Blog

Folik Asit Örnekler, pH'da aşamalı bir artışla kolondan ayrıştırıldı ve ardından liyofilize edildi. Bu kromatografik prosedür, kirletici UV emici materyali ortadan kaldırır ve ters fazlı iyon çifti kromatografisi kullanılarak ayrı ayrı folatların daha sonra ayrılmasına ve saptanmasına izin verir. Sonuncusu, bir mobil faz metanol-0.01 M amonyum dihidrojenfosfat / 0.005 Mtetrabutilamonyumfosfat kullanılarak bir pBondapak C ,, kolonu üzerinde gerçekleştirildi. Ayrıştırılan folatlar, 284 nm'de UV absorbansları izlenerek tespit edildi. Serumdaki ve multivitamin preparatlarındaki folatları saptamak için ters fazlı kromatografik sistemler kullanılmıştır. Folik asit türevleri genellikle 280 nm'de UV abzorbansları kullanılarak tespit edilir, ancak amperometrik tespit kullanılarak indirgenmiş folatların tespiti de bildirilmiştir. Askorbik Asit Askorbik asit (C vitamini) oksidasyona dayanıksızdır ve daha sonra biyolojik olarak inaktif türlere parçalanabilen dehidroaskorbik aside kolayca dönüştürülür. Ekstraksiyon ve kromatografi sırasında orta derecede düşük pH ortamını koruyarak oksidasyondan kaçınılabilir; bu, mobil faz koşullarını, modifiye edilmiş silika destekler üzerinde kromatografiye ideal olarak uygun hale getirir ve ters faz ve iyon değişimi dahil olmak üzere çeşitli yöntemler bildirilmiştir. Normal faz HPLC, asetonitril-0,005 M potasyum dihidrojen fosfatın, pH 4,4-4,7 mobil fazı ile kombinasyon halinde bir Lichrosorb NH kolon kullanılarak L-askorbik asidi D-askorbik asitten ayırmak için de kullanılmıştır. Bununla birlikte, ters fazlı iyon çifti kromatografisinin çok yönlülüğü nedeniyle, analizlerin çoğu tek başına bu yöntemle gerçekleştirilebilir. Tipik iyon çifti kromatografik koşullar, etanol veya metanol gibi bir organik modifiye edicinin eklendiği 0.01-0.1 M asetat, pH 4-6 mobil faz kullanır. En popüler sabit fazlar C ve C ,, bağlı silikadır. Hem elektrokimyasal hem de UV saptama (264 nm) yöntemleri kullanılmıştır; bununla birlikte, daha yüksek duyarlılığa sahip alternatif bir sistem, L-askorbatın L-dehidro-askorbik aside bir başlangıç ​​enzimatik dönüşümünü kullanır ve bu daha sonra ters faz kromatografisi ile kromatografik olarak çözülür. Daha sonra, L-dehidroaskorbik asidin kinoksalin türevini oluşturmak için o-fenilendiamin ile reaksiyona sokulduğu bir kolon sonrası türevlendirme sistemi kullanılabilir. Bu türev, flüoresan tespiti ile izlenebilir (365 nm'de eksitasyon ve 418 nm'de emisyon). Bu metodoloji, askorbik asidin kan örneklerinde bulunan seviyelerin altındaki seviyelerde tespitini kolaylaştırır. Askorbik asit kullanımı l-askorbik asit zararları Askorbik asit C vitamini Faydaları Askorbik Asit eczane Fiyatı Askorbik asit kullananlar askorbik asit (c vitamini fiyat) Askorbik asit Saşe Doğal askorbik asit Nikotinik Asit Nikotinik asit ilk olarak 1937'de temel bir besin takviyesi olarak tanımlandı. Aktif bir formda, serbest nikotinik asit, amid türevi veya piridin içeren nükleotidlere (nikotinamid adenin dinükleotid (NAD) ve karşılık gelen fosfat esterine bağlı olarak bulunabilir.  