Artefakt, bir numunenin fiziksel olarak degradasyonundan veya örnekleme, nakliye veya smear hazırlama sırasında ortaya çıkan bir sitopreparasyondaki yapay bir ürün veya morfolojik değişikliktir. Kirleticiler, bu işlemler sırasında ortaya çıkan "yabancı cisimler" dir.
Bunların önemi, esas olarak mikroskobik görünümlerin doğru yorumlanmasında zorluklara neden olabilmelerinden kaynaklanmaktadır. Bunlar, bir endojen kaynaktan ortaya çıkan içsel olarak sınıflandırılabilir, ör. sebze veya et lifleri ve kolesterol kristalleri veya harici, ör. cerrahi eldivenlerden leke birikintileri ve talk veya nişasta granülleri.
Zayıf fiksasyon, özellikle müteakip alkolle fikse edilmiş Papanicolaou boyalı preparasyonların ilk hava kurutması, ksilen artefaktı ve hava kabarcıklarının tümü tipik görünümler verir. Organik olmayan elementler, ör. nadiren asbest liflerine rastlanır.
Taşıma, fiksasyon veya boyama prosedürleri sırasında hücresel materyalin (çapraz kontaminasyon, 'taşıma' veya 'yüzdürme') bir örnekten diğerine aktarılması, potansiyel olarak önemli bir malignite yanlış pozitif teşhisi kaynağı oluşturur ve bundan kaçınılmalıdır. maliyetler. Genellikle titiz teknik ve iyi laboratuvar hijyeni ile önlenebilir.
Sahte çevresel kirlilik genellikle su kaynaklı veya havadan kaynaklanır ve biyolojik veya biyolojik olmayan nitelikte olabilir.
Sitolojinin Doğruluğu ve Sınırlamaları
Tanısal sitolojinin çeşitli durumlarda güvenilirliği ve doğruluğunun bir miktar ölçüsü karşılaştırma için kullanışlıdır ve genellikle istatistiksel olarak ifade edilir. Duyarlılık (gerçek pozitif oran), bir testin, söz konusu hastalık sürecine sahip hastaları ne kadar başarılı şekilde tespit ettiğinin bir ölçüsüdür.
Özgüllük (gerçek negatif oran), bir testin hastalığı olmayan bireyleri ne kadar iyi dışladığını gösterir. Pozitif prediktif değer ve negatif prediktif değer, testin sırasıyla hastalığın varlığını veya yokluğunu ne kadar doğru bir şekilde belirlediğine dair bir gösterge verir. Yanlış negatif sonuç, testin daha sonra kanıtlanmış hastalığı tespit edemediği durumdur.
Bu, tarama hatalarından veya yorumlamadaki zorluklardan kaynaklanıyor olabilir. Gerçek bir yanlış negatif, materyalin geriye dönük olarak gözden geçirilmesinin numunenin yeterliliğini doğrulaması ve gerçek bir negatif sonucu doğrulamasıdır. Bunun olası açıklamaları lezyonel örnekleme yerine perilezyonel örneklemeyi veya test prosedürünün gerçekleştirilmesini takiben hastalığın başlangıcını (aralık hastalığı) içerir.
Yanlış negatiflerin sayısı arttıkça bir testin duyarlılığı azalır. Yanlış pozitif sonuç, testin pozitif olarak bildirildiği ancak hastalığın daha sonra gösterilemediği durumdur. Bu, yorumlamadaki güçlüklerden veya belirli koşulların görünümlerinin birbirine çok benzediği durumlarda ortaya çıkabilir.
Yanlış pozitiflerin sayısı arttıkça testin özgüllüğü azalır. Bir testin etkinliği, tedavi alması gereken hastaları ve tedaviye gerek duymayanları ne kadar doğru sınıflandırdığının bir ölçüsüdür.
Belirli bir test için mutlak istatistiksel değerler, yetersiz veya yetersiz örneklerin dahil edilmesi veya hariç tutulmasıyla değiştirilebilir. Bunların dahil edilmesi, testin klinik etkililiğinin genel bir göstergesini verirken, bunların hariç tutulması laboratuvar performansını daha doğru bir şekilde yansıtır.
Sitopatoloji Nedir
Patoloji materyalleri patoloji laboratuvarına gönderilmeden önce hangi madde içine konulur
Sitolojik örnekler nelerdir
Patoloji laboratuvarına gelen materyaller
Sitolojik materyallerin fiksasyonu
Sitolojik materyaller nelerdir
Cerrahi patoloji
Patoloji Türleri
Jinekolojik Sitopatoloji ve Servikal Tarama
Kadın genital sisteminden sitoloji örnekleri, büyük ölçüde servikal taramanın bir sonucu olarak, çoğu teşhis laboratuvarının rutin iş hacminin büyük bir bölümünü oluşturur. Servikal smear ("Pap") testinin temel amacı, asemptomatik kadınlarda skuamöz hücreli karsinom ve öncüllerinin saptanmasıdır.
