G6PD Eksikliği (Glukoz 6-fosfat dehidrojenaz)
Kırmızı hücre, glikoz metabolizmasının pentoz fosfat şant yolundaki ilk enzimin eksikliğinden dolayı azaltılmış bir indirgeyici enerjiye sahiptir. Genellikle cinsiyete bağlı çekinik bir durumdur: hastalık erkeklerde X kromozomunda bir etkilenmiş genle ifade edilir, ancak dişilerin etkilenmiş iki gene ihtiyacı vardır.
Bir tanesi etkilenen dişiler, Lyon hipotezine göre, hangi hücrelerde hangi X kromozomunun inaktive edildiğine bağlı olarak değişken ekspresyon gösterecektir. Çoğunlukla siyahi ve Akdenizli popülasyonlarda görülür ve dünya nüfusunun %3'ünü etkiler. G6PD aktivitesi retikülositlerde mevcuttur ancak bu bireylerde hızlı ve erken düşer.
Bu nedenle oksidan kimyasallara ve ilaçlara (örn. sülfonamid antibiyotikler) maruz kalındığında kırmızı hücre bütünlüğü azalır. Heinz cisimleri özel olarak hazırlanmış kan filmlerinde görülür. Teşhis, G6PD testiyle yapılır, ancak yalnızca kararlı durumda (hemolitik krizlerden sonra olduğu gibi aşırı sayıda retikülosit olduğunda değil). Bazı bölümlere yiyecekler (klasik olarak bakla - 'favizm') ve ilaçlar neden olur.
6GPD eksikliği için tarama
Pentoz fosfat yolu içinde NADP, G6PD tarafından NADPH'ye indirgenir. Bu ürün ultraviyole ışık altında floresan verir. Bu, floresan nokta testinin temelini oluşturur.
Tam kan aşağıdakilerle karıştırılır:
Glikoz 6-fosfat.
NADP.
Parçalayıcı ajan (genellikle saponin)
Tampon
Daha sonra filtre kağıdına lekelenmeden önce 5-10 dakika inkübe edilir, kurutulur ve uzun dalga UV ışığı altında incelenir. Normal numuneler parlak bir şekilde flüoresans yapacak, eksik numuneler flüoresan etmeyecek veya sadece zayıf olacaktır. Herhangi bir anormal tarama testi, bir G6PD testi ile onaylanmalıdır; burada G6PD tarafından NADPH üretimi, optik yoğunlukta zaman içinde bir değişiklik ile spektrometrik olarak ölçülür.
Enzim eksikliği olanlar ne yememeli
G6PD eksikliği diyet
G6PD eksikliği askerlik
G6PD eksikliği anestezi
glukoz 6-fosfat dehidrogenaz nedir
Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
bebeklerde glukoz-6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
Enzim eksikliği öldürürmü
Piruvat kinaz eksikliği
Piruvat kinaz eksikliği "otozomal resesif" bir durumdur (her iki genin anormal olması, bir kişinin durumu kalıtım yoluyla alması) ve başka bir enzim sorunudur - daha nadir görülen G6PD dışı hastalıkların en yaygınıdır. Hücreler deforme olur ve savunmasız hale gelir. Kan filmi poikilositleri (anormal şekilli kırmızı hücreler) gösterir ve bunlar bir ilaç uyarısı olmadan kendiliğinden hemolizlenir. Transfüzyon gerekebilir.
Piruvat kinaz eksikliği taraması
Piruvat kinaz, reaksiyonun katalizörüdür: ADP + fosfoenolpiruvat ! ATP + piruvat
Bu reaksiyonun ürünü olan piruvat daha sonra laktat dehidrojenaz (LDH) tarafından katalize edilen aşağıdaki reaksiyona ilerler:
Piruvat ş NADH ! laktat + NAD
NADH, uzun dalga UV ışığı altında floresan verirken NAD olmaz. Bu nedenle, tam kan ADP, fosfoenolpiruvat ve NADH ile inkübe edildiğinde, normal numunelerde NADH, sonuçta bir floresan kaybıyla NAD'ye oksitlenir. Eksik numuneler parlak bir şekilde floresan verecektir.
Anormal bir PK tarama testi, NADH'nin NAD'ye oksidasyonunun zaman içinde fotometrik olarak absorbanstaki bir değişiklikle ölçüldüğü, enzimin tam bir tahlili ile teyit edilmelidir.
