Hangi anti-DNA testi seçilmeli?
İdeal tahlil, hastalık aktivitesini güvenilir bir şekilde yansıtmanın yanı sıra, lupus tanısı için yeterince duyarlı ve spesifik olmalıdır. Açıklanan üç testin tümü, aktif hastalığı olan hastalarda >%90 duyarlılıkla birinci kriteri karşılar. Özgüllük açısından, Crithidia ve Farr testleri (özgüllük >%90) ELISA'dan üstündür.
ELISA tahlillerinin, düşük aviditeli antikorları saptama eğilimleri nedeniyle, lupusu olmayan hastaların önemli bir azınlığında yanlış pozitif DNA antikoru sonuçları ürettiği bilinmektedir. Bu dezavantaja rağmen, ELISA tahlilleri, yüksek hassasiyetleri, otomasyon kolaylığı, sonuçları güvenilir bir şekilde nicelleştirme yetenekleri (seri izleme için faydalıdır) ve tahlilde radyoizotop eksikliği nedeniyle klinik uygulamada giderek daha fazla kullanılmaktadır.
Farr testi, hastalık izleme için eşit derecede uygundur ve özellikle böbrekleri içeren hastalık alevlenmelerinin gelişimini öngörmede gerçekten ELISA'dan üstün olabilir.
Yakın zamanda yapılan bir randomize Hollanda çalışmasında, immünosupresif tedavide önleyici artışlar alan anti-dsDNA seviyelerinde %25 artış olan hastalarda, konvansiyonel olarak tedavi edilen kontrol grubuna kıyasla nükslerde önemli bir azalma olmuştur (Bootsma ve ark.).
Lupus hastalarının küçük bir kısmı, DNA antikorlarında eşlik eden bir artış olmaksızın nüks edebilir; benzer şekilde, her üç testte de sürekli olarak yüksek antikor seviyeleri bulunmasına rağmen hastaların az bir kısmı klinik olarak stabil veya asemptomatik olabilir.
Lupus ve Antifosfolipid Sendromu
Fosfolipidlere (APA) karşı antikorlar, tromboz belirteçleri olarak işlev görür ve lupuslu hastaların üçte birinde görülür. 'Antifosfolipid sendromu' (APS) terimi, trombozu ve yüksek fosfolipid antikor seviyeleri olan hastaları tanımlamak için kullanılmıştır. Ağırlıklı olarak venöz trombozla sonuçlanan diğer trombofilik durumların aksine, APS'li hastalarda hem arteriyel hem de venöz damarlarda tromboz gelişebilir.
Klinik belirtiler, hangi organın iskemiye dönüştüğüne bağlıdır. APA, ELISA ile veya fosfo-lipid bağımlı pıhtılaşma tahlillerinin (aktive kısmi tromboplastin zamanı-APTT) uzatılmasıyla saptanabilir.
Asidik bir fosfolipid olan kardiyolipin kullanılarak antijen olarak ELISA ile saptanan APA, enfeksiyon (bakteriyel, viral, protozoal), ilaç tedavisi ve diğer bağ dokusu hastalıkları olan hastalarda birçok yanlış pozitif tanımlandığından, her zaman gerçek bir tromboz belirteci olarak hareket etmeyebilir. Aslında, geçmişteki yanlış pozitif VDRL, VDRL'de bulunan kardiyolipin'e yönelik APA'nın varlığından kaynaklanmaktadır.
Mevcut ELISA testlerinin trombozla ilişkili ve trombozla ilişkili olmayan APA arasında ayrım yapamaması, yüksek APA düzeylerinin klinik önemini yorumlamada zorluklara yol açmıştır.
Antifosfolipid sendromu belirtileri
antifosfolipid sendromu - ekşi
Antifosfolipid sendromu bitkisel tedavisi
Antifosfolipid sendromu gebelik
Sekonder antifosfolipid sendromu
Antifosfolipid sendromu Kadınlar Kulübü
Antifosfolipid sendromu laboratuvar
Antifosfolipid sendromu tanı kriterleri
Bu ayrım önemlidir, çünkü trombozla ilişkili APA'lı hastalar, muhtemelen ömür boyu yoğun, uzun süreli antikoagülan tedaviye ihtiyaç duyarlar. Son kanıtlar, trombozla ilişkili APA'nın, kendi başına fosfolipidlerden ziyade büyük ölçüde 2 glikoprotein I'e (2GPI, fosfolipitleri bağlayan bir serum protein ko-faktörü) yönelik olduğunu göstermektedir.
