G6PD Eksikliği (Glukoz 6-fosfat dehidrojenaz)
Kırmızı hücre, glikoz metabolizmasının pentoz fosfat şant yolundaki ilk enzimin eksikliğinden dolayı azaltılmış bir indirgeyici enerjiye sahiptir. Genellikle cinsiyete bağlı çekinik bir durumdur: hastalık erkeklerde X kromozomunda bir etkilenmiş genle ifade edilir, ancak dişilerin etkilenmiş iki gene ihtiyacı vardır.
Bir tanesi etkilenen dişiler, Lyon hipotezine göre, hangi hücrelerde hangi X kromozomunun inaktive edildiğine bağlı olarak değişken ekspresyon gösterecektir. Çoğunlukla siyahi ve Akdenizli popülasyonlarda görülür ve dünya nüfusunun %3'ünü etkiler. G6PD aktivitesi retikülositlerde mevcuttur ancak bu bireylerde hızlı ve erken düşer.
Bu nedenle oksidan kimyasallara ve ilaçlara (örn. sülfonamid antibiyotikler) maruz kalındığında kırmızı hücre bütünlüğü azalır. Heinz cisimleri özel olarak hazırlanmış kan filmlerinde görülür. Teşhis, G6PD testiyle yapılır, ancak yalnızca kararlı durumda (hemolitik krizlerden sonra olduğu gibi aşırı sayıda retikülosit olduğunda değil). Bazı bölümlere yiyecekler (klasik olarak bakla - 'favizm') ve ilaçlar neden olur.
6GPD eksikliği için tarama
Pentoz fosfat yolu içinde NADP, G6PD tarafından NADPH'ye indirgenir. Bu ürün ultraviyole ışık altında floresan verir. Bu, floresan nokta testinin temelini oluşturur.
Tam kan aşağıdakilerle karıştırılır:
Glikoz 6-fosfat.
NADP.
Parçalayıcı ajan (genellikle saponin)
Tampon
Daha sonra filtre kağıdına lekelenmeden önce 5-10 dakika inkübe edilir, kurutulur ve uzun dalga UV ışığı altında incelenir. Normal numuneler parlak bir şekilde flüoresans yapacak, eksik numuneler flüoresan etmeyecek veya sadece zayıf olacaktır. Herhangi bir anormal tarama testi, bir G6PD testi ile onaylanmalıdır; burada G6PD tarafından NADPH üretimi, optik yoğunlukta zaman içinde bir değişiklik ile spektrometrik olarak ölçülür.
Enzim eksikliği olanlar ne yememeli
G6PD eksikliği diyet
G6PD eksikliği askerlik
G6PD eksikliği anestezi
glukoz 6-fosfat dehidrogenaz nedir
Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
bebeklerde glukoz-6-fosfat dehidrogenaz yüksekliği
Enzim eksikliği öldürürmü
Piruvat kinaz eksikliği
Piruvat kinaz eksikliği "otozomal resesif" bir durumdur (her iki genin anormal olması, bir kişinin durumu kalıtım yoluyla alması) ve başka bir enzim sorunudur - daha nadir görülen G6PD dışı hastalıkların en yaygınıdır. Hücreler deforme olur ve savunmasız hale gelir. Kan filmi poikilositleri (anormal şekilli kırmızı hücreler) gösterir ve bunlar bir ilaç uyarısı olmadan kendiliğinden hemolizlenir. Transfüzyon gerekebilir.
Piruvat kinaz eksikliği taraması
Piruvat kinaz, reaksiyonun katalizörüdür: ADP + fosfoenolpiruvat ! ATP + piruvat
Bu reaksiyonun ürünü olan piruvat daha sonra laktat dehidrojenaz (LDH) tarafından katalize edilen aşağıdaki reaksiyona ilerler:
Piruvat ş NADH ! laktat + NAD
NADH, uzun dalga UV ışığı altında floresan verirken NAD olmaz. Bu nedenle, tam kan ADP, fosfoenolpiruvat ve NADH ile inkübe edildiğinde, normal numunelerde NADH, sonuçta bir floresan kaybıyla NAD'ye oksitlenir. Eksik numuneler parlak bir şekilde floresan verecektir.
Anormal bir PK tarama testi, NADH'nin NAD'ye oksidasyonunun zaman içinde fotometrik olarak absorbanstaki bir değişiklikle ölçüldüğü, enzimin tam bir tahlili ile teyit edilmelidir.
