İzoenzimler
Serumda rutin olarak ölçülen enzimlerin çoğu, her biri vücutta farklı bir organ sistemi tarafından üretilebilen bir izoenzim karışımı olarak bulunur; serumdaki kreatin kinaz (CK), CK-MM (iskelet kasından), CK-MB (ağırlıklı olarak kalpten) ve CK-BB (beyinden) karışımıdır.
Elektroforez, yükselmiş toplam CK'nın nedeninin kalp veya iskelet kası hasarı olup olmadığını ayırt edebilir. Ayırma, CK tarafından etkilendiğinde UV ışığı altında görülebilen bir floresan bileşik üreten enzime sentetik bir substrat ile kaplanmış agar jelleri kullanılarak gerçekleştirilir.
Kardiyak spesifik troponinlerin ölçümü birçok laboratuvarda CK-MB ölçümlerinin yerini büyük ölçüde almış olsa da, elektroforez makro-CK komplekslerinin varlığını tespit edebilen tek yöntem olmaya devam etmektedir. Elektroforez ayrıca alkalin fosfatazı karaciğer, kemik, plasental ve bağırsak formlarına ayırmak ve laktat dehidrojenazın izoenzimlerinin modelini belirlemek için kullanılır.
Hemoglobin
Hemoglobin varyantlarının tanımlanması için HPLC yöntemlerinin yakın zamanda tanıtılmasına kadar, amino asit ikamelerinin neden olduğu hemoglobin molekülü üzerindeki farklı toplam yüke dayanan elektroforetik yöntemler yaygın olarak kullanılıyordu.
Selüloz asetat normalde tarama yöntemleri için destek ortamıydı ve taramada görülen herhangi bir anormal varyantın pozitif olarak tanımlanması için sitrat agar jel elektroforezi kullanıldı. Hemoglobin varyantlarının sitrat jel elektroforezi ile ayrılması, ikame edilmiş amino asitlerin agaropektin ile etkileşimlerine dayanır.
Yüzeye yakın ikameleri olan bu varyant hemoglobinler, örn. HbS ve HbC korunurken, HbD ve HbG gibi daha derin ikamelere sahip olanlar korunmaz. Nadir hemoglobinopatileri tanımlamak için karmaşık elektroforez veya izoelektrik odaklama kombinasyonları gereklidir.
türkiye'nin en iyi alerji doktoru
Alerji ve İmmünoloji Bölümü olan Hastaneler
İmmünoloji ve Alerji Hastalıkları randevu
Medical Park alerji testi fiyatı
hacettepe. alerji ve immünoloji doktorları
İmmünoloji ve Alerji Hastalıkları
Non immünolojik nedir
Medicana alerji testi Fiyatı
PCR'yi takip eden DNA parçaları
Bu bölümün kapsamı dışında olmakla birlikte, şu anda klinik laboratuvara tanıtılan moleküler tekniklerin çoğunun, PCR'yi takiben DNA'nın restriksiyon parçalarının elektroforetik olarak ayrılmasını ve restriksiyon enzimleri ile muameleyi içerdiğini hatırlamakta fayda var.
Agar jel, moleküler biyolojideki uygulamaların büyük çoğunluğunda radyo-etiketleme veya etidyum bromür ile boyama yoluyla görselleştirme ile kullanılan destek ortamıdır. Bu tür tekniklerin kullanımına bir örnek, HFE genindeki genetik hemokromatoz ile ilişkili iki mutasyonun saptanmasıdır: C282Y ve H63D.
Kapiler elektroforez (CE)
Dar bir kılcal damarda elektroforez ilk olarak 1937'de tanımlanmış olmasına rağmen, tekniğin kendine gelmesi ancak 1985'ten beri olmuştur. 25–100" m çapında ve 25–100 cm uzunluğunda, uçları elektrotları da içeren tampon şişelere yerleştirilen kapilerler kullanılır. Elektroendosmotik akışı üretmek için çok yüksek voltajlar (10–30 kV) uygulanır. Kılcal damar içinde Kılcal damarı dolduran tamponun tipi, pH'ı ve iyonik gücü, istenen ayrımın elde edilmesi için kritik öneme sahiptir.
Kapiler elektroforez ile ayırmanın dört ana modu vardır: kapiler bölge elektroforezi (CZE) veya serbest çözelti ayırma; misel elektrokinetik kapiler kromatografi (MECC); kılcal izoelektrik odaklama (CIEF) ve kılcal izotakoforez.
