G6PD Eksikliği (Glukoz 6-fosfat dehidrojenaz)
Kırmızı hücre, glikoz metabolizmasının pentoz fosfat şant yolundaki ilk enzimin eksikliğinden dolayı azaltılmış bir indirgeyici enerjiye sahiptir. Genellikle cinsiyete bağlı çekinik bir durumdur: hastalık erkeklerde X kromozomunda bir etkilenmiş genle ifade edilir, ancak dişilerin etkilenmiş iki gene ihtiyacı vardır.
Bir tanesi etkilenen dişiler, Lyon hipotezine göre, hangi hücrelerde hangi X kromozomunun inaktive edildiğine bağlı olarak değişken ekspresyon gösterecektir. Çoğunlukla siyahi ve Akdenizli popülasyonlarda görülür ve dünya nüfusunun %3'ünü etkiler. G6PD aktivitesi retikülositlerde mevcuttur ancak bu bireylerde hızlı ve erken düşer.
Bu nedenle oksidan kimyasallara ve ilaçlara (örn. sülfonamid antibiyotikler) maruz kalındığında kırmızı hücre bütünlüğü azalır. Heinz cisimleri özel olarak hazırlanmış kan filmlerinde görülür. Teşhis, G6PD testiyle yapılır, ancak yalnızca kararlı durumda (hemolitik krizlerden sonra olduğu gibi aşırı sayıda retikülosit olduğunda değil). Bazı bölümlere yiyecekler (klasik olarak bakla - 'favizm') ve ilaçlar neden olur.
6GPD eksikliği için tarama
Pentoz fosfat yolu içinde NADP, G6PD tarafından NADPH'ye indirgenir. Bu ürün ultraviyole ışık altında floresan verir. Bu, floresan nokta testinin temelini oluşturur.
Tam kan aşağıdakilerle karıştırılır:
Glikoz 6-fosfat.
NADP.
Parçalayıcı ajan (genellikle saponin)
Tampon
Daha sonra filtre kağıdına lekelenmeden önce 5-10 dakika inkübe edilir, kurutulur ve uzun dalga UV ışığı altında incelenir. Normal numuneler parlak bir şekilde flüoresans yapacak, eksik numuneler flüoresan etmeyecek veya sadece zayıf olacaktır. Herhangi bir anormal tarama testi, bir G6PD testi ile onaylanmalıdır; burada G6PD tarafından NADPH üretimi, optik yoğunlukta zaman içinde bir değişiklik ile spektrometrik olarak ölçülür.
Enzim eksikliği olanlar ne yememeli
G6PD eksikliği diyet
G6PD eksikliği askerlik
G6PD eksikliği anestezi
glukoz 6-fosfat dehidrogenaz nedir
Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
bebeklerde glukoz-6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
Enzim eksikliği öldürürmü
Piruvat kinaz eksikliği
Piruvat kinaz eksikliği "otozomal resesif" bir durumdur (her iki genin anormal olması, bir kişinin durumu kalıtım yoluyla alması) ve başka bir enzim sorunudur - daha nadir görülen G6PD dışı hastalıkların en yaygınıdır. Hücreler deforme olur ve savunmasız hale gelir. Kan filmi poikilositleri (anormal şekilli kırmızı hücreler) gösterir ve bunlar bir ilaç uyarısı olmadan kendiliğinden hemolizlenir. Transfüzyon gerekebilir.
Piruvat kinaz eksikliği taraması
Piruvat kinaz, reaksiyonun katalizörüdür: ADP + fosfoenolpiruvat ! ATP + piruvat
Bu reaksiyonun ürünü olan piruvat daha sonra laktat dehidrojenaz (LDH) tarafından katalize edilen aşağıdaki reaksiyona ilerler:
Piruvat ş NADH ! laktat + NAD
NADH, uzun dalga UV ışığı altında floresan verirken NAD olmaz. Bu nedenle, tam kan ADP, fosfoenolpiruvat ve NADH ile inkübe edildiğinde, normal numunelerde NADH, sonuçta bir floresan kaybıyla NAD'ye oksitlenir. Eksik numuneler parlak bir şekilde floresan verecektir.
Anormal bir PK tarama testi, NADH'nin NAD'ye oksidasyonunun zaman içinde fotometrik olarak absorbanstaki bir değişiklikle ölçüldüğü, enzimin tam bir tahlili ile teyit edilmelidir.