Bağışıklık Hemolizleri
Çeşitli koşullar (Tablo 34.4'te listelenenler gibi), daha kısa bir ömre sahip olan antikor kaplı kırmızı hücrelerle sonuçlanır. İmmün hemoliz, laboratuvardaki termal aktivite (ve aglütinasyon) aralığına bağlı olarak laboratuvarda 'sıcak' ve 'soğuk' tiplere ayrılır, klasik olarak ılıkta 37 C ve soğukta 4 C, ancak bazen küçük örtüşmedir.
Pozitif olacak (DCT, Şekil 34.4) geniş bir tarama doğrudan Coombs (anti-globulin) testinin yanı sıra, sıcak immün hemolizde daha spesifik bir profil (IgG, kompleman) veren reaktifler kullanılabilir. Soğuk immün hemoliz şüphesinde, kan örneğini serum ayrılana kadar sıcak tutmak, ardından yetişkin (antijen içeren) ve göbek bağı (antijen taşıyan) hücrelere karşı test etmek olağandır.
DCT genellikle sadece kompleman reaktifi ile pozitiftir ve kan filmi, ısıtılmadıkça aglütinasyon gösterir. Sıcak ve soğuk koşullar arasındaki ayrım tedavi için önemlidir. Sıcak immün hemolizlerde, antikor üretiminin etkisini durdurmayı veya buna müdahale etmeyi amaçlayan steroidler ve diğer immünosupresif tedaviler genellikle yararlıdır.
Splenektomi sıklıkla işe yarar. Bununla birlikte, soğuk immün hemolizlerde sitotoksik kemoterapi (bazen) ve hastayı sıcak tutmak (neredeyse her zaman) yardımcı olur, ancak steroidler veya splenektomi değil. Otoaglütinasyon çapraz eşleşmeyi engellediğinden, immün hemolizde genellikle transfüzyondan kaçınılır.
Hastanın klinik durumu zaman zaman transfüzyon gerektirir ve kesinlikle kırmızı hücre eksikliği nedeniyle yenik düşmesine izin verilmemelidir, bu durumda 'en az uyumsuz' kan verilir.
Yenidoğanın hemolitik hastalığı (HDN)
Rh+ fetüsündeki Rh-pozitif hücreler, Rh annenin dolaşımına geçer, örn. hamilelik sırasında kanama veya düşük yapma tehdidi. Bu, annenin anti-D (anti-rhesus) antikorları üretmesine neden olur ve bu antikorlar daha sonra aynı veya sonraki gebeliklerde fetüse geçer ve kırmızı hücreleri kaplar ve bebek Rh+ ise hemolize neden olur.
ABO grubu uyumsuzlukları benzer sorunlara neden olabilir, ancak daha az önemdedir. Doğumdan sonra yüksek konjuge olmayan bilirubin seviyeleri (hemolize bağlı olarak) kan-beyin bariyerini geçecek ve beyin hasarıyla birlikte 'kernikterus'a neden olacaktır. Değişim transfüzyonunu içerebilen tedavi bunu önleyecektir.
Kan filminde sferositler görülebilir ve DCT pozitif olacaktır. Ağır vakalarda bebek hidropik olacaktır (anemi/sarılık/ödemle şişmiş). Potansiyel feto-maternal kanama zamanlarında, annenin antikor üretimi, Rh+ hücrelerini temizlemek için intramüsküler enjeksiyon yoluyla anti-D'nin pasif olarak uygulanmasıyla engellenebilir, bu da annenin kendi yanıtını üretmesini engelleyecektir.
Anti-D'nin bu şekilde profilaktik kullanımı, modern bilimsel tıbbın başarı öykülerinden biridir, bu nedenle etkilenen bebekler artık nadirdir. Bunlar intrauterin transfüzyon (zor bir manevra!) veya yenidoğanın değişim transfüzyonu ile erken doğum indüksiyonu ile tedavi edilebilirler.
Uyumsuz Transfüzyon
Uyumsuz transfüzyon, immün aracılı bir hemoliz oluşturur. ABO uyumsuzluğunda (çok nadir görülen bir durumdur, ümit edilir) hastanın doğal olarak oluşan anti-A veya anti-B antikorları (veya her ikisi) nedeniyle donör hücreler intravasküler olarak yok edilir.
Hasta daha önce tarif edildiği gibi çok hızlı bir şekilde hastalanabilir ve hemoglobinüri geliştirecektir. Transfüzyon durdurulmazsa veya hasta anestezi altındaysa, durum ölümcül olabilir.