Bu farklı ayırma modlarının ilkeleri ve laboratuvar tıbbındaki potansiyel uygulamalar yakın zamanda gözden geçirilmiştir. Serum protein elektroforezi için CE kullanan ticari bir alet geliştirilmiştir.
Bu, yüksek verim elde etmek için bir dizi kılcal damarı paralel olarak kullanır ve immüno-çıkarma tekniği kullanılarak paraproteinlerin tanımlanmasını içerir. CE, İnsan Genom Projesinde baskın metodoloji haline geldi ve mevcut nesil tezgah üstü DNA dizileyicilerinin temeli oldu.
İMMÜNOLOJİ
Protein tahlilleri
Protein analizi için kalitatif ve kantitatif teknikler, görevi kan ve diğer vücut sıvılarındaki bazı proteinlerin analizini içeren rutin immünoloji laboratuvarında temel araçlardır. Spesifik olarak, immünologların büyük ilgi gösterdiği proteinler arasında immünoglobulinler (antikorlar), kompleman sisteminin proteinleri ve en son olarak immün sistemde rolü olan sitokinler bulunur.
Bu bölümün amacı, rutin protein analizi için kullanılan yöntemlerin ilkelerini kısaca açıklamaktır. Tanımlanan yöntemlerden bazıları kompleman sisteminin proteinlerinin incelenmesi için kullanılsa da, bu sistemin doğası doğru yorumlama için özel değerlendirmeler gerektirir.
Bu nedenle, tamamlayıcı proteinler için testler Bölüm 46'da ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Benzer şekilde, otoimmün antikorlar için testler, immün kompleks hastalığı ve kriyoglobulinler ile ilgili bölümde ele alınmaktadır.
Rutin laboratuvarın temel amacı, aşağıdakilerin miktarını tespit etmek, karakterize etmek ve ölçmektir:
1. İmmünoglobulin eksikliği gibi spesifik proteinlerin eksiklikleri.
2. Anormal veya uygun olmayan protein ekspresyonu, örn. monoklonal gamopatilerde, otoimmün hastalıkta veya atopide.
Proteinlerin analizine yönelik yöntemler, çeşitli ilkelere dayanır.
Bununla birlikte, bu bölümde açıklananlar gibi rutin analizlerin çoğu için gerçekten sadece iki temel özellik kullanılmaktadır:
1. Bireysel proteinlerin karakteristik bir elektrik yükü vardır, bu da farklı spesifik proteinlerin elektroforez ile ayrılabileceği anlamına gelir.
2. Her spesifik insan proteininin kendine özgü bir yapısı vardır ve bu, o proteine karşı antikorlar, hayvanları bu insan proteini ile immünize ederek poliklonal antikorlar veya hibridoma teknolojisi ile monoklonal antikorlar üretmek için kullanılabilir. Bir proteine özgü antikorlar, bağışıklık tahlillerinin temelidir.
Uygun bir tahlil yönteminin seçimi, nitel veya nicel bir sonucun gerekli olup olmadığına bağlı olacaktır. Ayrıca, ilgili proteinin konsantrasyonu, test seçimi için çok önemli olacaktır, örn. BOS ve idrarda oligoklonal ve monoklonal immünoglobulinlerin tespiti veya ölçümü, numune konsantrasyonu veya serum numuneleri için gerekenden daha hassas bir yöntem seçimi gerektirebilir.
Kısa bir tarihsel perspektif
Elektroforez ilkeleri, bir elektrik yükündeki molekülleri ayırma yöntemi, 1930'da İsveçli Arne Tiselius, kan proteinlerinin karmaşık yapısından şüphelenerek, bir sıvı içinde serumun elektroforezi ile deneyler yapmaya başladığında bir süredir biliniyordu. sıvı tampon ortamı.
1937'de serumun elektroforezinden sonra görülebilen birkaç ayrı protein bölgesi tanımladı; bunlara albümin, -globulin, -globulin ve -globulin, anoda doğru en hızlı hareketliliğe sahip albümin ve en yavaş -globulin adını verdi.
Bu temel isimlendirme bugün hala kullanılmaktadır. 1950'lerde kağıt destek ortamı olarak kullanılmaya başlandı, daha sonraki yıllarda agar, agaroz ve poliakrilamid gibi selüloz asetat ve jellerin kullanımı izledi. Günümüzde sıvı faz elektroforezi rutin testler için yeniden kullanılmaya başlanmıştır.