Bağışıklık Hemolizleri
Çeşitli koşullar (Tablo 34.4'te listelenenler gibi), daha kısa bir ömre sahip olan antikor kaplı kırmızı hücrelerle sonuçlanır. İmmün hemoliz, laboratuvardaki termal aktivite (ve aglütinasyon) aralığına bağlı olarak laboratuvarda 'sıcak' ve 'soğuk' tiplere ayrılır, klasik olarak ılıkta 37 C ve soğukta 4 C, ancak bazen küçük örtüşmedir.
Pozitif olacak (DCT, Şekil 34.4) geniş bir tarama doğrudan Coombs (anti-globulin) testinin yanı sıra, sıcak immün hemolizde daha spesifik bir profil (IgG, kompleman) veren reaktifler kullanılabilir. Soğuk immün hemoliz şüphesinde, kan örneğini serum ayrılana kadar sıcak tutmak, ardından yetişkin (antijen içeren) ve göbek bağı (antijen taşıyan) hücrelere karşı test etmek olağandır.
DCT genellikle sadece kompleman reaktifi ile pozitiftir ve kan filmi, ısıtılmadıkça aglütinasyon gösterir. Sıcak ve soğuk koşullar arasındaki ayrım tedavi için önemlidir. Sıcak immün hemolizlerde, antikor üretiminin etkisini durdurmayı veya buna müdahale etmeyi amaçlayan steroidler ve diğer immünosupresif tedaviler genellikle yararlıdır.
Splenektomi sıklıkla işe yarar. Bununla birlikte, soğuk immün hemolizlerde sitotoksik kemoterapi (bazen) ve hastayı sıcak tutmak (neredeyse her zaman) yardımcı olur, ancak steroidler veya splenektomi değil. Otoaglütinasyon çapraz eşleşmeyi engellediğinden, immün hemolizde genellikle transfüzyondan kaçınılır.
Hastanın klinik durumu zaman zaman transfüzyon gerektirir ve kesinlikle kırmızı hücre eksikliği nedeniyle yenik düşmesine izin verilmemelidir, bu durumda 'en az uyumsuz' kan verilir.
Yenidoğanın hemolitik hastalığı (HDN)
Rh+ fetüsündeki Rh-pozitif hücreler, Rh annenin dolaşımına geçer, örn. hamilelik sırasında kanama veya düşük yapma tehdidi. Bu, annenin anti-D (anti-rhesus) antikorları üretmesine neden olur ve bu antikorlar daha sonra aynı veya sonraki gebeliklerde fetüse geçer ve kırmızı hücreleri kaplar ve bebek Rh+ ise hemolize neden olur.
ABO grubu uyumsuzlukları benzer sorunlara neden olabilir, ancak daha az önemdedir. Doğumdan sonra yüksek konjuge olmayan bilirubin seviyeleri (hemolize bağlı olarak) kan-beyin bariyerini geçecek ve beyin hasarıyla birlikte 'kernikterus'a neden olacaktır. Değişim transfüzyonunu içerebilen tedavi bunu önleyecektir.
Kan filminde sferositler görülebilir ve DCT pozitif olacaktır. Ağır vakalarda bebek hidropik olacaktır (anemi/sarılık/ödemle şişmiş). Potansiyel feto-maternal kanama zamanlarında, annenin antikor üretimi, Rh+ hücrelerini temizlemek için intramüsküler enjeksiyon yoluyla anti-D'nin pasif olarak uygulanmasıyla engellenebilir, bu da annenin kendi yanıtını üretmesini engelleyecektir.
Anti-D'nin bu şekilde profilaktik kullanımı, modern bilimsel tıbbın başarı öykülerinden biridir, bu nedenle etkilenen bebekler artık nadirdir. Bunlar intrauterin transfüzyon (zor bir manevra!) veya yenidoğanın değişim transfüzyonu ile erken doğum indüksiyonu ile tedavi edilebilirler.
Uyumsuz Transfüzyon
Uyumsuz transfüzyon, immün aracılı bir hemoliz oluşturur. ABO uyumsuzluğunda (çok nadir görülen bir durumdur, ümit edilir) hastanın doğal olarak oluşan anti-A veya anti-B antikorları (veya her ikisi) nedeniyle donör hücreler intravasküler olarak yok edilir.
Hasta daha önce tarif edildiği gibi çok hızlı bir şekilde hastalanabilir ve hemoglobinüri geliştirecektir. Transfüzyon durdurulmazsa veya hasta anestezi altındaysa, durum ölümcül olabilir.
