Antinükleer Antikor (ANA)
Klinik uygulamada, indirekt immünofloresan ile gösterildiği gibi antinükleer antikorların (ANA) saptanması, SLE tanısı için tek ve en yararlı işarettir. ANA, bir insan epitel hücre hattından (HEp-2) türetilen kemirgen doku veya doku kültürü hücrelerinin test serumu ile kaplanması ve ardından floreseine konjuge edilmiş ikinci bir antikor olan anti-insan IgG'si ile saptanır.
Kemirgen dokusu kullanıldığında, aktif olarak tedavi edilmemiş hastalığı olan hastaların yaklaşık %95'inde yüksek titre ANA'sı vardır (>80'de 1). HEp-2 hücreleri, tedavi edilmemiş hastalığı olan hastalarda yaklaşık %98-99 pozitiflik ile daha da yüksek bir hassasiyet derecesi sergiler.
Amerikan Romatoloji Koleji, Amerikan Patologlar Koleji, Klinik İmmünoloji Derneği ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin yakın tarihli yetkili kılavuzları, ANA taraması için en iyi substrat olarak HEp-2 hücrelerinin kullanılmasını önermektedir (Kavanaugh ve ark.). HEp-2 hücrelerinin yaygınlaşmasıyla birlikte tanısal bir varlık olarak ANA negatif lupusun varlığı sorgulanmaya başlanmıştır (Cross ve ark.).
Tersine, HEp-2 hücrelerinde ANA negatif olan bir hastada tedavi edilmemiş SLE olasılığı <%1 düzeyindedir. Bununla birlikte, pozitif bir ANA sonucu, çeşitli başka hastalıklarda ortaya çıktığı için SLE'ye özgü değildir.
HEp-2 hücrelerinde birkaç farklı ANA modeli tanınır: homojen, nükleolar, benekli, periferik ve sentromer. CREST sendromunun (kalsinozis, Raynaud fenomeni, özofagus disfonksiyonu, sklerodaktili, telenjiektazi) ve sklerodermanın spesifik bir belirteci olan sentromer antikoru dışında, diğer ANA paternlerinin hiçbiri antijenik özgünlüğün güvenilir bir göstergesi değildir.
Bu ve diğer birçok hastalık durumunda ANA oluşumu göz önüne alındığında, pozitif bir ANA'yı antijenik özgüllüğü açısından daha fazla karakterize etmek esastır. SLE'de dolaylı immünofloresan ile pozitif bir ANA, DNA, histonlar ve ayrı ayrı Ro, La, Sm ve U1-RNP (üridin ribonükleer) olarak bilinen bir grup ekstrakte edilebilir nükleer antijen (ENA) gibi nükleer antijenlere karşı antikorların varlığını yansıtır. protein).
Ekstrakte edilebilir nükleer antijenlere (ENA) karşı antikorlar
Ro, La ve Sm, ilk tanımlandıkları hastaların adlarını aldı: Robert, Lane ve Smith. U1-RNP (üridin ribonükleer protein) ile birlikte bu proteinler, mRNA'nın eklenmesinden ve işlenmesinden sorumludur. ANA'nın aksine, ENA'ya karşı antikorlar lupus ve ilgili bozukluklara özgüdür ve bu nedenle tanıda yardımcıdır.
Ek olarak, tek tek antikorlar belirli klinik belirtilerle korelasyon gösterme eğilimindedir; anti-Ro, lupus ve Sjögren sendromunda ortaya çıkar ve kutanöz hastalıkla koreledir. ANA yokluğunda anti-Ro antikorlarının oluşabileceğini bilmek önemlidir.
ANA-negatif, Ro-pozitif profil, lupuslu hastaların küçük bir kısmında (substrat olarak HEp-2 hücrelerinde <%1) oluşur; ancak kemirgen dokusu substratı üzerinde, Ro antijeni kemirgen dokusunda yetersiz temsil edildiğinden bu rakam %5'e yükselir.
ANA testi pozitif çıkanlar Kadınlar Kulübü
ANA testi pozitif çıkanlar
ANA testi pozitif doktorsitesi
Ana testi kaç günde çıkar
ana 1/100
Anti histon antikor
Nükleer patern ince benekli ne demek
Ana testi ekşi
Lupuslu gebe kadınların %5-25'inde, anti-Ro antikorları plasentayı geçerek yenidoğanda geçici kutanöz lupusa neden olur; daha ciddi olarak, anti-Ro pozitif annelerden doğan bebeklerin %1-3'ünde kalp pili takılmasını gerektiren kalıcı konjenital kalp bloğu gelişir.