Diğer antijenlere bağlı uyumsuzluk reaksiyonları genellikle anemi ve sarılık ile ekstravasküler hemolize neden olur. İyileşme olağandır ancak alyuvar antijenlerine karşı allo-antikorlar nedeniyle bundan sonra çapraz eşleşme sorunları olacaktır.
İyi bir hazırlayıcı ayırmanın pratik geliştirilmesinde, iyi araştırılmış bir analitik ayırma ile başlamak iyi bir fikirdir. Hazırlayıcı bir kolona transfer daha sonra, çözücü kuvvetinin 10’a kadar kapasite faktörlerine (k ‘) izin verecek şekilde azaltılmasını içeren ve böylece kolon boyunca çözünen maddenin konsantrasyonları azalacağından numune yüklemesini iyileştiren gerçekleşebilir.
Bu aynı zamanda çözünürlüğü artırma etkisine de sahiptir. Gradyan elüsyonunun eklenmesi, yüksek kapasite faktörlerine sahip bileşenlerin kurtarılmasını kolaylaştıracaktır. İyi çözümlenmiş piklere sahip ayırmalar için çok daha büyük numuneler uygulanabildiğinden, çözücü sisteminin modifikasyonu yoluyla seçicilikteki (a) iyileştirmelerin daha fazla araştırılması değerli olabilir.
Daha sonra, üretim oranını maksimize etmek için numune yükleme ve mobil faz hızı arasında bir uzlaşma bulunabilir. Numune yüklemesinin iki şekilde artırılabileceği unutulmamalıdır: (a) konsantrasyonu artırarak ve (b) hacmi artırarak; ikincisi tercih edilebilir olarak kabul edilir.
Üretim hızı daha sonra yalnızca kolon boyutlarının artırılmasıyla daha da artırılabilir. Bu amaçla daha geniş kolonlar tavsiye edilir ve üretim oranı kesit alanı ile doğru orantılıdır. Üretim oranını optimize etmek, sistemi sadece zaman açısından değil, aynı zamanda solvent tüketimi ve eluentteki numunenin konsantrasyonu açısından da optimize eder.
Hazırlayıcı sıvı kromatografisinin faydalı bir incelemesi literatürde bulunabilir.
Laboratuvar Isıtıcı
Laboratuvar Vakum Pompası
Laboratuvarda kullanılan Isıtıcılar
Tıbbi laboratuvar malzemeleri
Laboratuvar Cihazları
Vakum Kompresörü
Laboratuvar Malzemeleri online
Laboratuvar soğutucu
Enstrümantasyon
HPLC ile ilgilenen araştırmacıların sayısındaki hızlı artışa, HPLC ekipmanı üreticilerinin sayısında da benzer bir artış eşlik etmiştir. Sonuç olarak, HPLC alanında yeni olanlar genellikle ekipmanda bulunan bilgiler karşısında şaşkına dönerler.
Bu bölüm, (a) yatırımlarından belki de en iyi şekilde yararlanamayan kullanıcıların sistemlerini iyileştirmelerini ve (6) HPLC ekipmanına yatırım yapmayı düşünenler için bir rehberdir.
Önemli bir husus maliyettir. Şematik olarak gösterilen basit izokratik sistem f6.000 – 10.000 € civarında mal olabilirken, tam entegre bir mikroişlemci kontrollü gradyan sistemi için maliyet S35, OOO’ya kadar herhangi bir şey olabilir.
Açıkçası bu, özellikle hibe destekli araştırma grupları için önemli bir yatırımdır ve ilk ekipman seçiminin doğru olması önemlidir. Örneğin, daha sonra diğer bileşenlerin eklenebileceği bir sistem seçmek akıllıca olabilir (modüler tasarım).
Bu bölüm boyunca, çeşitli üreticilerin ekipmanlarından bahsedilmiştir. Bu, yazarların aşina olduğu konuları yansıtır ve belirli bir öneri olarak düşünülmemelidir.
Sistem Tasarımı
Akış diyagramı, basınç monitörü haricinde düşük basınçlı sıvı kromatografik sistemleri kullanan herkese aşina olacaktır; ancak, her kullanıcının kendine özgü gereksinimleri olacaktır.