Galli1, organik asitlerin ayrılmasını iyileştirmek için BGE’ye alkali toprak metallerinin (esas olarak kalsiyum) eklenmesinden bahsetti. Kalsiyum iyonları, farklı stabilitelere sahip komplekslerin oluşumu yoluyla etkileşime girerek farklı hareketlilikler sağlar. EDTA, farklı kompleksler oluşturmak için de kullanılabilir. Alternatif olarak EDTA, karışan bileşikleri ortadan kaldırabilir.
Bazı yazarlar, BGE’ye organik çözücülerin eklenmesini inceledi. Metanol, asetonitril, etilen glikol gibi çözücüler, analizin seçiciliğini değiştirecektir.
İyon hidrasyonunda değişiklikler ve viskoziteyi artırarak EOF’de bir azalma gözlemliyoruz. Ayrıca, analitin pKA’sı ve kapiler duvarın silanol grupları değiştirilir. Örneğin, Diress ve Lucy42, pH 8.0’da Setiltrimetilamonyum klorür (CTAC) içeren 15 mM fosfat tamponunda% 60’a (h / h) kadar metanolün etkisini inceledi.
Tindall ve ark.43, iyon hareketliliğini ince ayarlamak için siklodekstrin kullanmıştır. 1 mM 2,6-naftalen dikarboksilat pH 9 tamponunda 8 mM’ye kadar b-siklodekstrinin eklenmesi, analitin dinamik aralığını 0,025’ten 100 mg / mL’ye yükseltir. Tarif edilen analitler butirik, propiyonik ve asetik asitlerdir.
Stathakis ve Cassidy44, iyodür, nitrat, perklorat, tiyosiyanat, bromat, iyodat, etansülfonat içeren bir karışımı ayırmak için a-, g- (0240 mM / L) veya b-siklodekstrin (0210 mM / L) kullandı. pentansülfonat ve oktan sülfonat. Nitrat ve nitritin ayrılması, pH 5.4’te 30 mM PDC tamponu içinde% 3 a-siklodekstrin ilavesiyle geliştirilebilir.
D. Hassasiyeti İyileştirme
Karşı iyon olan büyük bir bileşiğin analizi için duyarlılık bir sorun değildir. Genel bir kural olarak, kılcal hacmin% 2’sinden fazlasını enjekte etmemelidir; ancak, LOD’yi azaltmak için% 8’e kadar enjekte etmeyi araştırabiliriz. Alternatif olarak, daha büyük çaplı ve / veya daha büyük uzunluğa sahip bir kapiler kullanılabilir. Bu, daha fazla örneğin enjeksiyonuna izin verir. Genişletilmiş bir yol uzunluğu da düşünülebilir.
Enjeksiyon motor Nedir
Enjeksiyon Nedir
Enjeksiyon Fiyatları
Enjeksiyon ne Demek
İğne enjeksiyon Fiyatları
Enjeksiyon mü karbüratör mü
Enjeksiyon Nedir sağlık
Enjeksiyon arızası Tamiri fiyatı
Elektrokinetik Enjeksiyon
Bu teknikle, numuneye belirli bir süre birkaç volt aralığında uygulanarak numune enjekte edilir. İyonize olan iyonlar, uygulanan voltaj nedeniyle oluşan EOF tarafından mobilize edilen küçük bir miktar örnek gibi, hareketliliğinin bir fonksiyonu olarak kılcal damar içine göç edecektir. Jackson ve Haddad45, orta düzeyde iyonik kuvvete sahip örneklerde düşük anyon seviyelerini (ng / mL) analiz edebildi. Kantifikasyon için, bir veya iki dahili standardın veya standart bir eklemenin kullanılmasını tavsiye etti.
Elektrokinetik enjeksiyon, birkaç özel husus gerektirir. Kullanılan malzeme çok saf olmalıdır. Klasik cam şişeler bilinmeyen zirveler verebilir. Havadan kontaminasyon toplanabileceğinden su çok saf ve taze olmalıdır. Çalışma sırasında, farklı tampon ve durulama şişeleri kontamine olabilir ve daha sık değiştirilmesi gerekebilir. Enjeksiyon sonrası su için kullanılan flakon her çalışmada değiştirilmelidir.
Çok düşük iletkenliğe sahip numuneleri analiz ederken, uygulanan gerilimin numune şişesinde akım oluşturmasına izin vermek için yavaş hareketliliğe sahip bazı iyonların eklenmesi gerekir. Örneğin, akım ve EOF oluşturmak için numuneye heptanesülfonat (örnekte 1.2 mM düzeyinde CAS 22767-50-6) ekleyebiliriz.
