Mikroorganizmaların büyümesiyle karbondioksit üretildiğinde, membranda yayılır, pH’ı düşürür ve sensörün renginde yeşilden sarıya bir değişiklik başlatır. Bu renk değişimi, kırmızı ışık yayan bir diyottan gelen ışığın sensörden bir fotodiyot üzerine yansıtılmasıyla tespit edilir.
Üretilen voltaj sinyali, yansıyan ışığın yoğunluğu ve dolayısıyla şişedeki karbondioksit konsantrasyonu ile orantılıdır. Bilgisayar tarafından elde edilen veriler, zamana karşı yansıtma birimlerinin bir büyüme eğrisi olarak çizilir.
Antimikrobiyal Duyarlılık Testi ve Tanımlama Sistemleri
Bakteriyel izolatların tanımlanması ve antimikrobiyal duyarlılık testi, klinik mikrobiyoloji laboratuvarındaki en önemli görevlerden ikisidir. Halihazırda yarı otomatik cihazlardan tam otomatik cihazlara kadar bir dizi sistem mevcuttur ve çoğu, organizmaların tanımlanmasının yanı sıra, geleneksel veya hızlı inkübasyon ve analiz süreleri seçeneğiyle antimikrobiyal duyarlılık testi sunar.
Bazı enstrümanlar, otomatik veya manuel olarak aşılanabilen, harici olarak inkübe edilebilen ve ardından renk reaksiyonlarını ve büyüme son noktalarını yorumlayan bir okuyucuya yerleştirilebilen şeritlere sahiptir. Tam otomatik sistemlerle, mikrodilüsyon tepsileri veya kartları, sürekli olarak büyümeyi veya biyokimyasal reaksiyonları izleyen ve yorumlayan cihaz içinde inkübe edilir.
Her sistem, McFarland birimlerinde ifade edilebilen bakteri yoğunluğunu ölçmek için genellikle bir dansitometre kullanılarak gerçekleştirilen bir inokülum standardizasyon adımı gerektirir. Substratlar veya antibiyotik seyreltileri içeren sıvı ortamda renk değişikliklerinin veya büyümesinin tespiti için çoğu otomatik okuyucu, üç ışık ölçüm yönteminin bir kombinasyonunu kullanır:
(a) spektrumun dört bölgesinde ışık iletimi kolorimetri; (b) bakteri üremesinin miktarı ile ters orantılı olan iletilen ışığın yoğunluğu – türbidimetre; ve (c) bakteri üremesinin miktarı ile doğru orantılı olan 30 ° C’de saçılan ışığın yoğunluğu – nefelometri.
Işık ölçümleri kolayca elektriksel uyarılara dönüştürülür ve ardından ölçülür. Birkaç cihaz, bakteri büyümesini saptamak için florojenik substrat hidrolizini kullanır ve sonuçları 4-5 saat içinde sağlayabilir.
Mik değeri nedir
Antibiyotik duyarlılık testi mikrobiyoloji
Antibiyotik duyarlılık testi duyarlı ne demek
Minimum inhibitör konsantrasyon
Bakteri tanımlaması ve duyarlılık testi nedir
Antibiyotik duyarlılık testleri nelerdir
Disk difüzyon yöntemi Aşamaları
Antibiyotik duyarlılık testi Nedir
Tüm sistemler, okuyucudan alınan sonuçları yorumlayabilen, algoritmadan türetilmiş minimum inhibitör konsantrasyon (MIC) veya kırılma noktası değerleri üreten, organizmaları çeşitli biyo kodlar içeren bir veri tabanından tanımlayabilen ve istatistiksel ve epidemiyolojik analizler yapabilen bir bilgisayar ve yazılım ile donatılmıştır.
Vitek sistemi (bioMerieux), test kuyucuklarında küçük miktarlarda büyüme ortamı ve antibiyotik veya biyokimyasal test ortamı içeren plastik kredi kartı boyutunda reaktif kartları kullanır. Kartlar, 300 bakteri ve maya türünün tanımlanması için ve Duyarlı (S), Orta (I) veya Dirençli (R) veya MİK sonuçları veren bir dizi 17 antibiyotik için mevcuttur.
Her kimlik kartında, reaktiflerin eklenmesini gerektirmeyen bir dizi biyokimyasal test içeren 30 reaksiyon kuyusu vardır. Duyarlılık kartında, her biri çeşitli konsantrasyonlarda bulunan 17 antibiyotik aralığı içeren 45 reaksiyon kuyusu vardır. Direnç mekanizmalarının tespiti için özel testler de bu karta dahil edilmiştir.
