Mikroorganizmaların Kültüre Alınması – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Çevreden Mikroorganizmaların Kültüre Alınması
Amaç
Bulaşan mikroorganizmaların kaynaklarını belirlemek için çevrenin seçilen bölgelerinden kültür almak
Malzemeler
Besin suyu
Besleyici agar plakaları
Steril bezler
Prosedürler
1. Nemlendirmek için besin suyuna bir pamuklu çubuk yerleştirin. Eküvyonu geri çekerken fazla sıvıyı boşaltmak için tüpün iç duvarına bastırın.
2. Bu pamuklu çubukla yaklaşık 10 cm kare bir alan üzerinde ovalayarak ve döndürerek zeminden bir kültür alın.
3. Bir kenara yakın küçük bir alan üzerinde döndürerek swab ile bir agar plağını inoküle edin. Çubuğu atın ve telinizi kullanın
izole koloniler elde etmek için plakayı sürme yöntemi ile ekim yapın.
4. Başka bir eküvyonu et suyunda nemlendirin ve havalandırıcı veya süzgeç çevresindeki alanda lavabo musluğundan bir kültür alın. Aşılama ve 3. adımda olduğu gibi başka bir agar plakasını sürme yöntemi ile yapın.
5. Yeni bir agar plakası alın ve sağ elinizin her bir parmak ucuyla agar yüzeyinin ayrı alanlarına dokunun.
6. Lavaboya bir agar plakası alın. Bir rafa veya küvete yerleştirin, üst kısmını çıkarın ve agarı 30 dakika açıkta bırakın. Plakayı kapatın, ters çevirin ve 35 ° C’de inkübe edin.
7. Tozun biriktiği herhangi bir alan (pencere çıkıntıları, açık raflar, temizlenmesi zor alanlar) için laboratuvarın çevresine bakın.
Nemli bir çubukla bir toz kültürü alın, inoküle edin ve bir agar plağına sürme yöntemi ile ekim yapın.
8. Laboratuvar önlüğünüzün önünde 5 cm kare alandan bir kültür (nemli bir çubukla) alın. Bir plağı aşılayın ve sürme yöntemi kullanın.
9. Saçınıza nemli bir bez sürün. Bir plağı aşılayın ve sürme yöntemi ile ekin.
10. Tüm plakları ters bir şekilde 35 ° C’de inkübe edin.
Bakteri stok kültürü
Bakteri gliserol stok
Mikrobiyoloji kültür Çeşitleri
Mikrobiyoloji kültür ekimi
Besiyeri nedir
Stok kültür nedir
Kültür koruma yöntemleri
Kültür saklama yöntemleri
Sorular
1. Daha fazla gram pozitif veya gram negatif organizma buldunuz mu:
Parmaklarınızın yüzeyinde mi? Toz içinde mi? Muslukta mı? Giysilerinizde mi? Herhangi bir farklılığı açıklayabilir misiniz?
2. Kültürlerinizde endospor oluşturan bakteri buldunuz mu? Varsa hangi kültürler?
3. Bir hastanenin hangi alanlarında, çevredeki mikroorganizma sayısı kesinlikle minimuma indirilmelidir?
4. Mikrobiyologlar neden laboratuvar önlüğü giyerler? Bunun gerekli olduğunu doğruladınız mı?
5. Bir hastaya bakarken neden temiz, koruyucu kıyafet giymek gerekir?
6. Hastalara bakarken saçlar neden temiz tutulmalı ve uzak tutulmalıdır?
7. Ortamdaki mikroorganizma sayıları nasıl kontrol edilebilir?
8. Hasta bakımında el yıkama ne zaman ve neden önemlidir?
9. Hastalara bakanlar, aralarında mikroorganizmaların yayılmasını nasıl önleyebilirler?
Fiziksel Antimikrobiyal Ajanlar
Sterilizasyon teknikleri kullanıldığında tüm mikrobiyal yaşam biçimlerinin tamamen yok edileceğinden emin olabiliriz. Sterilizasyon terimi mutlak bir terimdir; canlı hücrelerin tamamen, geri döndürülemez bir şekilde yok edilmesi anlamına gelir.
Ultraviyole veya iyonlaştırıcı radyasyon, ultrasonik dalgalar veya tam kuruluk gibi bir dizi fiziksel çevresel ajan, mikroorganizmalar üzerinde baskı uygular ve onları öldürebilir, ancak bir laboratuvar kültüründe veya klinik bir örnekte büyük mikroorganizma konsantrasyonlarını yok edemezler.
Ultraviyole ışınlarına maruz kaldıklarında veya örneğin temiz bir cerrahi pakette bulunan kumaşlar tarafından korunduklarında ve her tarafa dağıtılırlarsa, az sayıda mikroorganizma bile tamamen yok edilemez.
Ultraviyole ışık, kumaşlar dahil çoğu maddeye nüfuz etmez ve bu nedenle esas olarak yüzeylerde bulunan mikroorganizmaları inaktive etmek için kullanılır. Mikrobiyoloji laboratuvarlarında, genellikle günün sonunda yüzeylerini dekontamine etmek için biyolojik güvenlik dolaplarının içinde ultraviyole lambalar kullanılır.