Lupus hastalarının yaklaşık %30'unda anti-Ro antikorları izole olarak ortaya çıkarken, vakaların %15'inde bunlara anti-La antikorları eşlik eder. İkinci durumda, hastaların böbrek hastalığına sahip olma olasılığı daha düşüktür.
Yukarıda tartışılan klinik bağıntılara ek olarak, ANA negatif anti-Ro pozitif profili aynı zamanda erken kompleman bileşenlerini etkileyen altta yatan primer kompleman eksikliği için bir belirteç görevi görür. Homozigot C4 ve C2 eksiklikleri olan hastalarda yapılan araştırmalar, vakaların yaklaşık %50-70'inde anti-Ro pozitifliği ortaya koymaktadır.
SLE'nin primer kompleman eksikliği ile ilişkisinden sorumlu kesin mekanizma kurulmamış olsa da, eksik kompleman bileşeni ile ilgili olarak bir hastalık şiddeti hiyerarşisinin varlığı iyi belgelenmiştir; hastalık şiddeti C1q eksikliği olan hastalarda en fazladır ve bunu toplam C4 eksikliği yakından takip eder. C2 eksikliği olan hastalarda hastalık şiddeti, sağlam kompleman yolakları olan hastalarda görülenle karşılaştırılabilir.
Anti-Sm antikorları lupus için oldukça spesifiktir ancak prevalansları hastanın etnik geçmişine göre değişir; Afro-Karayipli hastaların %30'u, Kafkasyalıların %10'unun aksine anti-Sm- pozitiftir. Sm ve U1-RNP arasındaki paylaşılan peptit dizileri göz önüne alındığında, Sm ve U1-RNP'ye karşı antikorlar birlikte oluşma eğilimindedir.
İzolasyonda anti U1-RNP antikorlarının varlığının, ek polimiyozit ve skleroderma özellikleri olan lupus örtüşme sendromlu bir grup hastayı tanımladığı düşünülmüştür. Sharp ve meslektaşları, daha düşük böbrek ve nörolojik hastalık riski göz önüne alındığında daha iyi bir prognoza sahip oldukları düşünülen bu hastaları karakterize etmek için "karma bağ dokusu hastalığı" (MCTD) terimini ortaya attılar.
Orijinal kohortun uzun süreli takibi, birçok hastada daha sonra böbrek ve nörolojik hastalık geliştirdiğinden, MCTD'nin farklı bir benign antite olarak varlığını sorgulamıştır.
NOT: HEp-2 hücrelerinde antinükleer antikorların (ANA) boyama desenleri. (a) Homojen. (b) Benekli. (c) Nükleolar. (d) Çevresel. (e) Sentromer (23 çift kromozomun kinetokorlarının boyanmasını temsil eden çok sayıda ince noktanın görünümüne dikkat edin). Bay K. Taylor, Leeds General Revir'in izniyle
Algılama Yöntemleri
İmmünopresipitasyon tahlilleri ENA'ya karşı antikorlar birkaç yöntemle saptanabilir. Başlangıçta, birçok laboratuvar antikorların varlığını göstermek için karşı akım immünoelektroforezi (CIE) veya Ouchterlony çift difüzyon yöntemini kullandı.
CIE, agar jeller üzerinde gerçekleştirilir ve antikor ve antijenin, uygun pH'da immünopresipitasyonun meydana geldiği lamın merkezinde buluşmak üzere zıt yönlerde göç etmesine izin verir. Ouchterlony çift difüzyon tekniği de immünopresipitasyona dayalıdır; antijen, bir agar slaytının merkez kuyusuna yerleştirilirken, kontrol ve hasta serumu, merkezi kuyuyu çevreleyen kuyucuklara yerleştirilir. 24-48 saatlik inkübasyondan sonra, antijen-antikor reaksiyonunun varlığını gösteren presipitin çizgileri oluşur.
Presipitin kimliği, daha önce karakterize edilen referans serum tarafından üretilen presipitin çizgileri ile karşılaştırılarak belirlenir. Hem CIE hem de çift difüzyon, yüksek konsantrasyonlarda spesifik antikorları (0.1–1.0 mg/ml) tespit etmek için uygun kalitatif tekniklerdir.
Bazen çift difüzyon testlerinin sonuçlarını yorumlamak zor olabilir. Antijen konsantrasyonu, hasta serumundaki antikor konsantrasyonu ile bir denklik zonu oluşturacak şekilde ayarlanmazsa yanlış negatif sonuçlar oluşabilir ve özgünlüğü bilinmeyen çoklu çökelti çizgileri klinik olarak anlamlı antikorların tanımlanmasına müdahale edebilir.