Diğer antijenlere bağlı uyumsuzluk reaksiyonları genellikle anemi ve sarılık ile ekstravasküler hemolize neden olur. İyileşme olağandır ancak alyuvar antijenlerine karşı allo-antikorlar nedeniyle bundan sonra çapraz eşleşme sorunları olacaktır.
Homojenlik
Üç sorunun hiçbiri doğrudan ve açıkça GLP İlkeleri tarafından düzenlenmemiştir. Çalışma fiilen başlamadan önce test öğesinin kendisiyle ilgili genel verilerin bilinmesi (veya en azından tahmin edilmesi) gerekmekle birlikte (son kullanma tarihi olan etiketleme gerekliliğine bakınız), bu soru, uygulama aracındaki test öğesinin ilgili özellikleridir.
Bu nedenle, uygulama aracındaki test öğesinin stabilitesi, homojenliği ve konsantrasyonu hakkındaki analitik veriler, test tesisi tarafından veya çalışmanın sponsoru tarafından oluşturulabilir. Veriler, çalışma fiilen başlamadan önce, çalışmanın yürütülmesi sırasında veya hatta çalışmanın sona ermesinden sonra üretilebilir ve son olarak, ancak en önemlisi, veriler GLP koşullarında değil, GMP veya GMP altında çalışan bir laboratuvar tarafından oluşturulmuş olabilir.
Çalışma planında ve nihai çalışma raporunda yeterince tanımlanmaları ve uygun şekilde belgelendirilmeleri koşuluyla, bu vakaların tümü GLP İlkeleri ile uyumlu olabilir, ancak bazı ulusal düzenlemeler bu açıdan daha katı olabilir. Bu tür sorunların nasıl ele alınabileceğinin bir örneği olarak, Şekil 28, bu noktayı kısa ve öz bir şekilde ve tamamen GLP uyumlu bir şekilde ele alan bir Çalışma Direktörünün uyum beyanını göstermektedir.
Elbette en az sorunla, test öğesinin özellikleri test tesisi ve Çalışma Direktörü tarafından çalışma başlamadan önce bilindiğinde karşılaşılır. Durum, bu veriler Çalışma Direktörü tarafından hemen elde edilemediğinde biraz daha sorunlu hale gelir (muhtemelen herhangi bir yerde, örneğin sponsorun yerinde mevcut olmasına rağmen).
İlk durumda, test öğesi tamamen karakterize edilir ve GLP İlkelerinin tüm gerekliliklerine uygundur. Çalışma Direktörünün GLP uygunluk beyanı, test öğesi kimliği, kararlılığı, homojenliği ve konsantrasyonu ile ilgili olarak, bu çalışmanın GLP uyumlu yürütülmesini güvenle sağlayabilir.
Bu bakımdan, bu özelliklerin nerede belirlendiği önemli değildir: Bu, doğrudan Çalışma Direktörünün test tesisinde ve Çalışma Direktörünün doğrudan sorumluluğu altında yapılabilir veya bu bilgi, sponsordur.
Bu ikinci durumda, veriler destekleyicinin gizli mülkü olarak kabul edilebilir ve Çalışma Direktörüne tam olarak ifşa edilmemiş olabilir (aşağıya bakınız). Çalışma Direktörü bu verilerin varlığından (ve doğasından) haberdar olduğu sürece, Çalışma Direktörü tarafından uygun şekilde ifade edilmiş bir uygunluk beyanı düzenlenebilir ve imzalanabilir.
Bununla birlikte, karakterizasyon sorunları çok tartışmalı hale gelebilir, özellikle de sözleşmeli çalışmanın sponsorunun, sözleşmeli çalışmanın sponsorunun, bir test tesisi olarak bir Sözleşmeli Araştırma Kuruluşu (CRO) tarafından test edilmesiyle ilgili “SPO-00115-xyz” veya bu tür başka bir kodla etiketlenmiş bir tür kaptır.
Homojenlik nedir
Homojen ne demek
Homojen karışımlar
Heterojen
Heterojen ne demek
Heterojen örnek
Karışımlar homojen mıdır
Kültürel homojenlik Nedir
Destekleyici, muhtemelen bu test öğesinin tam kimliğini açıklamak ya da GLP İlkeleri tarafından talep edildiği üzere “homojenlik, konsantrasyon ve kararlılığı” tespit etmek için kullanılacak analitik yöntemi sağlamak istemeyebilir. Dolayısıyla, CRO bu özellikleri GLP uyumlu bir şekilde teyit edemeyecektir; daha da sorunlu olan, CRO, böyle bir durumda, test tesisinde alınan kodlanmış öğenin gerçekten de test edilmesi amaçlanan öğeye karşılık gelip gelmediğini belirleyemez.
