toplu olarak, teknikler “sözdizimsel yapı analizi” veya “hücresel sosyoloji” olarak adlandırılır.

Sözdizimsel yapı analizi için, Voronoi’nin mozaiklemesi, Delaunay üçgenlemesi ve minimum kapsayan ağaç dahil olmak üzere bir dizi yöntem mevcuttur. Bir Delaunay üçgenlemesi, her olası nokta kümesi arasında üçgenlerin oluşturulduğu, yalnızca çemberin üçgen noktalarından başka nokta içermediği üçgenleri kabul ettiği yerde tanımlanır.

Delaunay grafiğinin tamamlayıcı mozaiklemesi Voronoi mozaiklemesidir. Bu grafiklerden nokta sayısı, ortalama üçgen çizgi uzunluğu, toplam çizgi uzunluğu, ortalama, standart sapma, çarpıklık, basıklık ve çizgi uzunluklarının entropisi, üçgen alanı, kapalı nesne alanları vb. Dahil olmak üzere çeşitli ölçümler çıkarılabilir.

Öte yandan, minimum kapsayan ağaç (MST), döngüleri olmayan bir grafiktir ve noktaları birleştiren çizgilerin uzunluğunun toplamının minimum olduğu tüm noktaları birleştirir. Daha önce olduğu gibi, bu grafikten, çekirdeklerin kalabalık yapısındaki temel değişiklikleri yansıtan çeşitli ölçümler çıkarılabilir.

Bu üç yöntemin örnekleri gösterilmektedir. Kantitatif morfolojiye bu tür bir yaklaşımın rolü için uygulamalar, kolorektal displazinin derecelendirilmesinde, mide atrofisinin değerlendirilmesinde ve endometriyal sitoloji örneklerinde nükleer dağılım modellerinin tanımlanmasında gösterilmiştir.

Nükleer Tıp görüntüleme
Nükleer tıp GÖRÜNTÜLEME yöntemleri

Tanısal Patolojide Ölçüm Uygulamaları

Teşhis patologları günlük pratikte düzenli olarak kantitasyonu kullanır. Tümör çapının basit doğrusal ölçümleri, uluslararası tümör / düğümler / metastazlar (TNM) sınıflandırmasında patolojik evrelemeyi belirler ve ayrıca çeşitli yaygın kanserlerde prognostik bilgi verir, örn. meme kanseri.

Cerrahi sınırların tümör klirensi, lokal tümör nüksü olasılığını tahmin etmede ve meme ve kolorektal kanserde postoperatif adjuvan kemo veya radyoterapi için hasta seçiminde önemlidir.

Kutanöz malinant melanom ve karsinomun optimal tedavisi, tam cerrahi eksizyon ve sınır temizliğidir ve patoloji örneğinde belirlenmelidir. Mikroskobik sahne Vernier ölçeği, göz merceği gratikülü veya cetvel gibi temel teknikler uygundur.

Doğrusal ölçek içeren Cam veya Perspex kubbe büyüteçleri özellikle yararlıdır. Prostatik iğne biyopsi çekirdeklerinde yüzde tümör tutulumunun yarı kantitatif tahminleri, genel tümör hacminin ve bezin ötesine yayılmış kanser olasılığının iyi bir göstergesidir.

Aşağıda çeşitli standart uygulamalar ayrıntılı olarak açıklanmıştır, ancak bazı daha yeni potansiyel gelişmeler şunları içerir:

  • Nörodejeneratif bozuklukların patolojisinin kantitasyonu, ör. Alzheimer hastalığı.
  • Kantitatif S100 protein immüno ekspresyonu, nükleer alan ve DNA sitometrisinin bir kombinasyonu kullanılarak iyi huylu ve kötü huylu melanositik lezyonların ayrılması.
  • Kemik iliği biyopsilerinde hematolojik bozukluklarda hücre popülasyonlarının ve doku dağılımının miktarının belirlenmesi.
  • Pulmoner ve hepatik fibrozda doku yapısının analizi.

Breslow’un melanom kalınlığı ölçüsü

Bu, tanısal histopatolojide en sık kullanılan ölçümlerden birini temsil eder ve deri yönteminin granüler hücre tabakasının altındaki melanom invazyonunun derinliğinin ölçüsüdür ve prognostik değeri Breslow tarafından tanımlanmıştır.

Bir göz merceği gratikülü ile ölçümler yapılabilir ve artık malign melanomu hastalık yüzdesi ile ince (<0,76 mm), orta kalınlıkta (0,76-1,5 mm) veya kalın (> 1,5 mm) olarak tanımlamak kabul edilen bir uygulama haline gelmiştir. sırasıyla% 100,% 70 ve% 40 serbest hayatta kalmasıdır.

Kemik Biyopsisi

Morfometrik analiz, metabolik kemik hastalığının teşhisi için son derece değerli veriler sağlayabilir. Kemik biyopsileri iliak krestten alınır ve analizi, kalsifiye edilmemiş kesitler ve iletilen, çapraz polarize ve ultraviyole ışıkla mikroskopi kullanılarak yapılır.

Trabeküler ve osteoid hacim, osteoid ve mineralize yüzeyler ve osteoid kalınlığı ölçümleri yapılabilir ve osteoporoz ve osteomalaziyi teşhis etmek için kullanılabilir. Bunlar nokta / çizgi ızgaraları ve stereolojik prosedürler kullanılarak yapılabilir. Bilgisayarlı görüntü analizinin kullanımı artık bu özellikleri ölçmenin daha çekici bir yolu haline geliyor.

Kas Biyopsisi

Uzunlamasına ve enine kesitlerde kas lifi özelliklerinin değerlendirilmesi, konjenital, metabolik ve yıkıcı miyopatiler ve kas distrofisi dahil olmak üzere nöromüsküler bozuklukların tanısında merkezidir.

Kas lifi boyutunun ve sayısının morfometrik ölçümü, miyozin APTase reaksiyonu kullanılarak lif tipi için farklı şekilde boyanan enine kesitlerde gerçekleştirilir.

Lif atrofisi ve hipertrofisi, geleneksel olarak profilin daha küçük yönü boyunca kas lifi çapı olarak alınan lif boyutunun ölçülmesiyle belirlenir.