Hangi anti-DNA testi seçilmeli?
İdeal tahlil, hastalık aktivitesini güvenilir bir şekilde yansıtmanın yanı sıra, lupus tanısı için yeterince duyarlı ve spesifik olmalıdır. Açıklanan üç testin tümü, aktif hastalığı olan hastalarda >%90 duyarlılıkla birinci kriteri karşılar. Özgüllük açısından, Crithidia ve Farr testleri (özgüllük >%90) ELISA'dan üstündür.
ELISA tahlillerinin, düşük aviditeli antikorları saptama eğilimleri nedeniyle, lupusu olmayan hastaların önemli bir azınlığında yanlış pozitif DNA antikoru sonuçları ürettiği bilinmektedir. Bu dezavantaja rağmen, ELISA tahlilleri, yüksek hassasiyetleri, otomasyon kolaylığı, sonuçları güvenilir bir şekilde nicelleştirme yetenekleri (seri izleme için faydalıdır) ve tahlilde radyoizotop eksikliği nedeniyle klinik uygulamada giderek daha fazla kullanılmaktadır.
Farr testi, hastalık izleme için eşit derecede uygundur ve özellikle böbrekleri içeren hastalık alevlenmelerinin gelişimini öngörmede gerçekten ELISA'dan üstün olabilir.
Yakın zamanda yapılan bir randomize Hollanda çalışmasında, immünosupresif tedavide önleyici artışlar alan anti-dsDNA seviyelerinde %25 artış olan hastalarda, konvansiyonel olarak tedavi edilen kontrol grubuna kıyasla nükslerde önemli bir azalma olmuştur (Bootsma ve ark.).
Lupus hastalarının küçük bir kısmı, DNA antikorlarında eşlik eden bir artış olmaksızın nüks edebilir; benzer şekilde, her üç testte de sürekli olarak yüksek antikor seviyeleri bulunmasına rağmen hastaların az bir kısmı klinik olarak stabil veya asemptomatik olabilir.
Lupus ve Antifosfolipid Sendromu
Fosfolipidlere (APA) karşı antikorlar, tromboz belirteçleri olarak işlev görür ve lupuslu hastaların üçte birinde görülür. 'Antifosfolipid sendromu' (APS) terimi, trombozu ve yüksek fosfolipid antikor seviyeleri olan hastaları tanımlamak için kullanılmıştır. Ağırlıklı olarak venöz trombozla sonuçlanan diğer trombofilik durumların aksine, APS'li hastalarda hem arteriyel hem de venöz damarlarda tromboz gelişebilir.
Klinik belirtiler, hangi organın iskemiye dönüştüğüne bağlıdır. APA, ELISA ile veya fosfo-lipid bağımlı pıhtılaşma tahlillerinin (aktive kısmi tromboplastin zamanı-APTT) uzatılmasıyla saptanabilir.
Asidik bir fosfolipid olan kardiyolipin kullanılarak antijen olarak ELISA ile saptanan APA, enfeksiyon (bakteriyel, viral, protozoal), ilaç tedavisi ve diğer bağ dokusu hastalıkları olan hastalarda birçok yanlış pozitif tanımlandığından, her zaman gerçek bir tromboz belirteci olarak hareket etmeyebilir. Aslında, geçmişteki yanlış pozitif VDRL, VDRL'de bulunan kardiyolipin'e yönelik APA'nın varlığından kaynaklanmaktadır.
Mevcut ELISA testlerinin trombozla ilişkili ve trombozla ilişkili olmayan APA arasında ayrım yapamaması, yüksek APA düzeylerinin klinik önemini yorumlamada zorluklara yol açmıştır.
Antifosfolipid sendromu belirtileri
antifosfolipid sendromu - ekşi
Antifosfolipid sendromu bitkisel tedavisi
Antifosfolipid sendromu gebelik
Sekonder antifosfolipid sendromu
Antifosfolipid sendromu Kadınlar Kulübü
Antifosfolipid sendromu laboratuvar
Antifosfolipid sendromu tanı kriterleri
Bu ayrım önemlidir, çünkü trombozla ilişkili APA'lı hastalar, muhtemelen ömür boyu yoğun, uzun süreli antikoagülan tedaviye ihtiyaç duyarlar. Son kanıtlar, trombozla ilişkili APA'nın, kendi başına fosfolipidlerden ziyade büyük ölçüde 2 glikoprotein I'e (2GPI, fosfolipitleri bağlayan bir serum protein ko-faktörü) yönelik olduğunu göstermektedir.
