Antijene Özgü Bağışıklık Kompleksi Testi
Bir enfeksiyon sırasında meydana gelen olayların teorik bir analizini gösterir. Bir mikroorganizmanın büyümesinin artan miktarlarda mikrobiyal antijen üreteceğini ve enfekte konakçının spesifik antikor üreterek yanıt vereceğini gösterir.
Hatta başarılı bir yanıtta oluşan antikor miktarı organizmanın büyümesini baskılayacaktır. Bu diyagramdan birkaç şey dikkate alınmaya değer. İlk olarak, erken bir aşamada, ölçüm için antikordan daha fazla antijen mevcuttur. İkincisi, serbest ölçülebilir antikor yalnızca enfeksiyon seyrinde geç ortaya çıkar.
Üçüncüsü, enfeksiyonun çoğu boyunca, diyagramda taranmış alan ile temsil edildiği gibi antijen ve antikor arasında immün kompleksler oluşur. Bu immün kompleksler, enfekte eden organizmalardan antijenleri içereceğinden, ölçümleri tanıya yönelik bir yol sağlar.
Yıllardır sistemik mikrobiyal enfeksiyonların çoğunun hastanın kanında yüksek seviyelerde bağışıklık kompleksleri ürettiği bilinmektedir. Muhtemelen karmaşık ölçüm tekniklerinin geçmişte zor olması nedeniyle, bu tanımadan nadiren tanısal olarak yararlanılmıştır.
Son birkaç yılda, immün kompleks testi kullanılarak pnömokokal pnömoni, enfektif endokardit, Lyme hastalığı, cüzzam, tüberküloz menenjit ve Hepatit C virüsü enfeksiyonunun teşhisi için yöntemler tarif edilmiştir. Kullanılan tekniklerden bazıları aşağıda tartışılmaktadır.
Polietilen Glikol Kullanan Yöntemler
Bu testlerde, kompleksler polietilen glikol ilavesiyle serumdan çökeltilir. Bu işe yarar çünkü kompleksler, doğal immünoglobulin veya antijenden farklı bir boyuta sahiptir. Polietilen glikolün birkaç saat, genellikle gece boyunca çalışmasına izin verilir ve bu sürenin sonunda serum numunesi kuvvetli bir şekilde santrifüjlenir ve çökelti daha fazla analiz için çıkarılır.
Testin bir sonraki aşaması, kompleksleri bozmayı ve antijen bileşenini tespit etmeyi içerir. Bu, ısıtma (60 ° C'de 30 dakika), düşük pH tamponu (örn. Glisin / HCl) veya 1 M fosfat gibi yüksek molariteli bir tampon ilave edilerek yapılabilir. Komplekslerin bozulmasından sonra antijen, yukarıda tarif edilen yöntemlerden biri veya diğerini kullanarak, örn. ELISA.
Polietilen glikol içeren ilaç
Polietilen glikol hangi ilaçlarda var
Polietilen glikol ne ise yarar
Polietilen glikol kabızlık
Kolonoskopi öncesi barsak temizliği ilaçları
Polietilen Glikol Nedir
Polietilen glikol solüsyonu
Polietilen glikol solüsyonu nedir
Doğrudan ELISA Ölçümü
Bu testler genellikle ilgili antijenlere özgü monoklonal antikorları kullanır, mikrotitre plakalarının oyuklarına eklenir ve yakalama reaktifleri olarak kullanılır. Hastanın numunesi eklenir ve mevcut kompleksler yakalanır.
İkinci bir aşamada, bir bağışıklık kompleksi yoluyla plakanın yüzeyine bağlanan herhangi bir insan antikoruna bağlanacak olan enzim etiketli anti-insan immünoglobulin eklenir. Bu versiyon, sadece ilgili antijenleri yakalamak için monoklonal antikorların yüksek özgüllüğüne dayanmaktadır.
Ayrıca, bu yöntemle teşhisin, hastanın antikorunun ELISA plakasında yakalanan antijene bağlanmadıkça mevcut olamayacağının iddia edilmesiyle kanıtlanmadığı, yalnızca çıkarıldığı da not edilmelidir.
İmmün kompleksler için bağlayıcı ajanlar kullanan testler
Bağışıklık komplekslerini spesifik olarak bağladığı bilinen birçok madde vardır, örn. ayrılmış ve saflaştırılmış C1q (tamamlayıcının ilk bileşeni), romatoid faktör (bazı hastalarda geliştirilen ve insan IgG'sine karşı yönlendirilen bir antikor) ve konglutinin (bir sığır serum proteini), tümü bağışıklık komplekslerini bağlar.
