Gradyan Sistemleri – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Pistonları 180 “faz dışı çalışan ikiz başlı bir pompanın tanıtılması, bir pistonun yeniden doldurma stroku ikinci pistonun (örneğin Waters M45 tipi) doldurma stroku ile telafi edildiğinden, esasen darbesiz çözücü dağıtımı üretir.
Bunun bir uzantısı, pistonları 120 “faz dışı çalışan üç başlı bir pompadır (örn. Du Pont). Solvent akışını yönlendirmek için mekanik olarak çalıştırılan bir giriş valfinin kullanıldığı tek başlı pompalar (örn. Varian 5000) ve elektronik kontrollü sistemler Nabızsız akış sağlamak için pistonların senkron çalışması için (örn. Mikrometikler) da mevcuttur.
Daha yakın zamanlarda, saniyede 23 strokluk ileri geri hareket eden piston hızlarına sahip bir pompa piyasaya sürülmüştür. Bu strok hızında, titreşimler dedektörler tarafından kaydedilemeyecek kadar hızlıdır ve çözücü iletimi darbesizdir.
Daha sofistike modeller, ters fazlı kromatografide gradyan iletimi için önemli bir özellik olan farklı çözücülerin sıkıştırılabilirliğini telafi etmek için yerleşik mekanizmalara da sahiptir.
İzokratik modda, yukarıda belirtilen pompa türlerinden herhangi biri, gösterilen basit sisteme dahil edilebilir. Bununla birlikte, izokratik ayırmaların tüm koşullar için yeterli olması olası değildir ve bu nedenle, HPLC’ye yatırım yapan herhangi biri, bir gradyan sistemini de düşünmelidir; Maliyette nispeten küçük bir artış için, izokratik modda da kullanılabilen karmaşık bir programlanabilir gradyan kontrolörü satın alınabilir.
Gradyan farkı nedir
Eğim ve gradyan
Gradyan yöntemi örnekleri
Ozmotik gradyan
Gradient fonksiyon
Türev operatörü nabla
Gradyan vektör alanı
Gradyan geometrik anlamı
Gradyan Sistemleri
İkili gradyanlar, iki ayrı çözücünün seçilen karışımı ile oluşturulur. Tek kafalı iki pompalı bir sistemde, her pompanın akış hızını değiştirerek, homojen mobil faz bileşimi, pompanın yüksek basınç tarafında düşük hacimli karıştırılan bir karıştırma odası (genellikle dahili bir karıştırma mıknatısı ile bir karıştırma mıknatısı kullanılarak elde edilir).
Pistonlu pompalar çok düşük akış hızlarında (0.1 ml / dak) daha az hassastır ve bu nedenle gradyanın ilk ve son aşamaları daha az doğrudur.
Bu, kapasite faktörü kritik olarak hareketli faz bileşimine bağlı olan bazı türlerin elüsyonunda önemli olabilir ve bu nedenle bu tür sistemlerde hafif bir dezavantaj oluşturur. Ek olarak, eğimin doğruluğu iki ayrı pompanın yüksek performansına bağlıdır.
Tek çok başlı pompaları kullanan bu sistemler, aynı zamanda düşük basınçlı karıştırma cihazları kullanma seçeneğine de sahiptir. Bunlar, solenoidler tarafından kontrol edilen anahtarlama valfleri aracılığıyla çözücü akışını değiştirerek çalışır.
Solenoidlerin kullanımı, ikiden fazla çözücünün hassas bir şekilde verilebileceği, böylece üçlü gradyanların kolayca yapılabilmesine ve bir yıkama döngüsünün başlatılabileceği anlamına gelir. Solventler sürekli olarak tedarik edildiğinden sadece pistonlu pompalar kullanılabilir.
Düşük basınçlı karıştırmanın temel avantajı maliyettir, çünkü yalnızca bir pompa gereklidir. Ayrıca, çözücüler sistemin yüksek basınç tarafından önce karıştırıldığı için çözücü gazının giderilmesiyle ilgili sorunların çoğu ortadan kalkar.
Gelişmiş mikroişlemci kontrolü (Mikrometrik) aracılığıyla güvenilir ve doğru gradyan oluşumu sağlayan alternatif sistemler mevcuttur.