Mevcut tahlillerde iki 2GPI kaynağı bulunur: ELISA plakalarını bloke etmek için kullanılan insan serumu test numuneleri ve sığır serumu. 2GPI ile immobilize kardiyolipinin etkileşiminin, konformasyonunu değiştirerek immünojenik hale getirdiği düşünülmektedir.
Konvansiyonel ELISA tahlillerinin trombozla ilişkili ve trombozla ilişkili olmayan APA arasında ayrım yapamaması nedeniyle, antijen olarak saflaştırılmış 2GPI kullanan tahlillere büyük ilgi vardır. Varlıkları şu anda antifosfolipid sendromu için tanı kriterlerine dahil edilmemesine rağmen, anti-2GPI antikorları, ELISA ile saptanan geleneksel kardiyolipin antikorlarından daha güçlü tromboz öngörücüleridir.
Fosfolipid bağımlı pıhtılaşma deneylerine müdahale eden APA, bir fosfolipid-protrombin kompleksini tanır ve lupus hastalarında ortaya çıktıklarından dolayı lupus antikoagülanları (LAC) olarak adlandırılır. LAC terimi, kanamadan ziyade in vivo tromboz ile ilişkili olduğu için yanlış bir isimdir.
Normal plazmanın eklenmesiyle düzelmeyen uzamış bir APTT'den LAC'nin varlığından şüphelenilir, bu da bir inhibitörün varlığını düşündürür. LAC antikorlarının gösterilmesi, pıhtılaşmanın işlevsel düzensizliğini gösterdiğinden, bu antikorlar, ELISA tarafından gösterilen APA'ya göre tromboz ile daha yakından ilişkilidir.
Lupuslu hastaların çoğunda kardiyolipin antikorlarının yanı sıra LAC (%70) olacaktır, ancak hastaların az bir kısmında kardiyolipin antikorları veya LAC (her kategoride %15) olacaktır.
Nöropsikiyatrik sistemik lupus eritematozus (NPSLE)
Laboratuvar araştırmasının rolü
SLE'de nörolojik tutulum, hastalıklarının bir noktasında hastaların üçte ikisini etkileyen önemli bir sorundur. Bu tür hastaların yaklaşık %20'si bunu aktif sistemik hastalık zemininde yaparken, vakaların çoğunda sistemik hastalık sessizdir veya sadece hafif derecede aktiftir.
SLE ve nörolojik özellikleri olan bir hastayla karşı karşıya kalan hekim, doğrudan lupus (birincil) nedeniyle nörolojik hastalık, ikincil neden olarak fırsatçı enfeksiyon ve steroid psikozu arasında önemli bir ayrım yapmalıdır, çünkü çoğu hasta o sırada immünosupresif tedavide olacaktır. sunumun.
Altta yatan çok sayıda patojenik mekanizmayı yansıtan çok çeşitli klinik sunumlar görülmektedir. Çeşitli klinik sunumları açıklamak için en az üç hipotez öne sürülmüştür: anti-nöronal antikorlar, fosfolipid antikorlarla ilişkili tromboz ve sitokin kaynaklı hastalıktır.
Ne yazık ki, şu anda mevcut olan SLE laboratuvar belirteçlerinin hiçbiri birincil nörolojik lupus tanısı için yeterince spesifik değildir. Birkaç çalışma, serum veya beyin omurilik sıvısındaki (BOS) anti-DNA ve kompleman (C3, C4) düzeylerindeki anormalliklerin, SLE'de nörolojik ve nörolojik olmayan hastalık arasında ayrım yapmadığını göstermiştir.
Nöronlara (beyin dokusu ile çapraz reaksiyona giren lenfositotoksik antikorlar ve doğrudan nöronal antijenlere karşı hedeflenen antikorlar) karşı yönlendirilen antikorlar için başlangıçtaki istek, nörolojik tutulum olmayan lupus hastalarında varlıklarını gösteren çalışmalarla, nörolojik lupus için spesifik belirteçler olarak azaltılmıştır.
Aynı şekilde, ribozomal P proteinlerine karşı yönlendirilen antikorların, lupus psikozunun spesifik belirteçleri olduğu yönündeki son iddialar, psikozu olmayan SLE hastalarının %50'ye varan kısmında gösterilerek çürütülmüştür.
NPSLE gibi görünen enfeksiyon vakalarının teşhis edilebilmesi için tüm nöropsikiyatrik SLE hastalarında BOS muayenesi zorunludur. SLE'de nörolojik tutulumla ilgili yakın tarihli bir prospektif çalışmada, vakaların yaklaşık %50'sinde altta yatan neden enfeksiyon (kriptokok, tüberküloz ve piyojenik menenjit) olmuştur.