Bu maddeler, mikrotitre plakalarına genel olarak ELISA deneyleri için açıklanan şekilde eklenebilir ve daha sonra bu maddeler, hastanın numunesinde bulunan herhangi bir bağışıklık kompleksini yakalayacaktır, kompleksin doğası daha sonra antijenlere karşı enzim etiketli bir antikor kullanılarak belirlenir.
Bu tür tahlilin kullanımına ilişkin raporların çoğu şu anda deneyseldir, ancak hız ve ekonomi sunarlar ve genellikle yukarıda açıklanan diğer yöntemlerden daha hassastırlar. Gelecekte daha sık kullanılmaya başlayabilirler.
Diğer testler - Kromatografi testleri
Yukarıda tarif edildiği gibi, mikroorganizmalardan antijenin tespiti, bir enfeksiyondaki mevcudiyetinin bir işareti olarak kullanılabilir. Aynı şekilde, organizmalardan metabolitlerin tespiti, organizmanın varlığını işaret etmek için kullanılmıştır.
Metabolitlerin tespiti ve tanımlanması, gaz-sıvı kromatografisi (GLC) veya yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ile gerçekleştirilir, ancak önceki yöntem en iyi bilinen teşhis örneklerini açıklar.
GLC genellikle, bir taşıyıcı gaz akışı kullanılarak uygun bir ayırma maddesinden (örneğin Chromasorb) bir numuneyi geçirerek uçucu ve uçucu olmayan yağ asitlerini ayırmak ve tanımlamak için kullanılır. Farklı yağ asitleri farklı zamanlarda ayrılır.
Erken bir uygulama, sistemik Candida albicans enfeksiyonu olan hastaların serumunda arabinitolün tanımlanmasıydı. Başlangıçta bu metabolitin yüksek seviyelerinin yalnızca bu enfeksiyonla ilişkili olduğu düşünülüyordu, ancak sonraki araştırmalar ölçümün güvenilmez bir teşhis belirteci olduğunu kanıtladı.
Yöntemin rutin örneklerde kullanılması yaygın bir uygulama olmamakla birlikte, irin ve eksüdalarda bu tür organizmaların varlığının doğrudan belirlenebileceği söylenmektedir. Yöntemin anaerobik bakterileri, özellikle Gram-negatif organizmaları tanımlamak ve sınıflandırmak için kullanılması daha başarılı olmuştur.
Nefes testleri
Bu invazif olmayan testler, artık duodenal ülserlerin nedeni olarak kabul edilen Helicobacter pylori'yi tespit etmek için kullanılmıştır. H. pylori, solunan nefeste ölçülebilen etiketli CO2 salmak için sindirilmiş radyoaktivite etiketli üreyi hidrolize edebilen güçlü bir üreaz enzimine sahiptir.
Test için 13C ve 14C olmak üzere iki izotop kullanılmıştır: 13C daha güvenli ancak 14C'den daha pahalıdır. Testler yarı kantitatiftir ve üre mideye dağıldığı için örnekleme hatası yoktur. Bu testlerin duyarlılığı ve özgüllüğü kültür ve histoloji ile iyi karşılaştırılır. Testler H. pylori teşhisi için veya tedaviye yanıtı izlemek için kullanılabilir.
Gelecek Gelişmeler
Genel seroloji alanında çeşitli zorluklar vardır. Birincisi, sonuçların hızı sorununu ele almaktır. Yavaş bir sonuç (yani birkaç gün), bir hastanın enfeksiyonunun teşhisi ve tedavisi açısından ya akademik açıdan ilgi çekicidir ya da yararsızdır. Açıktır ki, antijen veya antijene özgü bağışıklık kompleksi saptaması, teşhis için antikor saptamasından daha hızlı bir yol sunar ve bu nedenle bu tahlillerin geliştirilmesi arzu edilir.
Ayrıca, hem antijene hem de antijene özgü bağışıklık kompleksi deneyleri tam olarak niceliksel olabilir ve seri ölçümlerle uygun şekilde kullanıldığında, herhangi bir enfeksiyonun ciddiyetini ve tedaviye yanıtı değerlendirebilmelidir. Bugüne kadar bu yöntemlerin genellikle niteliksel olarak kullanılması hayal kırıklığı yaratmaktadır ve performanslarındaki iyileşmenin, bir teknoloji değişikliğinden çok felsefedeki bir değişiklikle ilgisi olacaktır.