Belirli bir çalışmada kullanılan kodlanmış bir maddenin kimliğini belirlemenin bir yolu yoksa, bu çalışmayı, olumsuz bir sonucun kaydedildiği başka bir test öğesinin çalışmasının yerine koymak mümkün olabilirdi.
GLP İlkeleri bu sorunu fark etmiş ve bu nedenle, “çalışmaya konu olan test öğesinin kimliğini doğrulamak için sponsor ve test tesisi arasında işbirliği içinde geliştirilen bir mekanizma” kurumu çağrısında bulunmaktadır. Bu genel gerekliliğin çözümü için birkaç yöntem düşünülebilir.
Bu mekanizma, test edilmesi gereken test öğesiyle birlikte alınan öğenin kimliğini “kanıtlamak” için kullanılabilecek, kolayca belirlenebilen bazı fiziksel / kimyasal parametrelerin beyanını gerektirebilir; veya test tesisi sponsora analiz için bir dizi kodlanmış numuneyi geri gönderebilir ve bunlardan biri söz konusu test öğesinin bir örneği olabilir.
Bununla birlikte, genel olarak önemli olan şey, bu doğrulama mekanizmasında, test maddesinin, sponsorun tesislerinde sentezinden ve paketlemesinden, teslim alınmasına, dağıtımına ve yeniden kurulana kadar CRO tesislerinde test edilmesine kadar belgelenmiş bir iz bırakması gerektiğidir. Sponsorun analitik laboratuvarlarında analizdir (kimlik, homojenlik ve konsantrasyon için).
Bu test öğesi kimliği sorunu böylelikle böyle bir mekanizmanın getirilmesiyle tatmin edici bir şekilde çözülebilirken, çalışmanın sadece GLP olması için test öğesinin zorunlu olarak bilinmesi gereken diğer özellikleri vardır. uyumludur, ancak aslında bilimsel olarak anlamlı sonuçlar verecek şekilde yapılmalıdır. GLP İlkeleri, “saklama ve test koşulları altında test ve referans öğelerinin stabilitesinin tüm çalışmalar için bilinmesini gerektirir. Test öğesi bir araca uygulanıyorsa veya uygulanıyorsa, o araçtaki test öğesinin homojenliği, konsantrasyonu ve stabilitesi belirlenmelidir. “
Bu gerekliliklerde dikkate alınması gereken iki husus vardır: saklama koşulları altında stabilite ve gerçek test koşulları altında stabilite, her ikisi de çalışılan öğenin test edilmesi gereken öğeye karşılık gelmesini sağlamaya hizmet eder.
Test maddesinin saklama koşulları altında stabilitesi, destekleyicinin tam saklama koşullarını belirleyerek ve etiket üzerinde veya test maddesi veri sayfasında bir son kullanma tarihi vererek yeterince açık bir şekilde ele alabileceği bir konudur; belirli analitik verilerin ifşa edilmesi mutlak bir gereklilik olmayacaktır.
Son kullanma tarihi ile gözlemlenecek saklama koşulları kombinasyonu, çalışmada kullanılan test öğesinin orijinal olarak alınan test öğesiyle aynı olmasını ve yine de yeterli içeriğe sahip olmasını sağlayacaktır (veya en azından makul hale getirecektir).
Tabii ki, “test sahasındaki saklama koşulları altında test, kontrol ve referans maddelerin stabilitesinin bilinmesi” de sağlanmalıdır, çünkü test sahalarındaki koşullar bir test tesisinde mevcut olanlardan farklı olabilir.
Bu tür durumlarda ilgili testler, test sahasındaki gerçek saklama koşulları (yani nem, sıcaklık, vb.) Altında stabiliteyi göstermelidir. Test öğesinin stabilitesi çalışmadan önce belirlendiğinde, ayrıca stabilite testinde kullanılan koşulların test sahasındaki gerçek depolama koşullarına uygulandığını veya tahmin edilebileceğini doğrulamak gerekir. Durum böyle değilse veya stabilite verileri başka şekilde yetersizse, ilgili saha çalışmasından önce veya bununla birlikte uygun araştırmalarla test öğesi stabilitesini yeniden teyit etmek kesinlikle gerekli olacaktır.