Basit Büyüme Gereksinimleri
Laktoz fermantasyonu genellikle, birincil izolasyonda bu organizmaların büyümesini destekleyen MacConkey agar üzerinde not edilir. Laktoz içermeyen fermenterler, daha sonra başka biyokimyasal testler ve ‘O’ (Salmonella ve Shigella) ve ‘H’ (yalnızca Salmonella) aglütinasyonu ile onaylanan olası Salmonella ve Shigella varlığı açısından bir üreaz testi veya ticari bir kit ile taranabilir.
Oksidaz pozitif cinsler, şekerleri fermente edenlere, örn. Vibrio ve Aeromonas ve fermente etmeyenler, ör. Pseudomonas. Fermente ediciler ve fermente etmeyenler için farklı ticari test şeritleri ve kartları gerekebilir.
Zorlu Büyüme Gereksinimleri
Bu grup içinde Campylobacter spp. morfolojileri ve 42 C’de mikro-aerofilik bir atmosferde üreme yetenekleriyle ancak 37 C’de havada büyümemeleri en kolay şekilde tanımlanırlar.
Haemophilus, Bordetella ve Brucella küçüktür, esasen hareketsiz Gram-negatif basillerdir ve MacConkey agar üzerinde kanlı agar üzerinde nispeten zayıf bir şekilde büyür veya hiç gelişmez. Bu, Pseudomonas ve Enterobacteriaceae’den kolaylıkla ayırt edilmelerine olanak tanır. Birincil izolasyon için zenginleştirilmiş, kan içeren besiyerine ihtiyaç duyarlar ve% 5-10 CO2 eklenmesi büyümeyi artırır.
Haemophilus spp. solunum yolu örneklerinden yaygın olarak izole edilir. Besleyici agarda gelişim için X ve V faktörleri için farklı gereksinimlerine göre belirlenirler. Bordetella, başlangıçta spesifik antiserum ile aglütinasyon yoluyla tanımlanabilir. Brucella, fuksin ve tiyonin boyalarına duyarlılık, CO2 gereksinimi ve H2S üretimi ile belirlenebilir (genellikle sağlık ve güvenlik nedenleriyle referans laboratuarları tarafından).
Anaeroblar
Sıkı anaeroblar, birincil izolasyon plakasına yerleştirilen bir disk tarafından saptanan, oksijen varlığında büyümemeleri ve metronidazole duyarlılıkları ile ayırt edilir. Ticari kitlerle veya gaz-sıvı kromatografisi ile metabolizma ürünlerinin tespiti ile belirtilebilirler.
Bununla birlikte, anaerob steril bir bölgeden, örn. kan veya yumuşak doku. Gram pozitif cinsler arasında Peptostreptococcus (cocci) ve Clostridium ve Actinomyces (basil) bulunur. Yaygın Gram negatif cinsler arasında Bacteroides, Fusobacterium, Prevotella, Porphyromonas (anaerobik basil) ve Veillonella (cocci) bulunur.
Kan kültür cihazı çalışma prensibi
Kan kültürü Nedir
kan kültürü (aerob-anaerob) otomatik sistem nedir
Kan kültürü şişesi
kan kültürü (aerob-anaerob) otomatik sistem üreme olmadı
Kan kültüründe üreyen bakteriler
Yenidoğan kan kültürü
Kan kültürü şişesi renkleri
Bakteriyolojide Otomatik Testler
Otomatik enstrümantasyon ilk olarak klinik mikrobiyoloji laboratuvarına 30 yıldan daha uzun bir süre önce sokulmuş olsa da, birçok mikrobiyolog bu konsepti tam olarak benimseme konusunda isteksiz davrandı. Bu, kısmen mikrobiyologlar arasındaki muhafazakar tutumdan kaynaklanıyordu; bu tutum, on dokuzuncu yüzyılın sonunda geliştirilen büyümeyi tespit etmek için yöntemlerin kullanımını sürdürüyor.
Diğer ilgili faktörler arasında laboratuvara sunulan örneklerin çeşitliliği ve karmaşık doğası, mikrobiyolojik testlerin daha karmaşık olması, bir cihazı mevcut laboratuvar rejimine entegre etmenin zorluğu ve önceki makinelerin çoğunun bunu yapmadığı gerçeği sayılabilir.
Bununla birlikte, teknolojideki son gelişmeler ve cihazlar ve laboratuar bilgisayar sistemleri arasında iki yönlü arabirim, şimdi otomasyonu pratik ve uygun maliyetli bir alternatif haline getirmiştir.