Mevcut tahlillerde iki 2GPI kaynağı bulunur: ELISA plakalarını bloke etmek için kullanılan insan serumu test numuneleri ve sığır serumu. 2GPI ile immobilize kardiyolipinin etkileşiminin, konformasyonunu değiştirerek immünojenik hale getirdiği düşünülmektedir.
Konvansiyonel ELISA tahlillerinin trombozla ilişkili ve trombozla ilişkili olmayan APA arasında ayrım yapamaması nedeniyle, antijen olarak saflaştırılmış 2GPI kullanan tahlillere büyük ilgi vardır. Varlıkları şu anda antifosfolipid sendromu için tanı kriterlerine dahil edilmemesine rağmen, anti-2GPI antikorları, ELISA ile saptanan geleneksel kardiyolipin antikorlarından daha güçlü tromboz öngörücüleridir.
Fosfolipid bağımlı pıhtılaşma deneylerine müdahale eden APA, bir fosfolipid-protrombin kompleksini tanır ve lupus hastalarında ortaya çıktıklarından dolayı lupus antikoagülanları (LAC) olarak adlandırılır. LAC terimi, kanamadan ziyade in vivo tromboz ile ilişkili olduğu için yanlış bir isimdir.
Normal plazmanın eklenmesiyle düzelmeyen uzamış bir APTT'den LAC'nin varlığından şüphelenilir, bu da bir inhibitörün varlığını düşündürür. LAC antikorlarının gösterilmesi, pıhtılaşmanın işlevsel düzensizliğini gösterdiğinden, bu antikorlar, ELISA tarafından gösterilen APA'ya göre tromboz ile daha yakından ilişkilidir.
Lupuslu hastaların çoğunda kardiyolipin antikorlarının yanı sıra LAC (%70) olacaktır, ancak hastaların az bir kısmında kardiyolipin antikorları veya LAC (her kategoride %15) olacaktır.
Nöropsikiyatrik sistemik lupus eritematozus (NPSLE)
Laboratuvar araştırmasının rolü
SLE'de nörolojik tutulum, hastalıklarının bir noktasında hastaların üçte ikisini etkileyen önemli bir sorundur. Bu tür hastaların yaklaşık %20'si bunu aktif sistemik hastalık zemininde yaparken, vakaların çoğunda sistemik hastalık sessizdir veya sadece hafif derecede aktiftir.
SLE ve nörolojik özellikleri olan bir hastayla karşı karşıya kalan hekim, doğrudan lupus (birincil) nedeniyle nörolojik hastalık, ikincil neden olarak fırsatçı enfeksiyon ve steroid psikozu arasında önemli bir ayrım yapmalıdır, çünkü çoğu hasta o sırada immünosupresif tedavide olacaktır. sunumun.
Altta yatan çok sayıda patojenik mekanizmayı yansıtan çok çeşitli klinik sunumlar görülmektedir. Çeşitli klinik sunumları açıklamak için en az üç hipotez öne sürülmüştür: anti-nöronal antikorlar, fosfolipid antikorlarla ilişkili tromboz ve sitokin kaynaklı hastalıktır.
Ne yazık ki, şu anda mevcut olan SLE laboratuvar belirteçlerinin hiçbiri birincil nörolojik lupus tanısı için yeterince spesifik değildir. Birkaç çalışma, serum veya beyin omurilik sıvısındaki (BOS) anti-DNA ve kompleman (C3, C4) düzeylerindeki anormalliklerin, SLE'de nörolojik ve nörolojik olmayan hastalık arasında ayrım yapmadığını göstermiştir.
Nöronlara (beyin dokusu ile çapraz reaksiyona giren lenfositotoksik antikorlar ve doğrudan nöronal antijenlere karşı hedeflenen antikorlar) karşı yönlendirilen antikorlar için başlangıçtaki istek, nörolojik tutulum olmayan lupus hastalarında varlıklarını gösteren çalışmalarla, nörolojik lupus için spesifik belirteçler olarak azaltılmıştır.
Aynı şekilde, ribozomal P proteinlerine karşı yönlendirilen antikorların, lupus psikozunun spesifik belirteçleri olduğu yönündeki son iddialar, psikozu olmayan SLE hastalarının %50'ye varan kısmında gösterilerek çürütülmüştür.
NPSLE gibi görünen enfeksiyon vakalarının teşhis edilebilmesi için tüm nöropsikiyatrik SLE hastalarında BOS muayenesi zorunludur. SLE'de nörolojik tutulumla ilgili yakın tarihli bir prospektif çalışmada, vakaların yaklaşık %50'sinde altta yatan neden enfeksiyon (kriptokok, tüberküloz ve piyojenik menenjit) olmuştur.