Sistem, kartların aşılanması ve hermetik olarak kapatılması için bir doldurma ve mühürleme modülü ve kartların bir karuselde tutulduğu ve biyokimyasal renk değişikliklerinin ve optik yoğunluğun her saat fotometrik olarak ölçüldüğü kombine bir inkübatör ve okuyucu içerir.
Sistem, lineer regresyon analizi gerçekleştirmek ve nihayetinde algoritmadan türetilen MİK’leri belirlemek için antibiyotiklerin varlığında türbidometrik olarak belirlenmiş kinetik büyüme ölçümlerini kullanır.
Sonuçlar genellikle 4-18 saat içinde elde edilir, tek bir mikroorganizmanın tanımlanması ve antimikrobiyal duyarlılığı verilerin bilgisayar analizinden türetilir.
Vitek 2, ilk inokülum seyreltme, yoğunluk doğrulama ve kart doldurma ve mühürleme adımları dahil olmak üzere otomatik ön uç örnek işleme ile Vitek Sisteminin daha otomatik bir versiyonudur. Cihaz, kartları otomatik olarak okuyucu-kuluçka makinesine aktarır ve test tamamlandığında bunları bir atık kutusuna atar.
Sistem, her testi 15 dakikada bir okuyarak kinetik analize izin verir. Optik sistem, floresan, bulanıklık ve kolorimetrik sinyalleri kaydetmek için çok kanallı florimetre ve fotometre okumalarını birleştirir. Vitek 2 sistemi 64 kuyulu bir kart kullanır ve 20’ye kadar antibiyotik testine izin verir.
Phoenix Automated Microbiology System (Becton Dickinson), doldurma için üstte inokülasyon portları olan kapalı, kendinden doldurmalı, kalıplı bir plastik tepsi kullanır ve 136 mikro kuyu içerir. Bu, mikroorganizma tanımlama (ID) veya antimikrobiyal duyarlılık testi (AST) veya her ikisinin bir kombinasyonu için araçla birlikte kullanım içindir.
Bakteriyel tanımlama için Phoenix panelinin ID kısmı, 51 kuyucukta bir dizi geleneksel, kromojenik ve florojenik biyokimyasal testler kullanır. Hem büyümeye dayalı hem de enzimatik substratlar, takson aralığı içindeki farklı reaktivite türlerini kapsamak için kullanılır.
Testler, çeşitli gösterge sistemleri tarafından tespit edilen belirli substratların mikrobiyal kullanımına ve bozunmasına dayanmaktadır. Asit üretimi, bir izolat bir karbonhidrat substratı kullanabildiğinde fenol kırmızısı göstergesindeki bir değişiklikle gösterilir.
Kromojenik substratlar, p-nitrofenil veya p-nitroanilid bileşiklerinin enzimatik hidrolizi üzerine sarı bir renk üretir. Florojenik alt tabakaların enzimatik hidrolizi, bir floresan kumarin türevinin salınmasına neden olur. Spesifik bir karbon kaynağı kullanan mikroorganizmalar reazurin bazlı indikatörü azaltır.
Ek olarak, bir organizmanın bir substratı hidrolize etme, bozunma, azaltma veya başka şekilde kullanma yeteneğini saptayan başka testler de vardır. Phoenix AST yöntemi, bir antibiyotik varlığında organizma büyümesinin saptanması için bir redoks göstergesi kullanan geniş tabanlı bir mikro seyreltme testidir.
Göstergedeki değişikliklerin ve bulanıklığın sürekli ölçümleri, bakteriyel büyümenin belirlenmesinde kullanılır. Her AST paneli konfigürasyonu, geniş bir aralıkta iki kat çiftli seyreltme konsantrasyonlarına sahip birkaç antibiyotik içerir. Mikroorganizma tanımlama ayrıca her bir antibiyotiğin MİK değerlerinin yorumlanmasında da kullanılır.
Sensititre ARIS (AccuMed International Ltd), floroforlar olarak bilinen bileşikler aracılığıyla bakteri büyümesini tespit eder. Florlu bileşikler 4-metilumbelliferon (4MU) ve 7-aminometilkumarin (7 AMC) ile bağlantılı peptidler ve esterler gibi farklı alt tabakalardan oluşurlar.