Günümüzde aletler birçok klinik mikrobiyoloji laboratuvarının ayrılmaz bir parçasıdır ve pozitif kan kültürlerinin tespiti, antimikrobiyal duyarlılık testi ve mikroorganizmaların belirlenmesi, idrar örneklerinin bakteriler için taranması ve izolasyon ve antimikrobiyal duyarlılık için otomatik ekipman mevcuttur. Mycobacterium tuberculosis’in klinik örneklerde görülür.
Bu bölümde açıklanan otomatik sistemler, halihazırda dünya pazarında bulunan tüm sistemleri veya gelip giden bazı sistemleri tamamen kapsamaz, ancak Birleşik Krallık’taki klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarında en sık karşılaşılanları temsil eder.
Kan Kültürü Sistemleri
Bir hastanın kanındaki mikroorganizmaların hızlı tespiti, teşhis ve prognostik öneme sahiptir. Bu nedenle kan kültürleri, septiseminin etiyolojik ajanlarının tanı ve tedavisinde önemlidir. Septisemi, en ciddi enfeksiyon hastalıklarından birini oluşturduğundan, kan yoluyla bulaşan bakteriyel patojenlerin hızlı tespiti ve tanımlanması, klinik mikrobiyoloji laboratuvarının önemli bir işlevidir.
Sonuç olarak, otomatik kan kültürü sistemleri son 30 yılda geliştirilmiş ve rafine edilmiştir. Kullanılacak ilk yarı otomatik cihaz olan BACTEC 460 (Johnston Laboratories Inc.), 14C dahil edilmiş sıvı bir ortamda büyüyen mikroorganizmalar tarafından metabolize edilen radyoaktif karbondioksiti saptadı. Bu, kısa süre içinde, karbondioksitin kızıl ötesi tespitini kullanan radyometrik olmayan BACTEC 660 / 730’a yol açtı.
Daha sonra, her biri üç temel birimden oluşan bir dizi tam otomatik araç ortaya çıktı; bir inkübatör, bir detektör ve bir bilgisayar. Aşılanmış kan kültürü şişeleri veya flakonları raflara yerleştirilir ve çalkalanabilir veya çalkalanmayabilir.
Her şişe, her 10-15 dakikada bir gelişim açısından sürekli olarak izlenir, bilgisayar verileri önceden belirlenmiş bir algoritma aracılığıyla analiz eder ve bir kültürün ne zaman pozitif olduğunu gösterir. Pozitif bir şişe tespit edildiğinde, mikroorganizmanın izolasyonu ve tanımlanması için sistemden çıkarılabilir. Daha da önemlisi, eski cihazların aksine, mikrobiyal büyüme non-invaziv olarak ölçülür.
Tespit yöntemlerinin çoğu, doğrudan veya dolaylı olarak gazların üretimine (çoğunlukla karbondioksit) veya et suyu kültüründe mikroorganizmaların büyümesini takiben ortaya çıkan pH değişikliklerine dayanır.
Kan kültürü aletlerinin (Becton Dickinson) BACTEC 9000 serisi (9240, 9120, 9050), klinik örneklerde mikroorganizmaların hızlı tespiti için tasarlanmıştır. Test edilecek numune, inkübasyon ve periyodik okuma için cihaza girilen bir flakona inoküle edilir. Her flakonun tabanında, bir matris içine yerleştirilmiş, karbondioksite yanıt veren florokimyasallar içeren pH’a duyarlı bir sensör bulunur.
Kültür ortamında besinleri metabolize eden mikroorganizmalar tarafından üretilen karbondioksit, matriks boyunca yayılır ve florokimyasallar tarafından tespit edilen pH’da bir düşüşe neden olur.
Enstrümanın fotodedektörleri, her 10 dakikada bir sensörden yayılan floresan seviyesini ölçer; bu artış, artan karbondioksit miktarı veya şişede bulunan azalan oksijen miktarı ile orantılıdır. Ölçümler, bilgisayar yazılımı tarafından önceden programlanmış pozitiflik parametrelerine göre yorumlanır.
BacT / Alert 3D sistemi (bioMerieux), kan kültürlerinde mikroorganizmaların gelişimini inkübe eder, karıştırır ve sürekli olarak izler. Her kan kültürü şişesinin tabanına, karbondioksit geçiren ancak serbest hidrojen iyonlarını, besiyerinin bileşenlerini ve tam kanı geçirmeyen bir iyon dışlama membranı ile kaplı bir kolorimetrik sensör yapıştırılmıştır.