Yalnızca BOS'ta oligoklonal bantların varlığı birincil NPSLE'yi destekler ancak enfeksiyonla da ortaya çıkabilir. Spesifik bir laboratuvar belirtecinin yokluğunda, NPSLE tanısı büyük ölçüde geleneksel klinik sezgiye bağlı kalır.
Bioassay hassas bir tahlil sistemi sağlar, ancak dokuların her spesifik prostaglandin veya lökotrien için seçilmesi gerekir. Bu ön koşul her zaman mümkün olmayabilir, ancak özgüllüğün kurulabildiği durumlarda bile tahlil zaman alıcıdır.
Gaz kromatografisi ve ardından kütle spektrometrisi çok hassas bir tekniktir ve çok doğru yapısal bilgiler verebilir, ancak maalesef numune hazırlama son derece zaman alıcıdır ve açıkça gereken ekipman çok pahalıdır.
Son yıllarda RIA’daki gelişmeler, tahlil tekniklerinin hem duyarlılığında hem de özgüllüğünde büyük gelişmeler sağlamıştır ve bu muhtemelen bu alanda en sık kullanılan tahlil yöntemidir; bununla birlikte, belirli bir RIA her seferinde yalnızca bir bileşiğin miktarını belirlemek için kullanılabilir, böylece tam bir prostaglandin ve lökotrien profili gerekiyorsa, teknik aşırı derecede zaman alıcıdır.
Bu tekniklerin dezavantajlarından dolayı, TLC ve HPLC metodolojileri geliştirilmiştir ve son araştırmalar, TLC’ye göre sayısız avantajı nedeniyle HPLC’ye odaklanma eğilimindedir. Kantitatif tespitler için RIA veya yapısal analizler için kütle spektrometresi kullanılmadan önce HPLC’nin sıklıkla numune hazırlama için kullanıldığı da vurgulanmalıdır.
Prostaglandinlerin HPLC’si
Normal faz, ters faz ve gümüş iyon yüklü katyon değişim kromatografisi dahil olmak üzere prostaglandinlerin HPLC’si için çeşitli kromatografik modlar kullanılmıştır.
Sonraki saptamayı kolaylaştırmak için önceden türetme prosedürleri ile ve olmadan, normal faz durağan fazları kullanan bir dizi HPLC ayrımı rapor edilmiştir.
Kullanılan en popüler sabit faz, hem izokratik hem de gradyan modları olan bir dizi farklı mobil faz ile kombinasyon halinde silikadır. Örneğin, kaydedilen en eski prostaglandin ayrımlarından biri, 15-epi-PGF2’yi PGF’den ayırmak için bir mobil etil asetat-asetik asit fazı kullandı.
Diğer çalışanlar, PGB’yi çözmek için mobil bir kloroform-etil asetat-formik asit fazı kullandılar. Prostaglandinlerin 4-bromo-7-metoksikumarin ile önceden türetilmesinin, bir mobil faz kullanılarak PGF, 6-keto-PGF1, tromboksan ve (TxB,), PGE ve PGD’nin çözünmesine ve miktarının belirlenmesine izin verdiği bildirilmiştir.
Normal bir faz ayrımında üretilen tipik bir kromatogram, gösterilmektedir. kloroformun bir başlangıç mobil fazı ve kloroform-metanol-asetik asidin bir son mobil fazı ile bir gradyan ayırmanın kullanılmıştır.
Bu kromatogram, her ikisi de önemli prostanoid türevleri olan, ko-kromatografinin genellikle özellikle TxB ve 6-keto-PGF ile bir problem olduğu prostaglandinlerin normal faz HPLC’si ile ilişkili ana sınırlamaları gösterir. Bu seçicilik problemlerinden dolayı normal faz kromatografisinin yerini büyük ölçüde ters faz modu almıştır.
Prostaglandin hormonu
Prostaglandin ilaçlar
Kadınlarda prostaglandin
Prostaglandin içeren besinler
Prostaglandin hangi besinlerde bulunur
Kadınlarda prostaglandin nedir
Prostaglandin E2 nedir
Prostaglandin yüksekliği
Ters faz, prostaglandinlerin ayrılması için kullanılan en popüler kromatografik moddur. En yaygın kullanılan sabit ve hareketli fazlar, asetonitrilin mobil fazı ve düşük konsantrasyonlarda asetik veya fosforik asit eklenmesiyle pH 2-3’e ayarlanmış su ile kombinasyon halinde ODS’dir.
