Kültürden Hücreler
Bu, hasta hücrelerindeki DIF’ye çok benzer. Varsayılan bir CPE’nin hızlı bir şekilde doğrulanmasının faydaları kliniktir ve laboratuvar zamanından ve kaynaklarından tasarruf sağlar. HSV-1 ve HSV-2’nin farklı ilişkileri olduğundan ve farklı bölgelerde tekrarlayan hastalığa neden olma eğilimleri değiştiğinden, virüs tipini bilmek yararlıdır ve bu tipe özgü antikorlarla yapılabilir.
Adenovirüslerde (hekson antijeni) veya enterovirüslerde (VP1 antijeni) bulunan ortak gruba özgü antijenlere karşı monoklonal antikor, sırasıyla bu grupların üyeleri tarafından üretilen CPE’yi doğrulamak için kullanılabilir.
Büyüme döngüsünün erken döneminde üretilen virüs antijenleri
CMV, antiviral tedaviye ihtiyaç duyan nakil alıcılarında ciddi bir patojen olarak kabul edildiğinde, bu virüsü geçmişte olduğundan çok daha hızlı tespit etmek zorunlu hale geldi. Gleaves (ABD) ve Griffiths (İngiltere), viral DNA ve sonraki antijenlerin ve bir CPE’nin ortaya çıkması için geçen günlere kıyasla, birkaç saat sonra ortaya çıkan CMV erken antijenlerini aramanın değerini belirledi.
‘Kabuk flakon’ terimi ABD’den gelirken, Birleşik Krallık’ta test DEAFF testi (Erken Antijen Floresan Odaklarının Tespiti) olarak anılırdı. VZV’nin erken antijenleri de ara sıra aranır. Kabuk flakon sisteminin daha geniş kullanımı ABD’de ve birçok laboratuvarın özellikle solunum yolu virüs tespiti için kullandığı Avrupa ana karasında popüler hale gelmiştir.
Kendi deneyimlerimiz, bu bakımdan, adenovirüs göz enfeksiyonlarının erken tespiti ve ayrıca VZV’nin hızlı ve gelişmiş izolasyon oranı için çok yararlı olduğunu göstermiştir. Kabuk flakon IF örnekleri gösterilmiştir.
Hücre kültürlerinin mikroskobik incelenmesi
Bakterilerin veya mantarların büyümesine bağlı talihsiz bulanıklık veya asitlik durumunda olduğu gibi, hücre kültüründeki bazı büyük değişiklikler çıplak gözle görülebilmesine rağmen, virüs büyümesi tarafından üretilen değişiklikler tespit edilmeden önce mikroskobik inceleme gereklidir. Seri gözlemler günler ve hatta haftalar boyunca yapılır ve sonraki testler için virüsün taze kültürlere geçirilmesi gerekebilir, bu nedenle kültürler boyanmadan incelenir.
Hücre kültürü uygulamaları
Hücre hattı Nedir
Hücre kültürü Nasıl yapılır
Hücre kültürü Çeşitleri
Hücre kültürü nedir
Hücre kültürünün Kullanım Alanları
Primer hücre kültürü nedir
Sekonder kültür nedir
Dinlenme, kültür tüpünü mikroskop aşamasında tutarken, hücre tek tabakasının tüm alanı, alt besleme kondansatörü indirilmiş olarak düşük güçte (4 veya 10 hedef kullanılarak) dikkatlice taranır. Değiştirilmiş hücrelerin odak alanları daha sonra daha yüksek büyütmede incelenir.
Tam bir sağlıklı hücre tek tabakası (aynı hücre grubundan aşılanmamış kontrol tüpü) ile enfekte hücreler toplanıp düşerken deliklerin göründüğü veya hücre gruplarının büyük kümeler oluşturduğu arasındaki farkı fark etmek zor değildir, ancak bu farklı hücre kültürlerindeki spesifik virüsler tarafından üretilen karakteristik sitopatik etkinin tanınmasında gerçek uzmanlık geliştirmek için oldukça fazla deneyim ve dikkatli, düzenli gözlem gerektirir.
Rutin hücre kültürlerinde sitopatik etkiler
Dejeneratif CPE: poliovirüs ve rino virüsler gibi enterovirüslerde görülen, kısa süre sonra tüpün yüzeyinden düşen yuvarlak, büzülmüş hücreli dağınık alanlar.
Kümelerdeki yuvarlak, kırılgan, şişmiş hücreler: adenovirüs (HEp2 hücrelerinde “üzüm salkımı”) ve HSV ile görülür. HSV çok hızlı büyür, aşılamadan sonraki gün birkaç yamada (“plak”) başlar ve ertesi gün tek tabakaya yayılır. Özellikle HSV-2 ile küçük sinsityalar görülür.
