DENEY : Broth Seyreltme Yöntemi: Minimum İnhibitör
Konsantrasyonu (MIC) Belirleme
Bakteriyel endokardit gibi yaşamı tehdit eden enfeksiyonların veya yüksek düzeyde veya çok sayıda dirençli organizmaların neden olduğu enfeksiyonların belirli durumlarında, doktor, nitel rapor S, I veya R yerine mikroorganizma duyarlılığının nicel bir değerlendirmesini isteyebilir.
Laboratuvar daha sonra organizmanın bir veya daha fazla uygun antimikrobiyal ajanın değişen konsantrasyonlarına duyarlılığını test eder. Her antimikrobiyal ajanın iki kat seyreltilmesi, ilacın standart dozları uygulandığında hastanın kan dolaşımında veya idrarında (enfeksiyon bölgesine bağlı olarak) ulaşılabilen bir dizi konsantrasyon üzerinden hazırlanır.
Bazı durumlarda, tam bir ikili seyreltme serisi hazırlamak yerine, organizma yalnızca iki veya üç antimikrobiyal konsantrasyonda test edilir. Bu kırılma noktası seyreltme yönteminde, duyarlı ve dirençli organizmaları ayırt etmek için test edilen konsantrasyonlar dikkatlice seçilir.
Antimikrobiyal seyreltiler, bir et suyu ortamında hazırlanabilir veya test edilecek her antimikrobiyal madde konsantrasyonu, bir agar ortamına dahil edilebilir.
Bu agar seyreltme yönteminde, birçok organizma (32’ye kadar) tek bir agar plakasında test edilebilir, ancak testi gerçekleştirmek için her biri farklı bir antimikrobiyal konsantrasyon içeren birkaç plaka gerekir. Yalnızca tek bir organizma test edildiğinde, broth dilüsyon yöntemi uygulaması daha hızlı ve ekonomiktir.
Günümüzde birçok laboratuvar ticari olarak temin edilebilen mikrodilüsyon plakaları kullanmaktadır. Bunlar, et suyunda çeşitli antimikrobiyal ajanların çeşitli seyreltileri ile önceden doldurulmuş çok delikli plastik plakalardan oluşur. Çok yönlü bir cihaz kullanılarak mikro kuyucuklar, test organizmasının standartlaştırılmış bir süspansiyonu ile eşzamanlı olarak aşılanır. Bu nedenle, bir organizmanın birçok antimikrobiyal maddeye duyarlılığı kolayca test edilebilir.
Seçilen seyreltme yöntemine bakılmaksızın, sonuçlar aynı şekilde yorumlanır. 35 ° C’de 18 ila 24 saat inkübasyondan sonra, broth’lar veya plaklar bakteri üremesinin inhibisyonu açısından incelenir. Her antimikrobiyal ajan için, büyümeyi engelleyen en düşük konsantrasyon, minimum inhibitör konsantrasyon veya MIC olarak adlandırılır.
Diskli agar difüzyon yönteminde olduğu gibi, doğru bilgi elde etmek için inokülum boyutu, organizma büyümesinin fazı, kullanılan broth veya agar besiyeri ve antimikrobiyal ajan saklama koşulları gibi değişkenler sıkı bir şekilde kontrol edilmelidir.
Amaç
Antimikrobiyal duyarlılık testi için sıvı dilüsyon yöntemini öğrenmek
Malzemeler
Besin suyu (varsa Mueller-Hinton)
Steril tüpler
Ml başına 128 ‘g ampisilin içeren et suyu
Steril 1 ve 5 ml pipetler
Pipet için ampul veya başka bir aspirasyon cihazı
Steril salin tüpleri (tüp başına 5,0 ve 9,9 ml)
Escherichia coli’nin gecelik tabak kültürü
Prosedürler
1. Dokuz steril tüpü bir rafa yerleştirin ve etiketleyin:
2. 5 ml’lik bir pipetle her tüpe 0,5 ml steril et suyu ekleyin.
3. 0.5mloftheampicillinbrothefirsttube (şek.15.1a) ekleyin. Pipeti atın .ampisillinin konsantrasyonu bu tüp, ml başına 64 ‘g’dır.
4. Yeni bir pipet alın, ilk tüpe koyun (ml başına 64 ‘g), içeriği iyice karıştırın ve bu tüpü ikinci tüpe (ml başına 32 ‘g) koyun. Pipeti atın.