Nikotinik asit ve türevleri ısı, ışık, asit veya alkali ile oksidasyona karşı stabildir ve bu, HPLC ile uyumlu çözücü sistemlerine ekstraksiyonun diğer vitaminlere kıyasla nispeten kolay olduğu anlamına gelir. Biyolojik özütler, aseton ile deproteiniasyon ve ardından seyreltik hidroklorik asit ile özütleme yoluyla kolayca hazırlanır; alternatif olarak hidroklorik asit ile kombinasyon halinde etil asetat, numuneleri ekstrakte etmek için kullanılabilir. Nikotinik asidin ayrılması için en popüler HPLC modu, ters fazlı iyon çifti kromatografisidir. Örneğin, iyon çifti reaktifi olarak su-metanol (9: 1) artı 0,05 M tetrabütilamonyum fosfatın mobil fazı, nikotinamid-N-oksit, 2-hidroksipiridin-5-karboksilikasit, nikotinamid içeren bir pBondapak CI8 sütunu kullanılarak, nikotinik asit ve nikotinürik asit ardışık olarak ayrıştırıldı. Biyolojik numunelerden ekstrakte edilen nikotinik asit türevlerinin izlenmesi sırasında karşılaşılan temel sorun, 254 nm'de UV tespiti kullanılarak elde edilen düşük hassasiyet seviyesidir. Bununla birlikte, her biri farklı dalga boylarını izleyen, nikotinik asit dahil olmak üzere yaklaşık yetmiş metabolik olarak aktif organik asit izleyen bir dizi üç UV detektörü ile birlikte bir ters fazlı HPLC sistemi kullanılarak, tutma süresi ve tepe yükseklik oranları karşılaştırılarak belirlenebilir. Algılamanın hassasiyetini iyileştirmek için kolon öncesi türevlendirmenin birkaç yöntemi araştırılmıştır ve ilk raporlar paminoasetofenon ile birleştirilmiş siyanojen bromür kullanımının hassas bir floresans saptama sistemi (435 nm'de eksitasyon ve 500 nm'de emisyon) sağladığını ileri sürmüştür. Bununla birlikte, yakın tarihli bir rapor, serum örneklerinde 0.2 nmol / ml kadar düşük nikotinik asit konsantrasyonlarının tespit edilebildiği N, N'-disikloheksil-O- (7- metoksikumarin-4-il) metilizoüre ile türetmeyi kullanan basit bir alternatif sunmaktadır. sadece 100 pl. Nikotinik asit türevleri, 5 mM sodyum1-heksansülfonatonat, sabit faz içeren bir asetonitril-su mobil fazı ile ters fazlı bir iyon çifti HPLC sistemi kullanılarak ayrıldı. B12 Vitamini B vitamini tespitlerinin, çeşitli hastalık durumlarının teşhisinde önemi, çok sayıda analogunun biyolojik olarak aktif olduğunun kabul edilmesiyle birlikte, güvenilir kantitatif tahliller geliştirmeye yönelik büyük bir çabayla sonuçlanmıştır. B vitamini ve türevlerinin ekstraksiyonu organik çözücüler kullanılarak gerçekleştirilebilir; örneğin, bir eter-aseton karışımı kullanılabilir. Hem analitik hem de preparatif ayırmalar, pelliküler bir silika destek üzerinde normal faz koşulları kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Şu anda çoğu analiz, ilk kez 1974'te B vitaminine uygulanan ters fazlı HPLC kullanılarak gerçekleştirilmektedir. Daha yakın zamanlarda, kobalamin koenzimlerinin çözünürlüğü ve kantitasyonu, 50 mM sodyum fosfat-metanolden oluşan bir mobil faz ile kombinasyon halinde bir C, sabit faz kullanılarak bildirilmiştir. Mikroorganizmalardaki B vitamini analoglarının metabolizmasına olan yoğun ilgi, çoğu ters fazlı HPLC'ye dayanmasına rağmen, alternatif HPLC sistemlerinin geliştirilmesine yol açmıştır. Lactobacillus Ieichmannii'den kobalamin koenzim ve komnoidlerin analizinde, hücreler% 80 etanol içinde 70oC'ye ısıtılarak ekstraktlar hazırlandı. Durultmadan sonra ekstraktlar buharlaştırılarak kurutuldu ve su içinde yeniden çözüldü. Basit bir izokratik asetonitril-1 mM amonyum asetat sistemi, pH 4,4 (3: 7) bir C veya C,  sabit faz ile doğal olarak oluşan ana kobalaminleri (sülfitokobalamin, siyanokobalamin, metil-kobalamin ve akuakobalamin) ayırmak için yeterliydi.  Bununla birlikte, bir mobil faz gradyan sistemi (tampon A, 0.05 M fosforik asit, pH 3.0; tampon B, asetonitril) onaC veya C sabit fazgave, diğer beş aminoalkilkobalamin homologu ile birlikte çözünürlüğü geliştirdi. Murin lösemik hücrelerinden alınan kamalaminler de bu çalışmada analiz edildi.