Kültür Testleri
Bir mantarın klinik bir örnekten kültürel izolasyonu ve ardından tanımlanması, bir mantar hastalığının etiyolojisini belirlemek için kesin testtir.
Mantarları klinik örneklerden izole etmek için en yaygın olarak kullanılan Sabouraud dekstroz agardır. Mantarların çoğu oda sıcaklığında iyi büyür; ancak, mantara bağlı olarak, iyileşmesi ve tam karakterizasyonu için birkaç gün ila haftalar veya aylar gerekebilir. Aşağıdaki tartışma, mayaları ve küfleri tanımlamak için kullanılan bazı kültürel prosedürleri özetlemektedir.
Mayalar. Candida türleri ve Cryptococcus neoformans gibi mayalar heterojen bir gruptur. Tanımlamaları kolonyal ve hücresel morfoloji ve biyokimyasal özelliklere dayanmaktadır. Morfoloji, esas olarak cins tanımlamasını oluşturmak için kullanılırken, çeşitli türleri ayırt etmek için biyokimyasal testler kullanılır.
1.Germtubetest: Candidaalbicans tarafından neden olunan maya enfeksiyonlarının% 90’ından fazlası. Bu türleri tanımlamak için kullanılan ucuz yöntemdir.
1 ml at serumu içeren bir tüpe inoküle edildiklerinde, tüm C. albicans suşları 35 ° C’de 2 saat inkübasyon içinde germ tüpü adı verilen özel bir yapı üretir. Diğer tüm maya izolatları aynı süre içinde “germ tüpü negatiftir” ancak 2 saati geçen uzun süreli inkübasyon yanlış pozitif testlere neden olabilir.
2. Biyokimyasal karakterizasyon: Mayaları tür düzeyinde tanımlamak için kullanılan geleneksel testler, çeşitli karbonhidratların asimilasyonunu ve / veya bozunmasını içerir. Bu testler, bakteriyel tanımlama sistemleri gibi artık ticari olarak kit formunda mevcuttur.
Popüler sistemler arasında, tümü klasik karbonhidrat bozunması ve asimilasyon tekniklerinin modifikasyonları olan Minitek, API 20C Maya Tanımlama Sistemi, Uni-Yeast-Tek Sistemi ve otomatik bioMerieux-VitekYBC bulunmaktadır. Tanımlama sonuçları genellikle 24 ila 72 saat içinde alınır.
Kültür testi nasıl yapılır
Kan kültür testi Nedir
Kültür testi kaç günde çıkar
Vajinal kültür testi nedir
Vajinal kültür testi fiyatı
Bebeklerde idrar kültürü değerleri
Hamilelikte vajinal kültür testi nasıl yapılır
İdrar kültürü testi Nerede yapılır
Kalıplar. İpliksi mantarların (küflerin) tanımlanması, büyüme hızı, kolonyal görünüm, mikroskobik morfoloji ve bazı metabolik özellikler gibi bir dizi faktöre bağlıdır. Çoğu küfü güvenilir bir şekilde tanımlamak için son derece deneyimli bir teknoloji uzmanı veya mikolog gereklidir.
1. Makroskopik görünüm: Dev bir koloni kültürü (bir kültür plakasının merkezinde yetiştirilen tek bir koloni) genellikle bir küfün büyüme oranını belirlemek ve kolonyal görünümünü (renk, hif dokusu, vb.) gözlemlemek için hazırlanır.
Plakanın alt tarafı da (“ters” olarak adlandırılır) incelenir çünkü bazı mantarlar yalnızca arka taraftan görülebilen yayılabilir bir pigment üretirler. Bu makroskopik özellikler, mantarın ön tanımlanmasında faydalıdır.
2. Mikroskobik görünüm: Bir küfün doğru tanımlanması, konidia ve bunların taşındığı mantar yapılarının mikroskobik incelemesine dayanır. Mikroskobik preparatlar, doğrudan kültürden yapılabilir veya mikologlar, bu sporlanan yapıların, karakteristik düzenlemelerini bozmadan çeşitli büyüme aşamalarında mikroskobik olarak görüntülenmesine izin veren bir slayt kültürü tekniği kullanabilir.
Bir slayt kültürü hazırlamak için, küçük bir kare Sabouraud agar bloğu, steril bir petri kabındaki steril mikroskop lamı üzerine yerleştirilir. Agar, tanımlanacak mantar ile aşılanır ve ardından bir kapak camı ile kapatılır.
Atmosferi nemli tutmak ve agar ortamının kurumasını önlemek için tabağa bir parça ıslak pamuk yerleştirilir. Çanak ve slayt, oda sıcaklığında veya 25 ila 30 ° C’lik bir inkübatörde inkübe edilir.