Ters faz modunda araşidonik asitten türetilen metabolitlerin tam ayrılmasını sağlamak için, asetonitril konsantrasyonunun% 20-30’dan% 95-100’e yükseltildiği bir gradyan sistemi kullanmak gerekir.
Genel olarak, asetonitril, organik modifiye edici olarak kullanılır, çünkü metanole göre birkaç farklı avantaj sağlar; ilk olarak, asetonitril, prostaglandinlerin spektrofotometrik tespiti için yaygın olarak kullanılan bir dalga boyu olan 192 nm’de nispeten yüksek bir optik şeffaflığa sahipken, metanol yaklaşık 210 nm’lik bir optik kesme dalga boyuna sahiptir.
İkinci olarak, fosfat tuzları, asetonitril içinde metanolden daha fazla çözünürdür, böylece mobil fazda daha yüksek tuz konsantrasyonlarının kullanımına izin verir. Son olarak, prostasiklin, metanol varlığında izomer oluşumuna girme eğilimindedir.
Ana prostaglandin türlerinin izokratik ters faz ayrılmasına bir örnek, Şekil 11.5.2’de gösterilmektedir. TxB ve PGF’nin taban çizgisi ayrımının sağlanmadığı ve PGE ve PGD’nin çözülmediği açıktır. Bununla birlikte, hafif bir asetonitril gradyanı eklenerek, bir taban çizgisi ayrımı elde edilebilir.
Gradyan koşulları altında bile, TxB’nin pik genişlemesinin, genellikle ayırmalarda kullanılan asidik mobil faz koşulları altında ODS durağan fazlarında meydana geldiği fark edilir. TxB’nin geniş asimetrik zirvelerinin nedeninin, asidik pH’ta TxB’nin yapısındaki açık ve kapalı bir yarı asetal halka arasında bir dengenin varlığı olduğu düşünülmektedir.
İki izomerik form arasındaki denge, mobil fazın nötr bir pH değerine değiştirilmesiyle kaydırılabilir, ancak bu, silika sabit fazlarda pik tortulaşmasına neden olabilir.
Bu soruna bir çözüm, asetik asit ile pH 7.5’e ayarlanmış damıtılmış su içinde% 218 ila% 100 asetonitril artı% 1.2 (v / v) trietilaminden oluşan bir mobil faz gradyanı ile birlikte alternatif bir silika bazlı olmayan sabit faz kullanmaktır. Bu koşullar kullanılarak, 6-keto-PGF ,,, PGF, ve PGE’den iyi bir ayrılma ile birlikte TxB’nin elüsyonu için keskin bir tepe elde edildi.
Prostaglandinlerin ayrılmasını arttırmak için gümüş iyonlarının kullanımı ilk olarak TLC’de açıklanmıştır; burada gümüş nitrat ile emprenye edilmiş silika 1, 2 ve 3 serilerinin prostaglandinlerini çözmek için kullanılmıştır. Prostaglandinlerin ayrılması için Argantasyon HPLC’si ilk olarak 1976’da PGE örneklerinde 5-trun-PGF2 izlerinin belirlenmesi için açıklanmıştır.
Tartışmada, fenilsülfonik asit türevlerini oluşturmak için muamele edilmiş HPLC silika katyon değişim sabit fazları, 1 M gümüş nitrat ile yıkanarak normal Naf formlarından gerekli Ag ‘formuna dönüştürülür.
Argentasyon kromatografisinde tutulmanın iki ayrı ancak eşzamanlı mekanizma ile meydana geldiği düşünülmektedir: birincisi, sabit fazlı gümüş iyonlarının numune moleküllerinin olefinik çift bağları ile etkileşimi yoluyla, böylece alıkoymayı numunenin doymamışlık derecesine bağımlı hale getirerek ve ikinci olarak durağan fazın polar gruplarının örnek molekül üzerindeki polar gruplarla etkileşimi söz konusudur.
Argantasyon HPLC’de kullanılan en popüler mobil fazlar, kromatografik tutmayı en iyi şekilde ayarlamak için değişen oranlarda asetonitril ve / veya metanol içeren kloroform (% 80-90) ve asetik asit (% 0.5) karışımlarıdır.
Metanolün hareketli faza eklenmesinin, durağan fazda polar gruplarla etkileşimleri azalttığı, asetonitrilin ise durağan faza bağlı gümüş iyonları ile doğrudan etkileşim yoluyla tutulmayı azalttığı ve böylece olefinik doymamış bağlarla etkileşimleri azalttığı düşünülmektedir.