Gelecek için gerçek bir zorluk, yukarıdaki yöntemlerden bazılarını ortak organizmaların neden olduğu enfeksiyonlara uygulamak olacaktır. Pek çok örnek var, ancak Escherichia coli'ye bağlı ciddi enfeksiyonun teşhisi ve yönetimi faydalı bir örnek oluşturuyor.
Histopatolojide Proliferasyon Belirteçleri
İnsan tümörlerinde hücrelerin proliferasyon hızının prognoz üzerinde önemli bir etkiye sahip olduğu iyi bilinmektedir. Proliferatif aktivite ilk olarak, belirli bir süre boyunca bir kütlenin boyutundaki değişimin ölçülmesiyle kaba bir şekilde tahmin edildiğinden, tüm proliferasyon konusu ve nasıl ölçüleceği gelişti ve şu anda bu konuda yüzlerce yayın var.
Yeni belirteçleri tanıtan, yerleşik belirteçleri birleştiren, gösterim tekniklerini değiştiren ve değerlendirmeye yönelik yeni yaklaşımları savunan sürekli bir makale akışı vardır. Böylesi bir bilgi yığını, nükleer silahların yayılmasını ölçmek isteyen deneyimsiz kişi için göz korkutucu bir olasılıktır ve genellikle “Bunu yapmanın en iyi yolu nedir?” sorusunu sorar.
Çoğalmayı ölçmenin bazı farklı yollarını açıklamadan önce, tüm belirteçler belirli bir yönü gösterdiğinden, hücre döngüsünün temel bir anlayışına sahip olmak önemlidir. Döngü veya “büyüme fraksiyonu” aşamasının dört aşaması vardır: Gap 1 (G1), DNA sentezi (S), Gap 2 (G2) ve mitoz ve ardından sitokinez (M) vardır.
Döngü aşaması sırasında hücre, DNA’sının kopyalanmasına ve ardından nükleer ve hücre bölünmesine izin vermek için gerekli proteinleri sırayla üretir. Bir sonraki aşamaya geçmeden önce hücrenin durumunu değerlendirmek için döngünün tüm aşamalarında kontrol noktaları bulunur.
Normalde sadece DNA’nın mükemmel durumda olduğu hücrelerin bir sonraki aşamaya geçmesine izin verilir. Bir şekilde kusurlu olan hücreler, DNA onarılıncaya kadar tutuklanır veya programlanmış hücre ölümüne (apoptoz) yönlendirilir.
Tüm hücreler, Gap 0 veya (G0) olarak bilinen proliferasyon veya non-döngüsel olmayan bir aşamaya girebilir. Burada hücreler canlılıklarını korurlar ve gerektiğinde döngüye geri dönebilirler.
“Yayılma hızı” terimi, klinik materyaldeki bir proliferasyon belirtecinin “miktarını” tanımlamak için sıklıkla kullanılır. Bu ölçümler genellikle belirli bir zamanda bir doku parçası üzerinde yapılır, bu nedenle “oran” terimi uygun değildir. Proliferatif ‘aktivite’, bu tür bir değerlendirmenin daha doğru bir ifadesidir ve ‘oran’ terimi, zaman içindeki değişimi ölçen yöntemler için ayrılmalıdır.
Ki-67 proliferasyon indeksi 30 ne demek
Histopatolojik tetkik nasıl yapılır
ki-67 proliferasyon indeksi 25 ne demek
Ki-67 proliferasyon indeksi 95
ki-67 indeksi
ki-67 proliferasyon indeksi 5 ne demek
ki-67 proliferasyon indeksi 90 ne demek
Memede histopatolojik inceleme nedir
Yayılma Belirteçleri
Sözde çoğalma belirteçlerinin sayısı artmaya devam ediyor. Aşağıda özetlenenler, makul ölçüde iyi belirlenmiş ve prognostik bilgi sağladığı gösterilenlerdir.
Mitotik sayım (MC) veya mitotik aktivite indeksi (MAI)
Mitozlar, geleneksel hematoksilen ve eozin (H&E) ile boyanmış doku bölümünde tanımlanabilen ve ölçülebilen tek proliferatif belirteçtir.
Bununla birlikte, her zaman kolay tanınmazlar ve apoptozun erken aşamalarında hiperkromatik çekirdeklerle veya çekirdeklerle karıştırılabilirler. Yetersiz fiksasyon, zayıf kesit kesimi ve aşırı boyama, mitozların tanınmasında zorluklara yol açabilir ve hatta tanımlanan mitoz sayısını etkileyebilir.