Çift difüzyonun aksine, CIE nispeten daha yüksek hassasiyet, hız ve daha fazla numuneyi işleme yeteneği sergiler. Bununla birlikte, teknik olarak zahmetlidir ve sonuçları daha az nettir.
Reptilaz Zamanı
Reptilaz, fibrinojenden fibrinopeptid A’yı parçalayarak insan fibrinojenini pıhtılaştıran Bothrops atrox (Per-de-lana) yılanının zehirinden elde edilen bir enzimdir. Reptilaz, heparin veya anti-trombin III tarafından inhibe edilmez. Uzatılmış bir trombin zamanı ve normal reptilaz zamanı da numunede heparin varlığı ile uyumludur. Disfibrinojenemi ve hipofibrinojenemide reptilaz süresi uzar.
Fibrinojen
Kalıtsal fibrinojen bozuklukları nadir olmakla birlikte, tüketim koagülopatileri, karaciğer hastalığı olan hastalarda ve kardiyopulmoner baypas dahil olmak üzere büyük cerrahiyi takiben edinilmiş bozukluklar yaygındır. Ayrıca, yüksek fibrinojen düzeyleri ile iskemik kalp ve periferik vasküler hastalık riskinin artması arasındaki ilişki iyi bilinmektedir.
Fibrinojen aynı zamanda bir akut faz reaktanıdır ve inflamatuar hastalıklarda yaygın olarak görülen artmış düzeylere sahiptir. Sonuçların yorumlanması bu nedenle zordur ve en uygun yöntem araştırmanın nedenine bağlıdır.
Düşük fibrinojen düzeylerinin manuel Clauss yöntemiyle doğrulanması tavsiye edilir. Fibrinojeni ölçmek için kullanılan çok sayıda yöntem vardır ve en yaygın olarak fibrin oluşumuna dayalı olarak fonksiyonel fibrinojeni ölçmek için kullanılan pıhtılaşma yöntemleri vardır. Trombin zamanı yönteminde (Clauss), trombin zamanı, test örneğindeki fibrinojen konsantrasyonuyla orantılıdır.
Bilinen fibrinojen konsantrasyonlarından bir kalibrasyon eğrisi hazırlanır ve trombin zamanını bir fibrinojen konsantrasyonuna dönüştürmek için kullanılır. Yüksek konsantrasyonlarda bulunmadıkça, FDP’ler veya heparinden çok az etkileşim vardır.
Bir fibrinojen titresi, bir dizi plazma dilüsyonu ve ardından trombin ilavesi kullanılarak elde edilebilir. Fibrinojenin seyreltildiği seyreltme, mevcut fibrinojen konsantrasyonunun bir ölçüsüdür.
Test genellikle sırasıyla FDP’lerin ve fibrinolizin göstergeleri olarak protamin sülfat ve E-aminokaproik asit (EACA) ile paralel olarak yürütülür. Daha az yaygın olarak kullanılan fizikokimyasal yöntemler toplam fibrinojeni ölçer ve fonksiyonel aktiviteyi yansıtmayabilir, immünolojik yöntemler ise hem fibrinojende hem de FDP’lerde bulunan faktörle ilişkili antijeni ölçer.
Otomatik koagülometrelerin artan kullanımı, bir spektrofotometre kullanılarak bir türbidometrik analize dayalı olarak protrombin zamanından türetilmiş bir parametre olarak fibrinojen tahlillerinin otomasyonuna yol açmıştır.
Fibrinojen nedir
Fibrinojen yüksekliği
fibrinojen yüksekliği covid-19
Fibrinojen yüksekliği COVID
Korona fibrinojen
d-dimer ve fibrinojen yüksekliği
Fibrinojen düşüklüğü
Fibrinojen yüksekliği ekşi
D-dimer tahlilleri ve FDP’ler
D-dimer tahlilleri, venöz tromboembolik hastalık tanısında giderek daha fazla kullanılmaktadır. D-dimer fragmanları, trombin tarafından üretilen fibrin pıhtılarının plazmin tarafından parçalanması sırasında üretilir. Testler, fibrinojen ile çapraz aktivitesi olmayan çapraz bağlı fibrin fragmanlarına özgü antikorlar tarafından tespite dayanır.
Dolayısıyla bu testler plazma numuneleri üzerinde gerçekleştirilebilir. D-dimer tespiti için şu anda üç ana yöntem vardır. Bir enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) oldukça hassastır ve nicel sonuçlar sağlar.
Ana dezavantaj, tekniğin zaman alıcı olması ve bu nedenle bu testin venöz tromboembolik hastalık için hızlı tarama için kullanıldığı durumlarda problemler ortaya çıkarmasıdır. Lateks aglütinasyon tahlilleri daha hızlıdır ancak %80’lik daha düşük bir duyarlılığa sahiptir ve herhangi bir tarama prosedürünün parçası olarak klinik olasılık skoru ile birlikte kullanılmalarını gerektirir.