Aynı zamanda jinekolojik semptomları olan kadınların araştırılmasında ve tedaviyi takiben izleme sürecinin bir parçası olarak kullanılır. İkincil önemi, servikste veya diğer jinekolojik bölgelerde glandüler lezyonların saptanması, çeşitli enflamatuar ve enfektif durumların tanınması ve hormonal durumun değerlendirilmesidir.
Servikal taramanın, randomize kontrollü çalışmalarla olmasa da, birçok ülkede servikal karsinomun mortalite ve morbiditesini azaltmada etkili olduğu gösterilmiştir.
İngiltere'de 1964'ten beri bir servikal tarama programı uygulanmaktadır. NHS Servikal Tarama Programı (NHSCSP) himayesinde, ulusal bir koordinasyon ağının kurulması ile 1988'de popülasyonun sistematik çağrısı ve geri çağırılması başlatılmıştır.
Bu, anormalliklerin tek tip sınıflandırmasını, terminolojinin standardizasyonunu, anormal yaymaların takibini, kalite kontrol mekanizmalarının uygulanmasını teşvik eder, programın etkililiğini multidisipliner denetim yoluyla değerlendirir ve sağlık profesyonellerinin eğitimini izler.
Tarama sürecinin tüm yönleri en uygun şekilde gerçekleştirildiğinde, test, invaziv karsinom için daha az, skuamöz hücreli karsinomun öncüllerinin saptanması için çok hassas bir yöntemdir. Bununla birlikte, bir tarama testi olarak, düşük ancak önemli bir tanısal hata oranına sahip olduğu unutulmamalıdır. Servikal karsinomun yok edilmesinin nihai hedefi henüz bu yolla gerçekleştirilmemiştir.
Servikal smearın amacı, neoplastik değişim açısından en büyük risk altında olan bölge olan skuamo-kolumnar bileşkeyi çevreleyen servikal transformasyon bölgesini temsili olarak örneklemektir.
Smearın hücreselliği veya hücre içeriği ne olursa olsun, serviksi görselleştirmek ve tüm çevresinin örneklendiğinden emin olmak nihayetinde smear alan kişinin sorumluluğundadır.
Olası dönüşüm bölgesi örneklemesinin göstergeleri arasında olgunlaşmamış metaplastik skuamöz hücreler ve / veya mukuslu endoservikal glandüler epitel yer alır. Atrofik yaymalarda dönüşüm bölgesi örneklemesinin güvenilir göstergeleri yoktur.
Normal Servikal Smear
Yüzeysel, orta ve parabazal skuamöz hücrelerin sitomorfolojisi büyük ölçüde olgun tabakalı skuamöz epitelin histolojik yapısını özetlemektedir. Mukozal kalınlık ve glikojen içeriği hormonal aktiviteye bağlıdır.
Yüzeysel hücreler genellikle doğal olarak pul pul dökülür ve normalde keratinizasyon olmaz. Tutarsız olma eğilimindedirler ve bireysel olarak atılırlar. Endoservikal glandüler hücreler, korunmalarına ve yönelimlerine bağlı olarak görünümde geniş bir varyasyon gösterir. Kohezyonu koruma eğilimindedirler ve diğer glandüler bölgelere kıyasla sito-mimari modeller gösterebilirler.
Subkolumnar yedek hücreler genellikle çıplak, izomorfik çekirdekler olarak bulunur. Metaplastik skuamöz hücreler, üreme yıllarındaki smearın normal bir bileşenidir. Olgunlaşmamış olsalar da kendiliğinden pul pul dökülmezler ve aşınmayla çıkarıldıklarında sıklıkla sitoplazmik çıkıntı ("örümcek hücreleri") sergilerler.
Tamamen olgunlaştıktan sonra, orijinal ektoserviksin skuamöz hücrelerinden ayırt edilemezler. Menstrüel akışın başlangıcından adet döngüsünün 12. gününe kadar endometrial stromal hücreler, glandüler hücreler ve histiyositler ('çıkış') gözlemlenebilir.
Bu aralığın dışında anormal kabul edilirler ve bu tür hipereksfoliasyon, polip, hiperplazi ve neoplaziye ek olarak adet düzensizlikleri ve rahim içi kontraseptif cihazlardan kaynaklanabilir. Polimorfonükleer lökositler, en belirgin şekilde menstrüasyon çevresinde değişmez bir şekilde mevcuttur.