Yalnızca BOS'ta oligoklonal bantların varlığı birincil NPSLE'yi destekler ancak enfeksiyonla da ortaya çıkabilir. Spesifik bir laboratuvar belirtecinin yokluğunda, NPSLE tanısı büyük ölçüde geleneksel klinik sezgiye bağlı kalır.
Asit alkole dirençli basil
Bu organizmalar genellikle Ziehl – Neelsen (ZN) yöntemi kullanılarak gösterilir. Temel fuksin ve fenol karıştırılarak “güçlü karbol fuksin” elde edilir. Boyamanın ardından (ısı kullanılarak veya kullanılmadan) bölüm, bölümün rengi giderilene kadar bir asit alkol çözeltisi ile ayrıştırılır. Bir zıt boya (mavi veya yeşil) diğer organizmaları ve genel yapıyı gösterecektir.
Bir floresan yöntemi (oramin-rodanin) da kullanılabilir. Floresan mikroskop altında bakıldığında, organizma sarı / yeşili flüoresans gösterir. İzole edilen organizmalar daha kolay tanımlandığından, bu yöntem standart ZN’den daha hassastır. Organizmaların yeri belirlendikten sonra genellikle yöntemi standart bir ZN ile takip etmek gerekir.
Viral kapanımlar
Yöntemlerin çoğu diğer yapıları boyayacağından, viral kapanımlar için spesifik boyama yöntemleri yoktur. Floksin tartrazin, viral inklüzyon cisimciklerini göstermek için kullanılmıştır ve orcein, hepatit B’nin gösterilmesi için düzenli olarak kullanılmaktadır. Viral inklüzyonların gösterilmesi, büyük ölçüde immünositokimyasal yöntemlerle değiştirilmiştir.
Mantarlar
Mantarlar H & E ile boyanmış bölümlerde oldukça belirgin olabilir ancak PAS, Grocott’un metenamin gümüşü, Southgate’in mukikarmini (Cryptococcus için), Gram boyası, Ziehl-Neelsen ve Giemsa ile daha seçici olarak boyanabilir.
Spiroketler
Spiroketler muhtemelen doku bölümlerinde gösterilmesi en zor organizmalardır. Klasik Levaditi yöntemi, gümüş emdirilmiş doku blokları üzerinde uygulandı. Sonraki gömme ve kesit alma spiroketlerin siyah olduğunu ortaya çıkardı.
Doku kesitlerinde spiroketleri göstermek için açıklanan bir dizi gümüş yöntem vardır. Bu yöntemlerin tümü, başarılı bir şekilde gerçekleştirmek için önemli derecede beceri gerektirir. Bu yöntemlerden bazıları, Helicobacter’i göstermek için uyarlanmıştır.
Hücre FİZYOLOJİSİ Nedir
Hücreyi oluşturan maddeler
Hücre zarının görevleri
Hücre zarındaki porlardan geçebilen maddeler
Hücre dışı matris Nedir
Hücre dışı matriks görevleri
Büyük moleküllerin hücre dışına atılmasına ne denir
Hücre zarı Özellikleri
Hücre Dışı Maddeler (fibrin ve amiloid)
Fibrin
Fibrin eozinle kuvvetli boyanır ve orta derecede PAS pozitiftir. Fibrin iplikleri, fosfotungstik asit hematoksilin ile güçlü bir şekilde boyanır. “Fibrinoid”, fibrine benzer boyama reaksiyonları verdiği bulunan hiyalin maddesine uygulanan bir terimdir.
Lendrum’un martius kızıl mavisi yöntemi kırmızı kan hücrelerini sarı, daha genç fibrin ve fibrinoidi kırmızı, kolajen ve eski fibrini mavi olarak gösterir. Yöntem ustaca bir farklılaşma gerektirir. Orijinal yöntem cıva bazlı fiksasyonu tavsiye etti; ancak cıva içermeyen formaldehit solüsyonları ile kabul edilebilir sonuçlar elde edilebilir.
Amiloid
Amiloid, H&E kesitlerinde pembeye boyar, orta derecede PAS pozitiftir ve van Gieson boyamasında sarıdan kahverengiye boyar. Amiloid, en rutin olarak Kongo kırmızısı kullanılarak gösterilir. Amiloid pembesini kırmızıya boyayan birkaç formülasyon vardır. Polarize ışık altında, Kongo’da kırmızı lekeli amiloid dikroiktir ve sarıdan yeşile çift kırılma üretir.
Metil menekşe veya toluidin mavisi, metalik olarak amiloid boyası (morumsu kırmızı ila menekşe). Thioflavine T, parlak sarı floresan sergileyen floresan bir boyadır. Bu yöntem spesifik değildir ancak oldukça hassastır.
