G6PD Eksikliği (Glukoz 6-fosfat dehidrojenaz)
Kırmızı hücre, glikoz metabolizmasının pentoz fosfat şant yolundaki ilk enzimin eksikliğinden dolayı azaltılmış bir indirgeyici enerjiye sahiptir. Genellikle cinsiyete bağlı çekinik bir durumdur: hastalık erkeklerde X kromozomunda bir etkilenmiş genle ifade edilir, ancak dişilerin etkilenmiş iki gene ihtiyacı vardır.
Bir tanesi etkilenen dişiler, Lyon hipotezine göre, hangi hücrelerde hangi X kromozomunun inaktive edildiğine bağlı olarak değişken ekspresyon gösterecektir. Çoğunlukla siyahi ve Akdenizli popülasyonlarda görülür ve dünya nüfusunun %3'ünü etkiler. G6PD aktivitesi retikülositlerde mevcuttur ancak bu bireylerde hızlı ve erken düşer.
Bu nedenle oksidan kimyasallara ve ilaçlara (örn. sülfonamid antibiyotikler) maruz kalındığında kırmızı hücre bütünlüğü azalır. Heinz cisimleri özel olarak hazırlanmış kan filmlerinde görülür. Teşhis, G6PD testiyle yapılır, ancak yalnızca kararlı durumda (hemolitik krizlerden sonra olduğu gibi aşırı sayıda retikülosit olduğunda değil). Bazı bölümlere yiyecekler (klasik olarak bakla - 'favizm') ve ilaçlar neden olur.
6GPD eksikliği için tarama
Pentoz fosfat yolu içinde NADP, G6PD tarafından NADPH'ye indirgenir. Bu ürün ultraviyole ışık altında floresan verir. Bu, floresan nokta testinin temelini oluşturur.
Tam kan aşağıdakilerle karıştırılır:
Glikoz 6-fosfat.
NADP.
Parçalayıcı ajan (genellikle saponin)
Tampon
Daha sonra filtre kağıdına lekelenmeden önce 5-10 dakika inkübe edilir, kurutulur ve uzun dalga UV ışığı altında incelenir. Normal numuneler parlak bir şekilde flüoresans yapacak, eksik numuneler flüoresan etmeyecek veya sadece zayıf olacaktır. Herhangi bir anormal tarama testi, bir G6PD testi ile onaylanmalıdır; burada G6PD tarafından NADPH üretimi, optik yoğunlukta zaman içinde bir değişiklik ile spektrometrik olarak ölçülür.
Enzim eksikliği olanlar ne yememeli
G6PD eksikliği diyet
G6PD eksikliği askerlik
G6PD eksikliği anestezi
glukoz 6-fosfat dehidrogenaz nedir
Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
bebeklerde glukoz-6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
Enzim eksikliği öldürürmü
Piruvat kinaz eksikliği
Piruvat kinaz eksikliği "otozomal resesif" bir durumdur (her iki genin anormal olması, bir kişinin durumu kalıtım yoluyla alması) ve başka bir enzim sorunudur - daha nadir görülen G6PD dışı hastalıkların en yaygınıdır. Hücreler deforme olur ve savunmasız hale gelir. Kan filmi poikilositleri (anormal şekilli kırmızı hücreler) gösterir ve bunlar bir ilaç uyarısı olmadan kendiliğinden hemolizlenir. Transfüzyon gerekebilir.
Piruvat kinaz eksikliği taraması
Piruvat kinaz, reaksiyonun katalizörüdür: ADP + fosfoenolpiruvat ! ATP + piruvat
Bu reaksiyonun ürünü olan piruvat daha sonra laktat dehidrojenaz (LDH) tarafından katalize edilen aşağıdaki reaksiyona ilerler:
Piruvat ş NADH ! laktat + NAD
NADH, uzun dalga UV ışığı altında floresan verirken NAD olmaz. Bu nedenle, tam kan ADP, fosfoenolpiruvat ve NADH ile inkübe edildiğinde, normal numunelerde NADH, sonuçta bir floresan kaybıyla NAD'ye oksitlenir. Eksik numuneler parlak bir şekilde floresan verecektir.
Anormal bir PK tarama testi, NADH'nin NAD'ye oksidasyonunun zaman içinde fotometrik olarak absorbanstaki bir değişiklikle ölçüldüğü, enzimin tam bir tahlili ile teyit edilmelidir.