Sitomegalovirüs CPE: oldukça benzersiz, çok yavaş ilerliyor ve insan fibroblast kültürlerinde şişmiş (sitomegalik) hücrelerin uzun odaklarını sergiliyor.
Klasik sinsityal CPE: taze HEp2 hücrelerinde büyüyen RSV’nin ayırt edici özelliği, ancak çok çekirdekli dev hücreler de hassas hücre hatlarında kızamık ve VZV ile birlikte görülür. Özellikler, her durumda eğitimli göze göre farklıdır.
HIV rutin olarak kültürlenmez, ancak büyümesi, mono-nükleer kan hücresi kültürlerinde tek tabakalar olarak değil, süspansiyon halinde büyüyen sinsitinin ortaya çıkmasıyla tanınabilir.
İnsan herpesvirüs tip 6 (HHV6) 1986 yılında periferik kan kültürlerinde sinsityal CPE ürettiği zaman keşfedildi ve daha ileri incelemelerde HIV olmadığı, ancak daha önce bilinmeyen bir herpesvirüs olduğu ortaya çıktı. En son meşhur CPE, SARS ile ilişkili daha önce bilinmeyen insan koronavirüsünün ilk kültürlerinde gözlemlenmesiydi.
Hücre kültüründe virüslerin sitopatik olmayan büyümesi
Viroloji mikroskobu, hücre kültüründe bariz sitopatoloji üretmeden çoğalan bazı virüslerin olduğunun farkındadır. En iyi bilinen örnek, virüsün varlığının hemadsorpsiyonla ortaya çıkabildiği maymun böbrek hücrelerinde büyüyen influenza virüsleridir.
Virüs tarafından kodlanan ve hücre plazma zarına eklenen bir glikoprotein (hemaglutinin), yüzeye eklenen kırmızı kan hücrelerine bağlanabilir. Herhangi bir virüs replikasyonunun en erken aşamalarında, sadece tek hücreler enfekte olduğunda, bir CPE açık değildir, ancak viral antijenler mevcut olacaktır.
Sitopatik ajanların daha fazla araştırılması
Mikroskopist, aşılanmış bir kültürde tanınabilir bir CPE gözlemlendiğinde bitirmemiştir. Bilgilendirilmiş tanının doğrulanması beklenir ve daha fazla kimlik belirtilebilir. Onay testini CPE, hücre hattı, numune ve diğer faktörlere göre seçecek olan mikroskopistin yargısı, hızlı bir teşhise ulaşmak ve kaynakları korumak için kritik öneme sahiptir.
HSV’nin onaylanması ve yazılmasından daha önce bahsedilmiştir. Adenovirüs veya enterovirüs CPE artık hücrelerin IF’si ile doğrulanabilir, ancak tipleme bir nötralizasyon testi gerektirecektir çünkü pek çok farklı tip vardır.
Bu, iyi yetiştirilmiş bir izolatın alikotlarının ortak türleri kapsayan ayrı antiserum havuzları ile karıştırılmasını, taze kültürlerin aşılanmasını ve hangi antiserumun CPE’yi inhibe ettiğini, yani virüsün bulaşıcılığını nötralize ettiğini gözlemlemeyi gerektirir. Bu tipleme alıştırmaları nadiren klinik yönetimi etkiler ancak epidemiyolojik çalışmalar için önemlidir.
Gelişmeler
Teşhis virologu, virüs enfeksiyonlarının tanımlanması için tüm yaklaşımların en iyisine sahip olmak ister. Hızlı tespit, daha önce özetlenen nedenlerden dolayı kritiktir ve IF mikroskobu tek tek örnekler için kullanılmaya devam edebilirken, antijen yakalama enzimi immünolojik analizleri veya immünofiltrasyon, otomatikleştirilebilen daha az sübjektif yöntemler, daha büyük numunelerin taranması için kullanılabilir.
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile nükleik asidin moleküler amplifikasyonu, giderek artan virüs yelpazesinin en hassas tespitini sağlar ve laboratuvarlar, klasik izolasyon ve mikroskopi kullanımlarını azaltarak bu yaklaşıma daha fazla yönelmektedir.
Epidemiyolojik tipleme ve antiviral duyarlılık testi de dahil olmak üzere kapsamlı bir hizmet sunan bir laboratuvarda, paralel olarak virüs izolasyon girişimleri gerekecektir. Artık geliştirilmiş kültür kullanılmaktadır ve özellikle şu anda kültive edilemeyen virüsler için hassas hücreler için devam eden bir araştırma vardır.
Hücrelerin genetik mühendisliğinin gelişmekte olan alanı, üç iplikli (eski ve yeni) hücre kültürünü birleştiren HSV için test edilmiş enzime bağlı virüsle indüklenebilir sistemler (ELVIS) gibi daha yeni yaklaşımlar sağlayabilir.