MEKC yöntemini 3- (4-karboksibenzoil) kinolin-2-karboksaldehit (CBQCA) ile türetme ile kombinasyon halinde kullanan temsili bir amino asit serisinin ilk çalışması, ” ninhidrin-pozitif madde ” TLC’nin yetersizliği sorununu gösterdi. Şu anda EP’de bulunan test: örneğin histidin serilerinde bilinmeyen safsızlık bulundu.
Dahası, izolösin partilerinin analizi, glisin, lösin ve valin amino asitleri dahil olmak üzere bir dizi safsızlığın varlığını ortaya çıkardı (bakınız Şekil 2). Bu safsızlıkların hiçbiri “ninhidrin-pozitif madde” TLC testinde bulunmadı. Bununla birlikte, tüm safsızlıkların% 0.1’lik yeterlilik sınırının altında olduğu bulundu, ancak triptofandaki ppm konsantrasyon aralığındaki bir kirlilik, yüzlerce hastada eozinofili miyalji sendromunu ve 15 yıl önce bazı ölümleri oluşturdu. Bu nedenle, amino asit monograflarının revizyonuna acilen ihtiyaç vardır.
Bununla birlikte, doğal olarak oluşan birçok amino asidin revizyonu devam etmektedir. Diğer amino asitlerin sınırlandırılması için iyon kromatografisi, amino asit analizi, HPLC ve CZE gibi çeşitli yöntemler mevcuttur ve duruma göre test edilmelidir. Ek olarak, amino asitle ilgili olmayan diğer maddeler için testler geliştirilmelidir. Muhtemelen farklı menşeli maddeler (sentez, fermantasyon veya protein hidrolizi ile üretim) farklı yöntemlere ihtiyaç duyabilir. Ek olarak, enantiyomerik saflık için bir test dahil edilmelidir.
Tripeptid glutatyon, GSSG verecek şekilde kolayca oksitlenen l-g-glutamil-sisteinilglisinden oluşur. Tripeptidin tek amino asitlerinin yanı sıra karşılık gelen dipeptidler, safsızlıklar, yani sistein, l-sisteinilglisin ve l-g-glutamil-1-sistein olarak kabul edilmelidir.
JP ve Japon üreticileri, HPLC çalışması sırasında numunede bozulma olmadan safsızlıkları değerlendirmede başarısız olan HPLC yöntemlerini26 kullanırlar. Buna karşılık, EP’de sunulan CE yöntemi, safsızlıkları herhangi bir bozulma olmadan% 0.1 seviyesine kadar ayırabilir ve sınırlayabilir36 (Şekil 3). Ayrıca, bozulma CE yöntemi ile de gözlemlenebilir.
Aspartam ve birçok ilgili bileşik gibi peptitlerle oldukça fazla temel CE çalışmasının halihazırda yapılmış olduğu dikkate alındığında, CE’nin EP’de dikkate alınma şansı yüksektir. Bununla birlikte, proteinler EP’ye girmeyi başardı. “Eritropoietin konsantre çözeltisi”, CZE ile tanımlanır. Trişin, NaCl, Na-asetat, üre ve putresini içeren bir çalışan tampon kullanılarak, eritropoietinin tüm izoformları başlangıçta ayrılır ve içeriklerinden kaynaklanan tipik bir model verir.
Böylece, izoformların sayısı kolaylıkla belirlenebilir.41 Son zamanlarda Neusu’ss et al. daha da iyi performans gösteren bir CEmass spektrometresi (elektrosprey-uçuş süresi) yöntemi yayınladı. Bu yöntem, proteinin asetilasyonları dahil olmak üzere 44 glikoformu ve toplamda yaklaşık 135 rekombinant insan eritropoietini izoformunu ayırt edebilir. CEMS hecelemesine bağlı olarak, pH 2.6’da sulu asetik asit ve% 20 metanolden oluşan uçucu bir çalışan tampon uygulandı.
Son zamanlarda, rekombinant DNA (rDNA) teknolojisi ile üretilen insan büyüme hormonu somatropinin safsızlık profillemesi için bir CE yöntemi tanıtıldı.
EP, bir elektrolit olarak pH 6.0’da bir amonyum fosfat tamponu, kaplanmamış bir kaynaşmış silika kapiler ve 200 nm’de bir UV saptaması ile karakterize edilen bir CZE yöntemi ile somatropinin yüklü varyantlarını, örneğin deamide formları sınırlar.
Buna uygun olarak aprotinin içinde des-Ala-aprotinin ve des-Ala-des-Glyaprotinin için test hem EP hem de USP XXX’te CE aracılığıyla yapılacaktır. Çalıştırma tamponu olarak pH 3.0’lık bir fosfat tamponu, kaplanmamış bir kaynaşmış silika kapiler ve 214 nm’de bir UV saptaması kullanılarak her iki katışkı% 8.0 ve 7.5 ile sınırlandırılabilir (normalleştirme prosedürü).
Bu, biyoteknolojik endüstrilerde rDNA’dan türetilmiş biyofarmasötiklerin proses ve ürün izlemesinde geleneksel CE uygulamasının sonucudur. Bununla birlikte, ilgili proteinler ve dimer ve daha yüksek moleküler kütleli somatropin ve aprotinin ile ilgili maddeler, sırasıyla, EP tarafından HPLC ve boyut dışlama kromatografisi vasıtasıyla değerlendirilir.