Bağışıklık Hemolizleri
Çeşitli koşullar (Tablo 34.4'te listelenenler gibi), daha kısa bir ömre sahip olan antikor kaplı kırmızı hücrelerle sonuçlanır. İmmün hemoliz, laboratuvardaki termal aktivite (ve aglütinasyon) aralığına bağlı olarak laboratuvarda 'sıcak' ve 'soğuk' tiplere ayrılır, klasik olarak ılıkta 37 C ve soğukta 4 C, ancak bazen küçük örtüşmedir.
Pozitif olacak (DCT, Şekil 34.4) geniş bir tarama doğrudan Coombs (anti-globulin) testinin yanı sıra, sıcak immün hemolizde daha spesifik bir profil (IgG, kompleman) veren reaktifler kullanılabilir. Soğuk immün hemoliz şüphesinde, kan örneğini serum ayrılana kadar sıcak tutmak, ardından yetişkin (antijen içeren) ve göbek bağı (antijen taşıyan) hücrelere karşı test etmek olağandır.
DCT genellikle sadece kompleman reaktifi ile pozitiftir ve kan filmi, ısıtılmadıkça aglütinasyon gösterir. Sıcak ve soğuk koşullar arasındaki ayrım tedavi için önemlidir. Sıcak immün hemolizlerde, antikor üretiminin etkisini durdurmayı veya buna müdahale etmeyi amaçlayan steroidler ve diğer immünosupresif tedaviler genellikle yararlıdır.
Splenektomi sıklıkla işe yarar. Bununla birlikte, soğuk immün hemolizlerde sitotoksik kemoterapi (bazen) ve hastayı sıcak tutmak (neredeyse her zaman) yardımcı olur, ancak steroidler veya splenektomi değil. Otoaglütinasyon çapraz eşleşmeyi engellediğinden, immün hemolizde genellikle transfüzyondan kaçınılır.
Hastanın klinik durumu zaman zaman transfüzyon gerektirir ve kesinlikle kırmızı hücre eksikliği nedeniyle yenik düşmesine izin verilmemelidir, bu durumda 'en az uyumsuz' kan verilir.
Yenidoğanın hemolitik hastalığı (HDN)
Rh+ fetüsündeki Rh-pozitif hücreler, Rh annenin dolaşımına geçer, örn. hamilelik sırasında kanama veya düşük yapma tehdidi. Bu, annenin anti-D (anti-rhesus) antikorları üretmesine neden olur ve bu antikorlar daha sonra aynı veya sonraki gebeliklerde fetüse geçer ve kırmızı hücreleri kaplar ve bebek Rh+ ise hemolize neden olur.
ABO grubu uyumsuzlukları benzer sorunlara neden olabilir, ancak daha az önemdedir. Doğumdan sonra yüksek konjuge olmayan bilirubin seviyeleri (hemolize bağlı olarak) kan-beyin bariyerini geçecek ve beyin hasarıyla birlikte 'kernikterus'a neden olacaktır. Değişim transfüzyonunu içerebilen tedavi bunu önleyecektir.
Kan filminde sferositler görülebilir ve DCT pozitif olacaktır. Ağır vakalarda bebek hidropik olacaktır (anemi/sarılık/ödemle şişmiş). Potansiyel feto-maternal kanama zamanlarında, annenin antikor üretimi, Rh+ hücrelerini temizlemek için intramüsküler enjeksiyon yoluyla anti-D'nin pasif olarak uygulanmasıyla engellenebilir, bu da annenin kendi yanıtını üretmesini engelleyecektir.
Anti-D'nin bu şekilde profilaktik kullanımı, modern bilimsel tıbbın başarı öykülerinden biridir, bu nedenle etkilenen bebekler artık nadirdir. Bunlar intrauterin transfüzyon (zor bir manevra!) veya yenidoğanın değişim transfüzyonu ile erken doğum indüksiyonu ile tedavi edilebilirler.
Uyumsuz Transfüzyon
Uyumsuz transfüzyon, immün aracılı bir hemoliz oluşturur. ABO uyumsuzluğunda (çok nadir görülen bir durumdur, ümit edilir) hastanın doğal olarak oluşan anti-A veya anti-B antikorları (veya her ikisi) nedeniyle donör hücreler intravasküler olarak yok edilir.
Hasta daha önce tarif edildiği gibi çok hızlı bir şekilde hastalanabilir ve hemoglobinüri geliştirecektir. Transfüzyon durdurulmazsa veya hasta anestezi altındaysa, durum ölümcül olabilir.