Örneğin, üzerinde çok sayıda görevin gerçekleştirilebileceği (böylece ekipmanı çeşitli sulu ve susuz çözücülere maruz bırakan) genel bir çok amaçlı araç olarak bir makine isteyen bir kullanıcı, muhtemelen aynı derecede sofisti gerektirmeyecektir. Bu özel bir alet gerektiren biri olarak katyon, örn. kalite kontrol amaçlıdır.
Detaylandırılan bileşenlerin her biri. bir sistemin nasıl tasarlanacağına dair bir anlayış oluşturmaya çalışmak için düşünülecektir. HPLC ekipmanının geliştirilmesinin ayrıntılı bir açıklaması McNair’de bulunabilir.
Rezervuar
Tüm borular ve bağlantı parçaları kimyasal olarak korozyona karşı inert olmalıdır ve bu nedenle çoğu ya 316 kalite paslanmaz çelikten ya da bir tür PTFE borudan yapılmıştır.
Mikro delikli boru kullanılırken ne çözücüde ne de numune içinde partikülat materyalin bulunmaması büyük önem taşımaktadır; Her ikisinin de 0.45 pm filtreden (örneğin, Millipore) filtrelenmesi rutin bir uygulama olmalıdır ve 5-50 p1 kadar düşük numune hacimlerini işleyebilen filtreler mevcuttur.
Ayrıca ek bir önlem olarak rezervuara bir tür sıralı filtre yerleştirmek de yaygın bir uygulamadır. Solvent filtrasyonu ve gazdan arındırmanın diğer ayrıntıları ilerleyen bölümlerde tartışılmaktadır.
Pompalar
Sıvı bir kromatografik sistemin (kolon dışında) en kritik özelliği pompadır. Solventi uzun ve kısa dönemler boyunca sabit ve hassas bir akış hızında teslim etme yeteneği, son on yıldır üreticilerin hedefi olmuştur. Birden fazla yaklaşım benimsenmiştir.
İlk tasarımlardan biri, sabit basınçlı şırınga pompası olarak bilinen gaz basıncı ile çalışan şırınga tipi çözücü dağıtım sistemiydi. Bu tasarımın ana dezavantajı, dağıtımın sıcaklık dalgalanmaları veya çözücü viskozite değişikliklerinden kaynaklanan basınç değişikliklerine duyarlı olmasıydı.
Şırınga pompasının başka bir versiyonu, basınç değişikliğine duyarlı olmayan mekanik olarak çalıştırılan bir piston içeriyordu. Şırınga tip pompalarının ikinci dezavantajı, şırınga bölmesi içinde çözücü değişimi sırasında kolayca değiştirilemeyen büyük hacimde çözücünün bulunması gerekliliğiydi; dahası, dalma piston bir sonraki dağıtım vuruşunu başlatmak için bölmenin uzunluğunu süpürmek zorunda kaldı; bu ciddi temel sorunlara neden olabilir. (180 ° faz dışı çalışan ikiz başlı şırınga pompalarının kullanımı, bu ikinci sorunun üstesinden gelmek için Pharmacia tarafından sunulan FPLC (hızlı protein sıvı kromatografisisistemine dahil edilmiştir.)
Bununla birlikte, genel olarak, şırınga pompaları ve gaz deplasman pompaları, büyük ölçüde pistonlu pompaların yerini almıştır. Her bir pompa tipinin özellikleri başka bir yerde tartışılmıştır.
En yaygın pistonlu pompa türleri, yönü çek valfler tarafından kontrol edilen bir sıvı hacmini değiştirmek için bir kam aracılığıyla bir cam piston çalıştırır. Tasarımın basitliği ve performansın güvenilirliği, diğer tasarımlar pahasına bu tip pompanın performansındaki iyileştirmelere önemli ölçüde çaba harcanmasına yol açmıştır.
Bu özel tasarımdaki en büyük hata, piston pompa odasını tararken, eşit olmayan çözücü akışına neden olabilecek bir çözücü darbesinin iletilmesi ve bir tür nemlendirme de gerekmesidir.
Sadece bir uzunlukta yassılaştırılmış borudan oluşan hidro-pnömatik sönümleyicilerin dahil edilmesi, pompa ile kolon arasında istenmeyen bir ekstra ölü hacim oluşturur; ancak yine de bazı pompa tasarımlarına da dahil edilmektedirler.
Pistona hızlı bir yeniden doldurma döngüsünün eklenmesi titreşimi önemli ölçüde azaltır ve bir sönümleme cihazı ile birlikte nispeten düzgün çözücü dağıtımı da sağlar.