Kantitatif otomatik lateks deneyleri, 405 nm’de ışık geçirgenliğindeki düşüşü ölçmek için özel ekipman gerektirir; bunun hassas ve aynı zamanda hızlı olma avantajı vardır. Tam kan aglütinasyon testleri, bir D-dimer için monoklonal antikorun kırmızı hücrelere bağlanan monoklonal antikora bağlı olduğu kantitatif kırmızı hücre aglütinasyonuna dayalı en hızlı testi sunar. Bu testler hızlıdır ancak operatöre bağlıdır ve nicel bir sonuç vermez.
Bu tahliller, venöz tromboembolik hastalık için yüksek bir negatif tahmin değerine sahiptir ve bu nedenle venöz trombozu dışlamak için hastaların taranmasında genellikle bir klinik tahmin olasılık skoru ile birleştirilir.
Yükseltilmiş D-dimer sonuçları derin ven trombozu için spesifik değildir ve özellikle daha hassas testlerde, enfeksiyon iltihabı, vaskülit, hamilelik gibi çeşitli koşullarda ve özellikle 3 haftaya kadar takip eden dönemde düşük fibrin seviyeleri tespit edilir.
Yükseltilmiş D-dimer ve FDP seviyeleri yaygın damar içi pıhtılaşmada görülür ve in vivo plazmin aktivasyonunu takiben hastalık ilerlemesini izlemede yardımcı bir yöntemi temsil eder. Test aynı zamanda streptokinaz veya ürokinaz gibi terapötik bir fibrinolitik ajana karşı bir fibrinolitik yanıtın elde edilip edilmediğini değerlendirmek için de kullanılabilir.
D-dimer tahlilleri daha spesifik olduğundan ve fibrinojenoliz ile fribrinoliz arasında ayrım yaptığından, büyük ölçüde FDP tahlillerinin yerini almıştır.
FDP’ler, fibrinojen ve çapraz bağlı olmayan fibrinin plazmin degradasyonunu takiben artar ve uzamış trombin süresi veya reptilaz pıhtılaşma süresi ile sonuçlanır. En yaygın olarak gerçekleştirilen FDP tahlilleri, FDP’leri tanıyan bir antikorun lateks partiküllerinin yüzeyi üzerine kaplandığı bir lateks aglütinasyon tekniği kullanır.
Partiküller, FDP’lerin mevcudiyetinde aglütine olur ve konsantrasyon, aglütinasyonu sürdüren seyreltme ile belirlenir. Bu tahlilde kullanılan antikorlar fibrinojeni çapraz bağlayabildiğinden fibrinojen hasta numunesinden çıkarılmalıdır.
Bu, bölünmüş ürünlerin in vitro oluşumunu önlemek için bir plazmin inhibitörü varlığında numunenin trombin veya yılan zehiri ile pıhtılaşmasıyla gerçekleştirilir. Bu reaktifler özel toplama tüplerine dahil edilmiştir.
Faktör Tahlilleri
Spesifik pıhtılaşma faktörü tahlilleri ya protrombin zamanına ya da APTT’ye dayanır. Belirli bir faktör eksikliği olan plazmaya bir dizi plazma standardı seyreltisi eklenir. Elde edilen pıhtılaşma süreleri, günlük kağıdına çizildiğinde faktör konsantrasyonuyla doğrusal bir ilişki gösterir.
Faktörün test plazmasındaki aktivitesi daha sonra grafikten belirlenebilir. Bu testler, kalıtsal bozuklukları olan hastaların belirlenmesinde ve ayrıca faktör konsantrasyonu replasman tedavisinin izlenmesinde özellikle önemlidir.
Faktör II, V, VII ve X yaygın olarak tek aşamalı bir protrombin zamanı kullanılarak test edilirken, faktörler VIII, IX, XI ve XII bir APTT yöntemine dayanır. Faktör XIII eksikliği, fibrin oluşumuna yol açan reaksiyona katılmadığı için rutin pıhtılaşma testlerinin hiçbirinde saptanmaz.
Üre çözünürlük testi, faktör XIII eksikliğini taramak için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Bir fibrin pıhtısı oluşur ve plazma örneğine aseton veya üre eklenir, 37°C’de inkübe edilir. Faktör XIII’ün etkisiyle çapraz bağlanan fibrin bu solüsyonlarda çözünmez, ancak faktör XIII aktivitesinin yokluğunda bir fibrin pıhtısı bir saat içinde çözülür.