Antimikrobiyal etki gösteren tüm fiziksel maddeler arasında ısı en etkili olanıdır. Yeterli bir süre için yeterince yüksek sıcaklıklarda uygulandığında mükemmel bir sterilize edici ajandır çünkü hücresel aktiviteleri etkin bir şekilde durdurur.
Nemli veya kuru olmasına bağlı olarak, ısı hücresel proteinleri koagüle edebilir (haşlanmış bir yumurtayı düşünün) veya hücre bileşenlerini oksitleyebilir (yanmış bir parmak veya yanan bir kağıt parçası düşünün). Isı, mikroorganizmalar (veya diğer canlı hücreler) üzerindeki etkilerinde de seçici değildir, ancak bu avantajın canlı olsun veya olmasın tüm materyalleri yok etme kapasitesi ile dengelendiğini unutmamalıyız.
Alıştırmalar 12 ve 13’te nemli ve kuru ısı kullanarak bazı sterilizasyon örneklerini göreceğiz.
Nemli ve Kuru Isı
Belirli bir malzeme setini sterilize etmek için, uygun ısı ve nem koşulları kullanılmalıdır. Nemli ısı, mikrobiyal proteinleri (protein enzimleri dahil) pıhtılaştırarak onları geri dönüşü olmayan bir şekilde etkisiz hale getirir. Kuru durumda, protein yapıları daha kararlıdır; bu nedenle kuru ısının sıcaklığı çok daha yükseğe yükseltilmeli ve nemli ısıdan daha uzun süre muhafaza edilmelidir.
Örneğin, kuru bir fırında, sterilizasyon için 160 ila 170 ° C’de 1 ila 2 saat gereklidir; ancak, basınç altında buharla (otoklav, bkz. Alıştırma 13), 121 ° C’de sadece 15 dakika gerekebilir. Isı sterilizasyon yöntemlerinin seçimi daha sonra sterilize edilecek malzemelerin ısı duyarlılığına bağlıdır.
DENEY : Nemli Isı
Mikroorganizmaların ısıya tepkisini, onları farklı sıcaklıklarda öldürmek için gereken süreyi ölçerek nicelendirmek mümkündür. Standartlaştırılmış saf bir bakteri kültürünü belirli bir süre içinde (genellikle 10 dakika) sterilize etmek için gereken en düşük sıcaklık olabilir. bu türün termal ölüm noktası olarak adlandırılır ve tersine, kültürü belirli bir sıcaklıkta sterilize etmek için gereken süre, termal ölüm zamanı olarak belirlenebilir.
Amaç
Kontrollü zaman ve sıcaklık koşulları altında uygulanan nemli ısı ile mikroorganizmaların yok edildiğini göstermek
Malzemeler
Tüplü besleyici et suları (5 ml’lik alikotlar)
Besleyici agar plakaları
Steril 1,0 ml pipetler
Staphylococcus epidermidis’in 24 saatlik et suyu kültürü
Altı günlük Bacillus subtilis’in et suyu kültürü
Prosedürler
1. Bir beher su banyosu kurun ve kaynamaya kadar ısıtın.
2. Bir besleyici agar plakasını, plakanın altını balmumu kalem veya mürekkep kalemi ile işaretleyerek ikiye bölün.
3. Bir öze dolusu S. epidermidis kültürünü besleyici agar plakasının yarısına sürün. Plakanın bölümünü şu şekilde etiketleyin:
organizmanın adı ve Kontrol kelimesi.
4. Plakanın ikinci yarısını inoküle ederek subtilis kültürü ile 3. adımı tekrarlayın.
5. “Kontrol” plakasını 24 saat 35 ° C inkübatörün içine yerleştirin.
6. İki besleyici agar plakasını, plakaların altını balmumu kalem veya mürekkep kalemi ile işaretleyerek 4 çeyreğe bölün.
Bir plakayı S. epidermidis ve diğer B. subtilis olarak etiketleyin. Her plakadaki 4 çeyreği şu şekilde etiketleyin: 5, 10, 15, 30 dakika aralıklarla.
7. Sırasıyla 0.1ml epidermidis ve B. subtilis ile alın.Tüpleri kaynar su banyosuna yerleştirin. Zamanı not edin.
8. Et suyu kültürlerini 5 dakika kaynar suda bırakın. Tüpleri çıkarın ve çalışma altında hızla soğutun soğuk musluk suyu kullanın. 5 dakika etiketli besleyici agar çeyreğine kaynatılmış her kültürden bir öze dolusu ekin.
9. Tüpleri 5 dakika daha kaynar su banyosuna geri koyun. Su tamamen kaynamaya başladığında zamanlamaya başlayın.
8. adımda olduğu gibi tüpleri soğutun, ardından her kültürden bir öze 10 dakika etiketli besleyici agar çeyreğine sürme yöntemi ile ekin.
10. 9. adımı iki kez daha tekrarlayın, 15 ve 30 dakika olarak etiketlenmiş plakaların çeyrek çeyrekleri üzerine öze dolusu kültür ekin.
11. Kaynatılmış tüplerden alt kültürleri 35 ° C’de 24 saat inkübe edin.
Bakteri gliserol stok Bakteri stok kültürü Besiyeri nedir Kültür koruma yöntemleri Kültür saklama yöntemleri Mikrobiyoloji kültür Çeşitleri Mikrobiyoloji kültür ekimi Stok kültür nedir