Lenfositler, eozinofiller, mast hücreleri ve plazma hücreleri genellikle yetersizdir. Sadece enflamatuar hücrelerin varlığı, mutlaka enfeksiyon anlamına gelmez. Spermatozoa, cinsel ilişkiden sonra birkaç gün devam edebilir. Trofoblast ve desiduoid stroma hamilelik veya kürtaj sırasında dökülebilir ve psödodekiduoid hücreler hormonal tedavinin sonucu olabilir.
Anormal keratinizasyon (hiperkeratoz), Papanicolaou preparatlarında anükleat, derin turuncuofilik squamae verir. Parakeratoz, piknotik çekirdeklere sahip benzer pulların sivri uçlarını ("dallar") veya "incileri" gösterir. Her iki model de enflamatuar ve neoplastik durumlarda görülebilir. Helmintler, bitler, mantarlar, polen ve kayganlaştırıcı jöle gibi çeşitli kirleticilerle karşılaşılabilir.
Monoaminler
Monoaminlerin dokuz farklı metabolik türevinin ayrılması ve kantitasyonu, 0.07 M sodyum fosfattan oluşan bir mobil faz artı 0.1 mM EDTA-metanol (9: 1), pH 5.4, bir ODS durağan faz kullanılarak da tarif edilmiştir. Ters fazlı bir kromatografi kolonunun etkinliği ile güçlü bir asidik katyon-değişim kolonunun etkinliği arasında doğrudan bir karşılaştırma yapılmıştır.
Yazarlar, ODS sütunu daha yüksek sayıda teorik plaka sunarken, bazı katekolamin piklerini solvent cephesinden ayırmanın genellikle zor olduğu ve ayrıca bazı durumlarda yabancı bileşenlerden belirli piklerin çözülemediği sonucuna varmışlardır; bu nedenlerden dolayı yazarlar katyon değişim sütununu tercih etmişlerdir.
Ters fazlı kromatografi ile bir iyon çifti ters faz modunda organik asitlerin kullanımı arasındaki fark biraz zayıf bir şekilde tanımlanmıştır ve bu nedenle biyojenik aminlerin ayrılmasında iyon çifti kromatografisinin kullanımı düşünüldüğünde tartışma aşağıdakilerle sınırlı kalacaktır.
Bu teknik başlangıçta Knox ve meslektaşları tarafından tanıtıldı ve metanol-suyun mobil fazı düşük konsantrasyonda sodyum dodesil sülfonat içerdiğinde, katekolaminlerin ve metabolitlerinin iyi bir tutma, verimlilik ve pik simetri ile ayrıldığını gösterdi.
Bu çalışmalardaki sabit faz, aksi takdirde ayırma verimini azaltabilecek herhangi bir serbest silanol grubu ile reaksiyona girmek için trimetilsilan ile daha fazla muamele edilmiş olan ODS idi.
Şu anda, biyojenik aminlerin iyon çifti kromatografisinde kullanılan en popüler sabit faz ODS’dir ve özel olarak hazırlanmış iyon çifti kolonları, serbest silanollerin sayısının azaltıldığı artık ticari olarak mevcuttur.
ODS durağan fazları genellikle sitrat veya fosfat tamponunun (pH 2-5) mobil fazıyla, çoğunlukla organik bir modifiye edici (metanol veya asetonitril) ve 0.1 ila 20 mM arasındaki konsantrasyonlarda bir karşı iyon ile kullanılır.
Yaygın olarak kullanılan karşı iyonlar arasında sodyum dodesil sülfonat, sodyum oktil sülfonat, sodyum lauril sülfat ve sodyum heptan sülfonat bulunur. Katekolaminler ve metabolitleri için ters fazlı iyon çifti kromatografisinin çözme gücünün bir örneği, 15 farklı bileşiğin iyi bir ayrımının gösterildiği gösterilmektedir. Ancak yazarlar, mobil fazda sodyum oktil sülfat varlığının sütunların ömrünü kısalttığını belirtmişlerdir.
Monoaminler nedir
Monoaminler Nelerdir
Monoamin nörotransmitter
Monoamin oksidaz A
Monoaminerjik sistem nedir
MAO-B inhibitörleri
Monoamin nedir
İndolamin nedir
İyon çifti kromatografisiyle yakından ilgili bir kromatografik teknik, orijinal olarak Schill tarafından tarif edildiği gibi iyon çifti ters fazlı bölüm kromatografisidir. Bu teknik, noradrenalin, adrenalin ve dopamin dahil organik amonyum bileşiklerinin ayrılması için kullanılmıştır.
Açıklanan ayırmalarda, bir ters faz sütunu (ya oktil ya da OD’ler), hareketli bir faz olarak bir fosfat tamponu ile kullanılan bir sıvı sabit faz oluşturmak için bir organik çözücü (ya metilen klorür ya da 1-pentanol) ile kaplanmıştır.
Dihidrojen fosfat, sikloheksil-sülfamat, disikloheksilsülfamat ve oktil sülfat dahil olmak üzere bir dizi bileşik karşı iyon olarak kullanıldı.