Doğrusallık aralığı genellikle bir basınçlı enjeksiyondan daha küçüktür, alternatif olarak daha geniş bir aralık için ikinci dereceden bir kalibrasyon eğrisi kullanılabilir.
Elektroforetik Konsantrasyon
Elektroforetik konsantrasyon teknikleri, bir analitin iki ayrı bölgedeki hareketliliğindeki farklılığa dayanmaktadır, temel olarak bölgeler arasındaki elektrik alan kuvvetindeki farklılıklardan dolayı.46 Bu tür konsantrasyonun temel avantajı, temel cihazda hiçbir modifikasyonun gerekli olmamasıdır.
En basit teknik, 1979’da Mikkers ve ark.15 tarafından daha önce tartışılan alanla güçlendirilmiş örnek istiflemedir (FASS). Bir kapiler tüpe örnek enjekte edilirken, örnek bölgesi tamponunkinden daha düşük bir iyon gücüne sahip olmalıdır. a faktör 10. Voltaj uygulandığında, örnek bölgesindeki elektrik alanı, bu bölgenin daha düşük iletkenliği nedeniyle daha yüksektir.
Analitler, iletkenliğin daha yüksek olduğu tampon bölge sınırına ulaşana kadar çok hızlı göç edeceklerdir. Ayrıca bu sınır bölgesinde birikerek yüksek ve keskin zirveler verecekler. SSBF, CE yapılırken kullanılan standart yöntemdir.
İstiflemeye dayalı farklı ön konsantrasyon teknikleri Breadmore ve Haddad tarafından açıklanmıştır. Timerbaev5, geçici ITP’yi (tITP) en uygun seçenek olarak tanımlar. İzotakoforez veya ITP, bir ana elektrolit ve bir sonlandırıcı elektrolit arasına bir analit iyonu yerleştirildiğinde meydana gelir. Önde gelen elektrolit, ilgilenilen analit ile aynı yüke sahip yüksek bir mobilite iyonu konsantrasyonu içerir. Sonlandırıcı elektrolit, daha düşük hareket kabiliyetine sahip bir iyon içerir.
Serum gibi karmaşık matrisler, örnek bölgesinde öncü ve sonlandırıcı elektrolitler olarak hareket edebilen düşük ve yüksek konsantrasyonlu anyonik bileşenler içerir. Bu durumda, numunenin kendiliğinden istiflenmesinden söz edebiliriz. 2005 yılında, Krˇiva İnkova ve ark.47,48 bu yaklaşımı serumdaki klorürü ana iyon olarak kullanarak serumdaki etil glukuronidi belirlemek için kullandı. 10 mM nikotinik asit ve e-aminokaproik asitten oluşan bir tamponun etil glukuronid için 0.079 mg / mL’lik bir LOD sağladığı gösterilmiştir.
UYGULAMALAR
1993’ten günümüze, çeşitli yayınlar farmasötik karşı iyonların belirlenmesi için anyon ve katyon analizini tarif etmiştir (Şekil 16). ve safsızlık profili. Bu uygulamalar için, farklı CE cihazlarında çeşitli tamponlar kullanılmıştır. Çoğu durumda saptama, 200 nm’de absorbe eden bromür gibi analitler için dolaylı veya doğrudan UV saptamasıydı. İki makale bir iletkenlik detektörünün kullanımını anlatmaktadır.
Bu uygulamaların temel özellikleri iyi doğrusallık, kare korelasyon katsayısı 0.999’un üzerinde ve RSD’nin hiçbir iç standart kullanılmadığında% 2’nin altında ve dahili bir standartla% 1’in altında tekrarlanabilirliktir. Tampon ve enjeksiyon optimizasyonuna bağlı olarak, farklı yazarlar bir LOD ve 1 mg / mL’ye yakın veya altında kantitasyon limiti (LOQ) buldular. Bir iletkenlik detektörü kullanarak, LOD ve LOQ 100 faktör azalmıştır. Birçok yazar ayrıca yöntemin doğruluğunu ve geri kazanımını rapor etmektedir.
Potasyumun bir karşı iyon olarak belirlenmesinin sağlamlığını ve geçerliliğini açıklayan Altria ve ark. 66268 ve Assi ve ark.75 makaleleri dikkate değerdir. Asidik bir ilaç tuzunda sodyum tayininin şirketler arası çapraz doğrulaması da yayınlandı.