Birlikte ele alındığında, peptitlerin ve proteinlerin safsızlık profili, CE yöntemlerinin ortaya çıkan alanlarından biridir ve EP’de muhtemelen başka uygulamaların beklenmesi beklenmektedir. Bununla birlikte, EP antibiyotikler gentamisin ve basitrasin durumunda üstün MEKC yöntemlerini uygulamaya koyma şansını değerlendirmedi. Her iki durumda da, düşük seçicilik ve etkinliğe sahip bir HPLC yöntemi şu anda açıklanmaktadır.
Kiral Nedir
Enantiomer nedir
Kiralite Nedir
TDK kıral
Kiral Akiral Örnekleri
KİRAL ANALİZ
Piyasadaki ve uluslararası farmakopelerde bulunan ilaçların saf enantiyomerlerinin sayısı artmaktadır. Halihazırda enantiyomerik saflık, özellikle optik rotasyonun küçük açıları söz konusu olduğunda, oldukça duyarsız bir yöntem olan optik rotasyon aracılığıyla belirlenir. Kiral durağan fazları kullanan kiral HPLC uzun süredir devam eden bir geleneğe sahip olduğundan, hem USP hem de EP’de birkaç uygulama bulunabilir.
Bununla birlikte, yöntemler her zaman kiral sütunların çok sağlam olmaması dezavantajından muzdariptir. Ek olarak, kiral kolonlar son derece pahalıdır. Karşılaştırıldığında, kiral CE, özellikle siklodekstrin ile modifiye edilmiş CE ana yöntemdir, daha ucuzdur, genellikle çok daha verimlidir ve yöntem geliştirme çok daha hızlıdır.
BGE’ye kiral katkı maddeleri olarak sülfatlanmış CD, SBE-CD ve HDAS-CD’ler gibi özellikle negatif yüklü CD’leri (yani, a-, b- ve g-CD) kullanarak, hemen hemen tüm rasematlar ayrılabilir. bildirilen binlerce uygulama ile kanıtlanmıştır. Bu nedenle, USP son zamanlarda CD modifiye CE’yi kullandı. Ropivakainin enantiyomerik saflığı, pH 2.9-3.1 olan bir fosfat tamponunda heptakis (2,6-di-O-metil) -b-CD aracılığıyla test edilir.
Yöntem, S izomerinin% 99,5’i varlığında R-enantiyomerinin% 0,5’ini sınırlayabilir. EP bu yöntemi kopyalayacak. Levotiroksin için bir yöntem tartışılmaktadır.
Birkaç laboratuvar arası denemede CE, kiral HPLC kadar iyi ve genellikle ondan daha iyi olduğu için daha fazla uygulama beklenmelidir. Sulu olmayan tampon koşulları altında bir heptakis (2,3-di-O-metil-6-O-sülfo) -b-siklodekstrin kullanılarak yakın zamanda bildirilen timolol enantiyomerlerinin ayrılması, yöntemin iyi performansının göstergesidir.
R-enantiyomerinin% 0,1’i, 12 farklı laboratuvarda% 99,9 S-timolol varlığında kesin olarak belirlenebilir, bu da yöntemin iyi bir sağlamlığını gösterir.
SONUÇLAR
EP’nin eski TLC yöntemlerini daha seçici, verimli ve hassas ayırma yöntemleriyle değiştirmek istemesi gerçeği, daha fazla CE yönteminin uygulamaya konulması için şans sağlar. Analitik yöntemlerin sürekli gelişimi, ulusal ve uluslararası farmakopelerde yansıtılmaktadır. Bu, atropin sülfat için gösterilebilir. Deutsches Arzneibuch, 7. Baskı (DAB 7) sadece tropik asidi NaOH ve fenolftalein endikasyonuyla ekstraksiyon ve titrasyon yoluyla sınırlarken, EP’nin 4. baskısı, tespit için potasyum iyodobismuthate ile TLC aracılığıyla yabancı alkaloidleri ve ayrışma ürünlerini araştırdı.
Elde edilen noktaların yoğunluk karşılaştırması ile bu safsızlıkları% 0.5 ile sınırlamak mümkün olmuştur. EP 5, safsızlıkların çoğunu% 0.2’den daha azıyla sınırlayabilen bir iyon çifti HPLC yöntemini kullanır. Yöntemi daha sağlam hale getirmek için, polar gömülü kullanan bir HPLC yöntemi uygulandı, bu EP için bir sonraki adım olabilir.51 Bununla birlikte, son zamanlarda aynı yazarlar bir MEEKC yöntemi hakkında son HPLC yöntemi kadar sağlam ve kesin olduğunu bildirdiler. Ancak çok daha hassas ve bu nedenle EP için gelecek perspektifidir.
USP, EP ve JP gibi başlıca uluslararası farmakopelere hangi yeni yöntemlerin uygulanacağını zaman gösterecek. CE, daha sık kullanılacak ana adaylardan biridir. Bir gösterge, geleneksel cihazların yanı sıra yeni üreticilerin CE cihazları üretmeye başlamasıdır. Ortaya çıkan rekabet, pazarı canlandıracak ve yeni ve daha etkili tekniklerin geliştirilmesini teşvik edecektir.