Bağışıklık Hemolizleri
Çeşitli koşullar (Tablo 34.4'te listelenenler gibi), daha kısa bir ömre sahip olan antikor kaplı kırmızı hücrelerle sonuçlanır. İmmün hemoliz, laboratuvardaki termal aktivite (ve aglütinasyon) aralığına bağlı olarak laboratuvarda 'sıcak' ve 'soğuk' tiplere ayrılır, klasik olarak ılıkta 37 C ve soğukta 4 C, ancak bazen küçük örtüşmedir.
Pozitif olacak (DCT, Şekil 34.4) geniş bir tarama doğrudan Coombs (anti-globulin) testinin yanı sıra, sıcak immün hemolizde daha spesifik bir profil (IgG, kompleman) veren reaktifler kullanılabilir. Soğuk immün hemoliz şüphesinde, kan örneğini serum ayrılana kadar sıcak tutmak, ardından yetişkin (antijen içeren) ve göbek bağı (antijen taşıyan) hücrelere karşı test etmek olağandır.
DCT genellikle sadece kompleman reaktifi ile pozitiftir ve kan filmi, ısıtılmadıkça aglütinasyon gösterir. Sıcak ve soğuk koşullar arasındaki ayrım tedavi için önemlidir. Sıcak immün hemolizlerde, antikor üretiminin etkisini durdurmayı veya buna müdahale etmeyi amaçlayan steroidler ve diğer immünosupresif tedaviler genellikle yararlıdır.
Splenektomi sıklıkla işe yarar. Bununla birlikte, soğuk immün hemolizlerde sitotoksik kemoterapi (bazen) ve hastayı sıcak tutmak (neredeyse her zaman) yardımcı olur, ancak steroidler veya splenektomi değil. Otoaglütinasyon çapraz eşleşmeyi engellediğinden, immün hemolizde genellikle transfüzyondan kaçınılır.
Hastanın klinik durumu zaman zaman transfüzyon gerektirir ve kesinlikle kırmızı hücre eksikliği nedeniyle yenik düşmesine izin verilmemelidir, bu durumda 'en az uyumsuz' kan verilir.
Yenidoğanın hemolitik hastalığı (HDN)
Rh+ fetüsündeki Rh-pozitif hücreler, Rh annenin dolaşımına geçer, örn. hamilelik sırasında kanama veya düşük yapma tehdidi. Bu, annenin anti-D (anti-rhesus) antikorları üretmesine neden olur ve bu antikorlar daha sonra aynı veya sonraki gebeliklerde fetüse geçer ve kırmızı hücreleri kaplar ve bebek Rh+ ise hemolize neden olur.
ABO grubu uyumsuzlukları benzer sorunlara neden olabilir, ancak daha az önemdedir. Doğumdan sonra yüksek konjuge olmayan bilirubin seviyeleri (hemolize bağlı olarak) kan-beyin bariyerini geçecek ve beyin hasarıyla birlikte 'kernikterus'a neden olacaktır. Değişim transfüzyonunu içerebilen tedavi bunu önleyecektir.
Kan filminde sferositler görülebilir ve DCT pozitif olacaktır. Ağır vakalarda bebek hidropik olacaktır (anemi/sarılık/ödemle şişmiş). Potansiyel feto-maternal kanama zamanlarında, annenin antikor üretimi, Rh+ hücrelerini temizlemek için intramüsküler enjeksiyon yoluyla anti-D'nin pasif olarak uygulanmasıyla engellenebilir, bu da annenin kendi yanıtını üretmesini engelleyecektir.
Anti-D'nin bu şekilde profilaktik kullanımı, modern bilimsel tıbbın başarı öykülerinden biridir, bu nedenle etkilenen bebekler artık nadirdir. Bunlar intrauterin transfüzyon (zor bir manevra!) veya yenidoğanın değişim transfüzyonu ile erken doğum indüksiyonu ile tedavi edilebilirler.
Uyumsuz Transfüzyon
Uyumsuz transfüzyon, immün aracılı bir hemoliz oluşturur. ABO uyumsuzluğunda (çok nadir görülen bir durumdur, ümit edilir) hastanın doğal olarak oluşan anti-A veya anti-B antikorları (veya her ikisi) nedeniyle donör hücreler intravasküler olarak yok edilir.
Hasta daha önce tarif edildiği gibi çok hızlı bir şekilde hastalanabilir ve hemoglobinüri geliştirecektir. Transfüzyon durdurulmazsa veya hasta anestezi altındaysa, durum ölümcül olabilir.