Enjektörler
HPLC enjektör sistemlerinin erken tasarımı, gaz kromatografisinde (GC) kullanılanlardan büyük ölçüde etkilenmiştir. Bu, septum enjeksiyonunun GC’de hala popüler olmasına rağmen, HPLC’de neredeyse tamamen, Şekil 3.3’te gösterilen tipteki yüksek basınçlı enjeksiyon valfleri ile değiştirildiği düşünüldüğünde açıktır.
Bu, enjeksiyon valfinin en popüler tasarımıdır ve 5.000 psi’ye kadar basınçlarda sıfır ölü hacim enjeksiyonuna izin verir. Herhangi bir alternatif yöntem, ör. durmuş akış septum enjeksiyonu, tekrarlayan enjeksiyonlardan sonra septumdan partikül madde oluşumu nedeniyle daha düşük bulunmuştur.
Aşınma
HPLC donanımının çoğu ya korozyona dayanıklı paslanmaz çelikten (tip 316) ya da mümkün olan yerlerde diğer görece inert malzemelerden (örneğin PTFE) yapılmıştır. Paslanmaz çelik bağlantı parçalarının kullanımı, düşük hacimli iç çaplı boru ve bağlantı parçalarının kullanımıyla birlikte yüksek mobil faz akış hızlarında kolon geri basıncındaki artıştan kaynaklandı.
Günümüzde biyomoleküllerin birçok başarılı ayrımı, hem ters faz hem de iyon değiştirme modlarında bu tip ekipman kullanılarak gerçekleştirilmektedir. Bununla birlikte, paslanmaz çeliğin korozyonu meydana gelebileceğinden ve bu nedenle belirli önlemlerin alınması gerektiğinden, düşük pH’lı mobil fazlarda halojenür iyonlarının kullanılması hiçbir üretici tarafından önerilmemektedir.
Rutin olarak, HPLC sistemini gece boyunca damıtılmış suyla yıkayarak bırakmak iyi bir uygulamadır. Herhangi bir korozyonun ilk belirtisinde, sistem% 20 nitrik asitle (akış hızı, 30-60 dk için 1 ml / dk) pasifleştirilmelidir. Bu basit yönergeler, halojenür iyonlarının kullanımıyla ilişkili herhangi bir büyük sorunu önlemelidir.
Proteinler: Özel bir durum
Pek çok küresel protein, paslanmaz çelik ekipmanın eklemlerindeki kaynaklardan metal iyonlarının yavaşça sızmasıyla ‘zehirlenebilen’ metal iyonları ve hassas tiyol grupları içeren protez grupları içerir. Bu potansiyel sorunun üstesinden gelmek için iki üretici, herhangi bir paslanmaz çelikle teması en aza indirecek ekipman tasarladı.
LKB, KEL-F’den yapılmış pompa başlıklarına sahip bir pistonlu ikiz pompa sistemi üretmektedir. Gradyanlar, pompanın düşük basınç tarafında yer alan düşük hacimli bir karıştırıcı tarafından oluşturulur ve böylelikle bazı çözücü gaz giderme problemleri ortadan kaldırılır.
Sistemin geri kalanı diğer çoğu HPLC sistemine benzer, ancak pompa kafalarının diğer uygulamalar için (LKB Ultrochrom) paslanmaz çelik kafalarla değiştirilebilmesi gibi ek bir avantaja sahiptir. Ayrıca, düşük basınçlı kromatografi bu ekipmanla uyumludur.
Pharmacia, 1.000 psi’ye kadar olan basınçlara dayanacak şekilde tasarlanmış şırınga tipi iki başlı bir pompa piyasaya sürdü. Bu pompa tasarımının bir anahtarlama valfi ile birleştirilmiş kullanımı, çek valf gerekliliğini ortadan kaldırır ve genel olarak pürüzsüz, darbesiz bir akış sağlar.
Gradyan HPLC için mobil fazların karıştırılması, pompaların “basınçlı” tarafında gerçekleşir. Sistem, 1 ml / dk’da 500 psi’nin altında önerilen çalışma basınçları ile protein ayırmaları için sunulan özel bir sütun yelpazesiyle uyumludur. Bu sistem aynı zamanda geleneksel düşük basınçlı kolonlar (Pharacia FPLC sistemi) kullanılarak kromatografi için de kullanılabilir.
Eğim ve gradyan Gradient fonksiyon Gradyan farkı nedir Gradyan geometrik anlamı Gradyan vektör alanı Gradyan yöntemi örnekleri Ozmotik gradyan Türev operatörü nabla