Diğer antijenlere bağlı uyumsuzluk reaksiyonları genellikle anemi ve sarılık ile ekstravasküler hemolize neden olur. İyileşme olağandır ancak alyuvar antijenlerine karşı allo-antikorlar nedeniyle bundan sonra çapraz eşleşme sorunları olacaktır.
Vitaminler
HPLC tüm bu kriterleri karşılar ve artık memeli dokusu, bitki dokusu ve gıda özütleri dahil olmak üzere çeşitli kaynaklardan alınan örneklerin analizinde yaygın olarak kullanılmaktadır.
HPLC’nin genel verimliliği ve çeşitli kromatografik modlar, analizlerin çoğunun ters faz, ters fazlı iyon çifti, normal faz veya iyon değişimli HPLC ile yapılmasına izin verir. Boyut dışlama ve afinite gibi diğer kromatografik modlar, vitaminlerin kromatografisinde sınırlı uygulama bulmuştur.
Pek çok vitamin son derece kararsızdır ve ekstraksiyon ve HPLC analizi sırasında stabilitelerinin iyileştirilmesine büyük önem verilmiştir. Kararsızlıklarının bir sonucu olarak, vitaminlerin HPLC ile analiz edilmesindeki en büyük zorluk, onları bozulmalarına neden olmadan çevrelerinde bulunan karmaşık moleküllerden çözmektir.
Ekstraksiyon ve numune hazırlamanın tüm alanını kapsamaya yönelik hiçbir girişim yapılmaz ve okuyucu bir incelemeye yönlendirilir; ancak, uygun yerlerde metinde belirli örnekler verilmiştir.
Yağda Çözünen Vitaminler
A vitaminleri
Bu vitamin sınıfı, retinoidler olarak da bilinen ve aynı zamanda vitamin A benzeri aktivite sergileyen bazı karotenleri (özellikle bitkilerden a -, / 3- ve y-karoten) içeren bir grup molekülü içerir. Bu bileşiklerin birçok türevi doğal olarak bulunur ve alkol, asetat ve palmitatı içerir.
A vitamini sınıfının çözünürlüğü için en iyi kromatografik mod, genellikle ekstraksiyon için kullanılan koşullar tarafından belirlenir.
Örneğin, lipidleri uzaklaştırmak için sabunlaşmadan sonra genellikle bir C veya Cı silika bazlı sabit faz kullanılarak sulu ters fazlı HPLC ile uyumlu olan heksan gibi çözücülere ekstraksiyon yapılır. Asetonitril içinde% 0.5 asetik asitin mobil fazını destekleyen bir Cı kullanan alternatif bir sistem rapor edilmiştir.
Alternatif olarak, numunelerin organik çözücülere ekstrakte edildiği yerlerde normal faz HPLC de kullanılabilir. Bu seçenek, A vitaminlerinin optik izomerlerinin çözünürlüğü için özellikle değerlidir ve örneğin, 13-cis-retinolkan bu sistem kullanılarak çözülebilir.
Retinoil türleri, kromatografiden önce retinole dönüştürülebilir, ancak sonraki profilin de üretilebilecek olası ara maddelerin sayısı nedeniyle yorumlanması zordur. Sulu olmayan ters faz kullanılarak iki tür tütün yaprağından A vitamini ekstraktlarının bilgisayar destekli bir analizi gösterilmektedir.
Kaydedilen karoten türevlerinin sayısı, hem kromatografik sistemler hem de saptama yöntemleri geliştikçe artmaktadır ve şu anda 300’den fazla doğal olarak oluşan karotenoid keşfedilmiştir. Karotenoidlerin tahlili için mevcut yöntemlerin yakın zamanda karşılaştırılması, HPLC’nin hız ve kantitasyon kolaylığı nedenlerinden ötürü diğer tekniklerden üstün olduğu sonucuna varmıştır.
A vitamini ve türevlerinin tespiti en uygun şekilde floresans izlenerek gerçekleştirilir; ancak 313-328 nm’de UV saptaması da mümkündür. Karotenlerin tespiti, 450 nm’de UV tespiti kullanılarak gerçekleştirilebilir.
Suda ve yağda çözünen vitaminler
Yağda çözünen vitaminler özellikleri
Suda çözünen vitaminler
Gıdalarda bulunan yağda çözünen vitaminler
Yağda çözünen vitaminler depolanır mı
Suda ve yağda çözünen vitaminlerin özellikleri
Yağda çözünen maddeler
Yağda çözünen vitaminler nerede depo edilir
D vitaminleri
D vitaminlerinin HPLC analizi özellikle zordur çünkü bunlar yalnızca çok düşük konsantrasyonlarda mevcuttur. Birçok ekstraksiyon yöntemi kullanılmıştır, ancak en yaygın olanı numuneyi sabunlaştırmak ve organik bir faza (genellikle heksan veya dimetil-sülfoksit) ekstrakte etmektir.