Diğer antijenlere bağlı uyumsuzluk reaksiyonları genellikle anemi ve sarılık ile ekstravasküler hemolize neden olur. İyileşme olağandır ancak alyuvar antijenlerine karşı allo-antikorlar nedeniyle bundan sonra çapraz eşleşme sorunları olacaktır.
İmmünoblotlama
İmmünoblotlama ile küçük beyin örneklerinde bir gün içinde hızlı tanı elde edilebilir. Poliakrilamid SDS jelleri üzerinde ayrılan ve elektroforetik olarak nitroselüloz membranlara aktarılan proteinaz k-sindirilmiş doku, prion-spesifik antiserum ile reaksiyona giren 16-31 kDa moleküler ağırlıklı üç veya dört bant verir. Boyutları ve yoğunluk oranları, vCJD’yi sCJD’den ayırt edebilir. Bunlar Alzheimer hastalığında bulunmaz ve normal PrPc, proteinaz K tarafından tamamen sindirilir.
Diğer dokularda veya vücut sıvılarında testler
Şimdiye kadar tartışılan tüm yöntemler beyin dokusu üzerinde gerçekleştirilir. Teşhis, daha erişilebilir malzeme üzerinde daha basit olacaktır. PrPc’ye karşı monoklonal antikor, beyin dışındaki numunelerde proteaza dirençli PrP’yi tespit ederek CJD’yi teşhis etmek için kullanılabilir.
CJD hastalarının idrarında SDS-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ve proteinaz K ile sindirilmiş ultrasantrifüj topaklarının immünoblotlanması ile PrPR’ler tespit edilmiştir. Ayrıca formalinle sabitlenmiş gömülü bademcikler ve lenf düğümlerinde, deparafinizasyon, formik asit tedavisi ve hidrolitik otoklavlamadan sonra, biotin-avidin konjugatı kullanılarak, ancak sadece vCJD hastalarında saptanabilir.
Nöronal yıkımın vekil belirteçleri için beyin omurilik sıvısındaki testler artık CJD tanısı için kabul edilen repertuarın bir parçasıdır. En yaygın olarak kullanılan, 30 kDa yüksek oranda korunmuş nöronal protein 14-3-3’ü saptamak için tavşan poliklonal antikoru kullanan bir immünoblotlama tahlilidir.
Bu proteinin BOS’ta ortaya çıkması, bazı Alzheimer vakaları da dahil olmak üzere diğer nörodejeneratif hastalıklarda ortaya çıkabileceğinden, test sadece %88-95 spesifiktir. vCJD’ye (%50) sCJD’den daha az duyarlıdır, ancak aksonal mikrotübüler fosfoprotein olan tau için ticari bir ELISA ile birlikte test edilmesi vCJD duyarlılığını %86’ya kadar artırabilir.
Southern blot
Western blot
Blotlama nedir
Northern Blot yöntemi
Blotlama teknikleri
Moleküler yöntemler
Agaroz jel elektroforezi
Stacking jel Nedir
Non-invaziv teknikler
Elektroensefalografi, spesifik olmasa da genellikle faydalı olarak kabul edilir. Periyodik keskin dalga kompleksleri ve dış uyaranlara veya ilaçlara tepki gösterme belirgin gözlemlerdir. Tercih edilen mevcut görüntüleme testi, sCJD hastalarında %100 duyarlı ve spesifik olduğu iddia edilen bir belirteç olan multifokal kortikal ve subkortikal hiperintensiteler veren difüzyon ağırlıklı manyetik rezonans görüntülemedir (MRI).
Sonuç olarak, prion hastalığının doğası, tanıya yönelik olağan yaklaşımları ciddi şekilde sınırlar ve tanı genellikle yavaştır, invazivdir ve sıklıkla sadece otopside elde edilir. Bununla birlikte, vCJD, daha hızlı ve daha az invaziv teknikler için acil bir ivme sağlamıştır. 14–3–3 protein için CSF’yi test etmek şu anda mevcut ‘altın standarttır’ ve MRG’deki gelişmeler, non-invaziv tanı olasılıklarını iyileştirmiştir.
Antiviral duyarlılık testleri
Antiviral duyarlılık testleri, birçok rutin viroloji laboratuvarında henüz düzenli olarak yapılmamaktadır. Testlerin gerçekleştirilmesi birkaç gün veya hafta sürer ve bu nedenle yalnızca, aksi takdirde çok ciddi klinik problemler için uzun terapiye ihtiyaç duyan hastalara fayda sağlayabilir.