Lipidler
Lipidler hem normal hem de patolojik dokularda bulunabilir. Basit lipitler normalde parafin mumu işlemi sırasında kaybolur ve varlıklarını göstermek için donmuş bölümler gerekir. Basit lipidler, yağda çözünür boyalar (örneğin, Sudan boyaları) kullanılarak gösterilmiştir.
Boyamanın prensibi, boyanın içinde bulunduğu çözücüye göre yağda daha fazla çözünür olmasına dayanır (elektif çözünürlük).
Diğer ürünlerin (örneğin fosfolipidlerin) bulunduğu bileşik lipidler, işlemeye direnebilir ve parafin bölümlerinde bir dizi yöntemle gösterilebilir. Miyelin (fosfolipid), Luxol fast blue veya hematoksilen bazlı boyalarla gösterilebilir.
Sitoplazmik Granüller
Mast hücre granülleri
Mast hücresi granülleri metakromatiktir ve toluidin mavisi, tiyonin veya gök mavisi A kullanılarak gösterilebilir. Granüller, çekirdekli mordan kırmızıya metakromaziye ve maviye boyanmış diğer yapılara sahiptir. Diğer bağ dokuları ve bazı epitelyal müsinler de gösterilebilir. Alkiyen mavisi, granülleri göstermek için de kullanılabilir. Kloroasetat esteraz, Bancroft tarafından tercih edilen yöntem olarak önerilmektedir.
Paneth hücre granülleri
Paneth hücre granülleri asidofiliktir ve iyi farklılaştırılmış H & E ile boyanmış bölümlerde kolayca görülebilir. Lendrum’un floksin tartrazin yöntemi, granülleri sarı bir arka plana karşı kırmızıya boyar.
Pankreas hücre granülleri
Pankreasın adacık hücrelerinin renklendirilmiş boyaması, büyük ölçüde daha spesifik immünositokimyasal yöntemlerle değiştirilmiştir. Bazı geleneksel yöntemler, B hücreleri için krom alum hematoksilin ve aldehit fuksin, A hücreleri için Grimelius ve D hücreleri için Hellerstro ̈m ve Hellman yöntemini içerir.
Hipofiz hücre granülleri
İmmünositokimyasal yöntemler, yine büyük ölçüde geleneksel boyama yöntemlerinin yerini almıştır. PAS – turuncu G, en iyi dikromat bazlı fiksatifler (Helly’s sıvısı) üzerinde uygulanan popüler bir yöntemdi. PAS, hipofiz bazofillerini macentaya, turuncu G asidofilleri turuncuya boyayacak ve kromofoblar boyanmamıştı. Hücre tiplerini göstermek için trikromlar da kullanılmıştır.
Eozinofiller
Eozinofiller asidofildir ve iyi farklılaşmış H & E’de açıkça gösterilmiştir. Chromotrope ve Romanowsky boyaları da kullanılmıştır.
Nörolojik dokular
Rutin tanısal histopatolojide, nörolojik elementlerin geleneksel boyama yöntemleriyle gösterilmesi büyük ölçüde sinir hücreleri, süreçleri ve miyelin ile sınırlıdır. İmmünositokimyasal yöntemler, daha kaprisli gümüş emdirme tekniklerinin bazılarının yerini büyük ölçüde almıştır.
Sonuçlar
Geleneksel boyama yöntemleri, doku patolojisinin teşhisinde hala önemli bir role sahiptir. Tanı laboratuarları artık histopatologların bilgilendirilmiş bir tanı görüşüne ulaşması için gerekli bilgileri sağlamak üzere renklendirmeli boyama ve immünositokimyasal boyamanın bir kombinasyonunu kullanmaktadır. H&E ile boyanan dokunun morfolojik görünümü, sonraki araştırmalar için öncü sağladı.
İmmünositokimya, bir dizi tarihsel boyama yönteminin yerini almış olsa da, yalnızca boyalarla geleneksel boyamaya dayanan çok sayıda araştırma vardır.
Enzim Histokimyası
Enzimler, çoğu biyolojik reaksiyon için katalizör görevi gören ve insanda homeostazı korurken hücresel metabolizmada hayati öneme sahip olan büyük üçüncül proteinlerdir. Her biri belirli moleküller (alt tabakalar) üzerinde etki ederek belirli bir reaksiyonu katalize eden 700’den fazla bilinen enzim vardır. Ortaya çıkan reaksiyon ürünü, Krebs döngüsünde gösterildiği gibi farklı bir enzim için yeni bir substrat görevi görebilir. Her metabolik reaksiyondan sonra, her durumda enzim, diğer etkileşimler için değiştirilmeden bırakılır.