Bu çözücü, ters faz sistemi kullanılarak morina karaciğeri yağından D, D ve E vitaminlerinin mükemmel bir şekilde ayrılmasına izin verdiği için, bir mobil dietil eter fazının heksana tercih edilebilir olduğu ileri sürülmüştür.
D ve D vitaminlerinin analizindeki başlıca kirleticiler, bunların ilgili metabolik öncüleri olan 7-dehidrokolesterol ve ergosteroldür; bununla birlikte, hem normal faz hem de ters faz sistemleri tatmin edici ayrımlar sağlayabilir. Bu vitaminlerin tespiti genellikle 254 nm’de UV tespiti kullanılarak gerçekleştirilir.
E vitaminleri
HPLC artık bitki dokusu özlerinden E vitaminlerinin (tokoferoller) analizi için tercih edilen yöntem olarak kabul edilmektedir. Bununla birlikte, E vitaminlerinin ekstraksiyonundaki zorluklar, numuneleri her zaman uygun bir kromatografik tamponda bırakmaz ve sonuç olarak başka analiz yöntemleri de kullanılmıştır.
E vitamini aktivitesi, genellikle tokoferoller ve tokotrienoller olarak sınıflandırılan bir dizi kimyasal türde bulunur. En yaygın formlar a-, fi-, y- ve & tokoferollerdir ve her birinin ayrılması, normal faz veya ters faz kromatografisi kullanılarak gerçekleştirilebilir – E vitamini ve türevlerini içeren doku ekstraktlarının analizi genellikle sabunlaşmayı ve ardından organik çözücülere ekstraksiyonu içerir. .
Yakın tarihli bir rapor, doku ve plazma a-tokoferol seviyelerinin analizi için aseton ekstraksiyonunun ardından ters faz kromatografisinin kullanılmasını önermektedir. Sabit faz, metanol içinde% 2 su mobil fazı ile Lichrosorb RP-18 idi.
Normal fazlı bir Micropak Si-5 desteğini kullanan alternatif bir sistemin, 0.5-1.0 ng kadar düşük bir algılama hassasiyeti ile tokoferollerin doku özütlerinin tekrarlanabilir tahminlerini verdiği de rapor edilmiştir.
A-tokoferolün tespiti en iyi, sırasıyla 295 nm ve 340 nm’lik eksitasyon ve emisyon dalga boylarında flüoresan tespit kullanılarak gerçekleştirilir. 294 nm’de UV tespiti de mümkündür, ancak daha az hassastır.
K vitaminleri
K vitaminlerinin analizi için iki aşamalı bir kromatografik sistemin kapsamlı bir şekilde geliştirildiği bildirilmiştir. Başlangıçtaki normal faz kromatografisini ve ardından ters faz kromatografisini içeren bu yöntem gerekliydi çünkü süt ve plazma ekstrelerinde sadece küçük miktarlarda K vitamini mevcuttu.
Bitki özleri için alternatif metodolojiler bildirilmiştir. Yukarıda açıklanan ikiz kolonlu sistemin kullanımı, rutin hızlı analiz için dezavantajlara sahiptir ve K vitamininin heksana ekstrakte edilebildiği ve daha sonra doğrudan ters faza veya normal faz kromatografik analize tabi tutulabildiği basitleştirilmiş bir sistem önerilmiştir. Bu çalışmada normal fazın, kromatografik profili basitleştirerek ters fazlı kromatografiden üstün olduğu bulunmuştur.
Numuneler, silika sabit bir faza uygulandı ve izokratik koşullar altında heksan içinde% 0.2 asetonitrilden oluşan bir mobil faz ile elüte edildi. K vitamini grubundan bileşiklerin tespiti, 248-254 nm’de UV kullanılarak gerçekleştirilebilir.
Flüoresan veya amperometrik saptama ile birleştirilmiş bir kolon sonrası kolorimetrik indirgeme sistemi kullanılarak plazma özütlerinde saptamanın hassasiyetinin alt nanogram düzeyinde olduğu bildirilmiştir. Floresans tespiti, bildirilen minimum 25 pg seviyesine sahiptir ve normal faz veya ters fazlı HPLC ile kombinasyon halinde kullanılabilir.