Muhtemelen insan immün yetmezlik virüsü (HIV) antiviral direncini izlemek veya bu hastalarda dirençli Herpes grubu virüslerini tanımlamak için çok sayıda bağışıklığı baskılanmış hastayla ilgilenen laboratuvarlarda ortaya çıkmaları daha olasıdır.
Uygulamada, antiviral tedaviyi değiştirme kararları genellikle deneysel direnç kanıtlarına, yani klinik olarak yanıt vermemeye dayanır. Alternatif olarak, viral antijenin başarısızlığı veya kandaki nükleik asit seviyelerinin tedaviye yanıt olarak düşmemesi gibi vekil direnç sınırları ölçülür.
Gerçek duyarlılık tahlilleri iki kategoriye ayrılır: antiviralin virüs büyümesi üzerindeki etkisini in vitro olarak ölçen fenotipik; ve direnç sağlayan mutantların varlığını doğrudan tespit eden genotipiktir.
Fenotipik tahliller
Fenotipik testler, antiviral direncin kesin kanıtını sağlar. Kültür hücreleri üzerindeki virüs büyümesinin genel sitopatik etkisini (CPE) veya viral metabolizmanın belirli aşamalarını, yani, inhibe etmek için gereken antiviral konsantrasyonu ölçerler. DNA veya protein sentezidir.
Virüsün önce doku kültüründe yayılması gerekir; bu adım, daha sonra test edilen dirençli mutantların oranını değiştirerek sonucu karıştırabilen bir adımdır. Bu nedenle testler tercihen düşük geçişli izolatlar üzerinde yapılır. HIV sıklıkla periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC) bir lenfoblastoid hücre dizisi ile birlikte kültür yoluyla izole edilir, bu da ilave bir başka komplikasyondur.
Plak azaltma (PR) testleri
Hücre tek tabakaları, virüs hareketini sınırlayan koşullarda, yani katı bir agar veya selüloz kaplaması veya antiviral immünoglobulin içeren sıvı altında seyreltilmiş virüs ile tohumlandığında, her virüs plağı oluşturan birim (pfu) ayrı bir CPE plakı üretir.
Sabit titre edilmiş virüs miktarları (15-500 pfu) ile birlikte seri olarak seyreltilmiş antiviralin eklenmesi, %50 plak azalmasına (ID50) neden olan konsantrasyon olarak antiviral duyarlılığın ölçülmesini sağlar.
PR testleri sadece izolatın %20-25’inden fazlasını oluşturan dirençli suşları tespit eder. %90 plak azaltma eşiği kullanılarak daha düşük oranlar tespit edilebilir, ancak ID90 ölçümleri ID50’den daha az doğrudur.
PR tahlilleri nispeten ucuz rutin kültür teknikleri kullanır, ancak dezavantajlar, kullanılan reaktiflerin, ortam ve virüsün hacimleri ve hücre, virüs ve antiviral konsantrasyonları standardize etmek ve kopya kültürlerdeki plakları manuel olarak saymak için gereken süredir.
Genel test süresi en az 2 haftadır. Virüs:hücre oranı, oranlar sırasıyla çok düşük veya çok yüksek olduğunda hatalı olarak yüksek veya düşük duyarlılık tahminleri oluşturmaktan kaçınmak için optimize edilmelidir.
Ön Herpes simpleks (HSV) duyarlılık sonuçları, izolatların enfektivitelerinin titrasyonuna paralel olarak ön tarama yapılarak, kabul edilen direnç eşik konsantrasyonunun 1,5 katında asiklovirli ve asiklovirsiz seri viral dilüsyonların inkübasyonu ile 3 günde elde edilebilir.
PR testleri HSV, sitomegalovirüs (CMV) ve Varicella zoster (VZV) direncinin saptanması için altın standarttır. Kabul edilen direnç eşikleri belirlenmiştir: asiklovir için 2 mg/ml, foscarnet için 100 ml/ml ve gansiklovir için tedavi öncesine kıyasla ID50’de üç ila dört kat artış vardır.
Bununla birlikte, ilgili uzun prosedürler ve düşük izolasyon oranları, sıklıkla %30 kadar düşük, HIV PR tahlillerini daha hızlı genotipik tahlillere göre klinik olarak daha az kullanışlı hale getirir.