Yüksek oranda hidrofilik noradrenalin ve adrenalini ayırmak için sabit bir metilen klorür fazının gerekli olduğu, hidrofilik aminlerin ve kuaterner amonyum bileşiklerinin kromatografisinde pik asimetriyi önlemek için bir karşı iyon olarak uzun zincirli bir alkilamonyum bileşiğinin gerekli olduğu kaydedildi.
Oktil bağlı destek üzerindeki elüsyon sırasının, bir organik faz ve bir sulu faz arasındaki iyon çifti dağılımı için normal davranışa uygun olduğu, oysa ODS durağan fazda kolonun belirli hidrokarbonlu özellikleri koruduğu ve bunun sonucunda bir azalmaya neden olduğu kaydedildi.
Katyon değişimli HPLC, katekolaminlerin ayrılması için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bileşiklerin elüsyon sırası, tamponun iyonik kuvvetinde ve pH’ında taşıdıkları yüke bağlıdır.
Bu teknik, bu kimyasal varlık serisi için optimal görünürken, mevcut katyon değişim kolonlarının nispeten düşük verimlilikleri nedeniyle ayırmalarda problemler ortaya çıkmaktadır. Ayrıca, yakın zamana kadar ticari olarak temin edilebilen sütunların kalitesi oldukça değişkendi.
Bununla birlikte, katekolaminlerin bir dizi ayrılması, katyon değiştirme kromatografisi kullanılarak bildirilmiştir. Daha yakın zamanlarda, katekolaminlerin hem glisilglisin türevlerinin hem de 2-siyanoasetamid türevlerinin ayrılması, katyon değişimli HPLC kullanılarak gösterilmiştir.
Biyojenik aminlerin ayrılmasında katyon değişim HPLC potansiyelinin bir örneği Şekil 11.7.2’de gösterilmektedir. Gösterilen ayırmada, sabit faz, Vydac-CX pelliküler katyon değiştirici ile kuru paketlenmiş bir cam kolondan (500 X 2 mm) oluşuyordu.
Tespit Etme
Biyojenik aminlerin kantitasyonu için birkaç farklı detektör tipi kullanılmıştır; ancak şu anda en popüler teknikler elektrokimyasal saptama ve floresan saptamadır ve genellikle sütun öncesi veya sonrası türetme teknikleriyle birleştirilir.
Bu saptama tekniklerinin spesifik ayrıntıları başka bir yerde tartışılmıştır ve bu bölümde yalnızca biyojenik aminlere uygulanan temel ilkeler, ilgili avantajları ve dezavantajları açısından iki teknik arasındaki bir karşılaştırma ile birlikte gözden geçirilecektir.
Biyojenik aminlerin elektrokimyasal tespiti, bileşikten detektör elektroduna giden iki elektron kaybına dayanır ve böylece tespit mekanizması için temel sağlar. Böylece serotonin gibi 5-hidroksiindoller karşılık gelen imin-kinona dönüştürülürken katekolaminler kinonlara oksitlenir.
Elektron soyutlamasından türetilen akım, çözelti içindeki bileşiğin konsantrasyonu ile orantılıdır. Biyojenik aminlerin ölçümünde iki tip elektrokimyasal dedektör kullanılmıştır: en yaygın olan amperometrik dedektörler temelde tahribatsızdır, bileşiğin yaklaşık% 1-5’ini oksitlerken, alternatif kulometrik dedektörler% 100’e ulaşmaya çalışır.
Beyin dokusunda katekolaminlerin saptanması için HPLC ile kombinasyon halinde elektrokimyasal saptamanın uygulanmaya başlanmasından bu yana, kromatografik literatür, kromatografik yöntemlerde veya ekstraksiyon prosedürlerinde yapılan değişiklikleri açıklayan bir dizi makale ile incelendi.
Bu literatürdeki daha önemli makaleler arasında Keller ve diğerleri, Felice ve diğerleri, Moyer ve Jiang ve Taylor ve diğerleri bulunmaktadır. Katekolaminlerin metabolitlerinin belirlenmesinde elektrokimyasal tespit de kullanılmıştır. Biyojenik aminlerin amperometrik tespiti için kullanılan spesifik elektrokimyasal koşullar, tespit edilen spesifik bileşiğe göre değişir.
Bu nedenle, katekolaminler ve 3,4-dihidroksifenilasetik asit genellikle bir Ag-AgC1 referans elektroduna karşı +0.60 V’luk bir elektrot potansiyeli ile ölçülürken, serotonin için 5 hidroksiindoleasetik asit, 3,4-dihidroksifenilasetik asit, 3-metoksi -4-hydroxyphenylglycoland homovanillic asit bir uygulamalı + OM V potansiyeli kullanılır.