Slayt doğrudan mikroskop altında görüntülenebilir veya kapak camı çıkarılabilir, laktofenol pamuk mavisi ile boyanabilir ve görüntüleme için temiz bir slayt üzerine monte edilebilir. Bu slayt kültür sistemi, cins ve tür tanımlamasına izin veren mantar yapılarını gözlemleme şansını artırır.
Aşağıda gösterildiği gibi bir Scotch bant preparatı, agar plakalarında büyüyen kolonilerden hazırlanabilir. Bu tip bir preparasyon ayrıca mantar yapılarının karakteristik morfolojilerinde minimum bozulma ile görüntülenmesine izin verir. Tablo 31.2, bazı önemli patojenik mantarların olağanüstü morfolojik özelliklerini göstermektedir.
Bu alıştırmada hem taze hem de hazırlanmış materyalleri inceleyeceksiniz.
Amaç
Bazı mantarların mikroskobik yapılarını gözlemlemek
Malzemeler
Sabouraud agar yatık kültür Candida albicans
1.0 ml inaktive at serumu içeren tüpler
Sabouraud agar plak kültürleri Aspergillus, Rhizopus, Penicillium
Kanlı agar plakları 3 ila 5 gün önce evde, sınıfta, toplu taşıma araçlarında vb. 30 dakika süreyle maruz bırakılmıştır.
Cam mikroskop slaytları ve lameller
Şeffaf bant (örneğin, Scotch bant)
Laktofenol pamuk mavisi ve metilen mavisi içeren damlalıklı şişeler Kapiler pipetler ve pipet ampulleri
Dermatofitlerin hazırlanmış slaytları
Sistemik bir mantarın maya ve küf fazlarının hazırlanmış slaytları
Varsa projeksiyon slaytları
Prosedürler
1. Candida albicans tüpünden az miktarda maya büyümesi toplayın.
2. Büyüme ile bir tüp at serumunu hafifçe inoküle edin. Bulanık bir süspansiyon yapmayın. Tüpü 35 ° C’de 2 saat inkübe edin.
3. 2 saatin sonunda, bir mikroskop lamı üzerine küçük bir damla serum süspansiyonu yerleştirmek için kapiler pipet kullanın. Damlayı bir lamel ile örtün. Mikroskobunuzun düşük ve yüksek kuru gücü altında slaytı inceleyin.Mikroskobunuzun iris diyaframını kısmen kapatarak ışık yoğunluğunu azaltmanız gerekecektir.
4. Test pozitifse, birkaç göz hücresinden tüm stalkor veya “germtube” filizlenmesini görmeniz gerekir. Bu, mayanın Candida albicans olarak tanımlanmasını doğrular.
5. Germ tüpleri ile ve bunlar olmadan gördüğünüz maya hücrelerinin bir çizimini yapın.
6. Candida kültürünün bir Gram boyasını yapın ve gözlemlerinizi çizin.
7. Aşağıdakiler için Aspergillus, Rhizopus ve Penicillium büyümesinin şeffaf bir hazırlığını hazırlayın: Temiz bir mikroskop lamı üzerine bir damla laktofenol pamuk mavisi koyun. Kalıplardan birinin bir tabak kültürünü dikkatlice ortaya çıkarın. Mikroskop lamının uzunluğundan biraz daha uzun (yaklaşık 4 inç) bir parça şeffaf bant kesin. Bandı yapışkan tarafı aşağı bakacak şekilde U şeklinde tutun ve bir küf kolonisinin yüzeyine hafifçe dokunun. Koloni büyümesinin bir kısmı banda yapışacaktır. Koloni büyümesi laktofenol pamuk mavisi ile temas edecek şekilde bandı mikroskop lamı boyunca yapışkan tarafı aşağı gelecek şekilde yerleştirin. Ekstra uzunluktaki bandı sürgünün kenarlarının etrafından katlayın. Mikroskobunuzun düşük ve yüksek kuru hedefleri altında germ tüpü hazırlığını yaptığınız gibi slaytı inceleyin.
8. İşlemi, ortama maruz bıraktığınız kanlı agar plakalarında üreyen tüm küfler için tekrarlayın.
9. Sonuçlarınızı kaydedin.
10. Hazırlanan slaytları inceleyin ve gözlemlerinizin çizimlerini yapın.
Sonuçlar
1. Gözlemlediğiniz tüm Candida albicans yapılarını gösteren bir şema çizin.
2. Bakterilerle karşılaştırıldığında maya hücrelerinde gözlemlediğiniz temel farklılıkları listeleyin.
3. Aşağıdakilerin her birinin conidia, conidia taşıyan yapıları ve hiflerini çizin.
4. Çevreye maruz bıraktığınız kanlı agar plakalarında büyüyen üç küfün conidia, conidia taşıyan yapıları ve hiflerini çizin. Daha önce gözlemlediğiniz mantarlardan herhangi birine benziyorlar mı?
5. Sistemik bir mantarın her aşamasında gördüğünüz mikroskobik yapıları çizin.