Bir doku parçasının proliferatif aktivitesini mevcut mitoz sayısına göre tahmin etmek ilk bakışta basit bir görev gibi görünebilir. Bununla birlikte, yıllar içinde birkaç farklı değerlendirme yöntemi geliştirilmiştir ve mitozların proliferasyon belirteçleri olarak iyi bilinen değerine rağmen, ‘doğru’ değerlendirme yöntemi konusunda her zaman olduğu kadar tartışma devam etmektedir.
Bir mitotik ‘sayım’, kullanılan ilk resmi değerlendirme yöntemiydi, genel bir tahminden veya pek çok patolog tarafından kullanılan 0, þ, þ + sisteminden bir artış. Bir mitotik sayım, bir dizi yüksek güç alanında (HPF’ler) bulunan mitozların sayısını tam anlamıyla sayar ve sonuçları HPF başına ortalama mitoz sayısı olarak sunar.
Yöntemi daha tekrarlanabilir hale getirmek için, lezyonun çevresindeki hücrelerin değerlendirilmesi, ardışık alanlarda sayım yapılması ve HPF’nin alanının tanımlanması dahil olmak üzere iyileştirmeler yapılmıştır.
Mitotik sayım, modifiye edilmiş Bloom ve Richardson kriterlerini kullanarak infiltre meme karsinomlarının derecelendirilmesinin ayrılmaz bir parçasıdır ve ayrıca yumuşak doku sarkomlarının teşhisini ve prognozunu belirlemek için kullanılır.
Mitotik sayımla ilişkili bazı tutarsızlıkların üstesinden gelmek için mitotik aktivite indeksi tanıtıldı. Bu değerlendirme yöntemi ile mitoz sayısı, fazlar arası hücre sayısının bir oranı olarak ifade edilir.
Fazlar arası hücrelerin toplam sayısı ve mitotik rakamlar, bölüm yeterince iyi örneklenene kadar ardışık HPF’lerde sayılır. MAI lezyondaki mitoz oranını ölçtüğü için, HPF alanıyla ilgili veya bundan etkilenmez.
Hem lezyonun hücreselliği hem de hücre boyutundaki farklılıkları da hesaba katar. Bir mitotik aktivite indeksi, mitotik sayımdan yaklaşık 10 dakika daha uzun sürer, ancak bu, tümörler arasında mevcut mitoz oranını karşılaştırmanın daha doğru bir yoludur.
Mitotik figürleri tanımlamanın bir başka yolu, MPM2 gibi antikorları kullanmaktır. Bu yöntemler, apoptotik cisimlerin mitotik sayıma dahil edilme şansını azaltmayı ve otomatik analize kendilerini vermeyi amaçlamaktadır.
Nükleolar düzenleyici bölgeler (NOR’ler)
NOR’lar, rDNA genlerinin bölgeleridir ve bir dizi spesifik kromozom üzerinde gruplar veya döngüler halinde bulunur. Hücre, birkaç transkripsiyon bölgesine sahip olarak, gerektiğinde ribozom talebine ayak uydurabilir.
NOR’la ilişkili proteinler, adından da anlaşılacağı gibi, NOR’lara çok yakın bir yerde bulunur ve proliferasyon belirteçleri olarak gösterilen bu proteinlerdir. NOR ile ilişkili proteinler arjirofiliktir ve bir gümüş tekniği kullanılarak gösterilebilir ve bu nedenle AgNOR olarak anılır. Çekirdekte küçük siyah noktalar olarak görülebilirler.
Mevcut AgNOR sayısının ribozom üretimini ve dolayısıyla hücre içindeki protein sentezini yansıttığı kabul edilir. Ortaya çıkan AgNOR değerlendirmesi, sadece proliferatif aktivitenin bir belirteci olarak değil, aynı zamanda iyi huylu ve kötü huylu lezyonları ayırt etmek için bir yöntem, bir tümör ploidi ölçüsü ve malignite derecesi olarak tasvir edilmiştir.
AgNOR’ları saymak son derece zahmetlidir ve bazı eski yazarlar da nükleolus içindeki modellerini “kümelere” ve “uydu AgNOR’lara” atıfta bulunarak açıklamaya çalışmışlardır. Prognostik değerlerinde bildirilen varyasyonların çoğunu açıklayan değerlendirme tekrarlanabilir değildi.
AgNOR’ların varlığını ölçmek için görüntü analizörlerinin kullanımını açıklayan bir dizi yayın vardır ve bunların çoğu, çekirdek içinde AgNOR’ların kapladığı ortalama alanın prognostik bilgi sağladığını göstermiştir.