5. Yeni bir pipetle ikinci tüpün içindekileri karıştırın ve 0,5 ml’yi üçüncü tüpe aktarın (ml başına 16 ‘g).
6. Seyreltme işlemine alt numara ile devam edin 7. Sekizinci ve dokuzuncu tüpler antibiyotik alır.
7. Yedinci tüpün içeriği karıştırıldıktan sonra, tüm tüplerdeki son hacim 0,5 ml olacak şekilde 0,5 ml et suyunu atın.
8. E. coli plak kültüründen organizmanın bir McFarland 0,5’e eşdeğer 5 ml salin içinde bir süspansiyonunu hazırlayın.
9. 1 ml steril pipet ile 0,1 ml E. coli süspansiyonunu 9,9 ml salin içeren bir tüpe aktarın.
10. Yeni bir pipetle tüpün içeriğini iyice karıştırın. Bu organizma süspansiyonundan 0.1 ml antibiyotik içeren broth tüplerine 1 ila 7 ve büyüme kontrol tüpüne ekleyin.
11. Rafı yavaşça çalkalayarak tüp içeriğini karıştırın ve tüpleri 18 ila 24 saat inkübatöre yerleştirin.
Sonuçlar
Bulanıklık olup olmadığını anlamak için her tüpü inceleyin. Sonuçları tabloya kaydedin ve test edilen E. coli suşu için ampisilinin MIC’sini belirtin.
Minimum İnhibisyon Konsantrasyonu nedir
Minimum inhibisyon konsantrasyonu testi nasıl yapılır
Mic MBC nedir
Mik nedir Tıp
Mik nedir Mikrobiyoloji
Antibiyotik duyarlılık testi Mikrobiyoloji
Mbk nedir Tıp
Antibiyotik duyarlılık test sonuçları nasıl değerlendirilir
DENEY : Sterilite Kontrolü
Antimikrobiyal Ajanlara Bakteriyel Direnç: Enzimatik
Antimikrobiyal ajanların aktivitesi genellikle çok spesifiktir ve esas olarak temel bakteri hücre yapılarını veya biyokimyasal süreçleri etkiler. Örneğin penisilin, bakteri hücre duvarı sentezine müdahale eder, gentamisin protein sentezini inhibe eder ve sülfonamidler folik asit sentezini bloke eder.
Birkaç on yıllık yaygın antimikrobiyal ajan kullanımı sırasında, bakterilerin neredeyse bilinen her ajanın aktivitesini inaktive etme veya bir şekilde engelleme kabiliyetine sahip olduğu ortaya çıktı.
Antimikrobiyal ajanlara direnç, bakteriyel kromozom üzerindeki bir gendeki bir mutasyondan veya bir veya daha fazla “direnç” genini (R faktörü) taşıyan bir plazmitin (ekstra kromozomal DNA) başka bir organizmadan edinilmesinden kaynaklanabilir.
Bir R faktörünün edinilmesi, daha önce duyarlı bir bakteriyi birden çok antimikrobiyal ajana dirençli hale getirebilir. Bakteri direncinin en yaygın mekanizmalarından biri, bakteriyi etkilemeden önce antimikrobiyal ajanları yok eden spesifik enzimlerin üretilmesidir.
Örneğin penisilinaz, penisilin molekülü üzerinde beta-laktam halkası adı verilen belirli bir yapıyı kırarak (penisilinazın eşanlamlısı beta-laktamazdır) penisilini inaktive eden bir enzimdir.
Bakteri hücresindeki bir plazmid üzerindeki bir gen, bu enzimin oluşumu için talimatlar sağlar.
Penisilinaz plazmidinin taşınması bir zamanlar belirli stafilokok suşları ve gram-negatif basil ile sınırlı görünmesine rağmen, şimdi daha önce evrensel olarak penisilin veya türevlerine duyarlı olduğu düşünülen bazı bakteri suşlarında bulunur.
Bunlar, etkili bir aşı bulunmadan önce çocuklarda ciddi enfeksiyonların bir nedeni olan Haemophilus influenzae ve gonore ajanı Neisseria gonorrhoeae’yi içerir.
Bakteriyel enzimler, penisilin dışındaki antimikrobiyal ajanlara dirençten de sorumlu olabilir.
Örneğin, gentamisin ve kloramfenikol, bu ilaçlara özel enzimler tarafından etkisiz hale getirilebilir, ancak bakterilerin belirli antimikrobiyal ajanların etkisine direnebileceği ek mekanizmalar vardır.
Bunlar, kritik bakteriyel enzimlerdeki veya proteinlerdeki değişiklikleri, artık ilaçtan doğrudan etkilenmeyecek şekilde içerir; veya hücreyi daha az geçirgen yapan ve ajanın girişini engelleyen bakteri hücre duvarı veya zarındaki değişiklikler vardır.