Doğal Antikoagülanlar
İn vivo olarak sürekli düşük dereceli pıhtılaşma aktivasyonu vardır ve aktifleştirilmiş pıhtılaşma faktörlerinin doğal inhibitörleri vardır. Bu faktörlerin eksikliği, protrombotik bir eğilim ile ilişkili olabilir.
Anti-trombin III
Anti-trombin III, in vivo trombinin ana düzenleyicisidir. İmmünolojik tekniklerle ölçüldüğü gibi normal niceleme üreten çeşitli moleküler formlar tanındığından, fonksiyonel deneyler tercih edilir. Çoğu fonksiyonel analiz, eklenen heparin varlığında faktör Xa'nın trombininin nötralizasyonunu ölçer.
Proteinler C ve S
Trombin oluşumunu takiben Protein C aktive olur. Trombin, endotel hücrelerinin yüzeyindeki trombomoduline bağlanır ve protein C'yi bağlar ve aktive eder. Bu durumda trombin prokoagülan aktivitesini kaybeder ve artık fibrinojeni fibrine dönüştüremez. Aktive protein C, faktör V ve VIII'i parçalayarak, daha fazla trombin oluşumunu sınırlayarak doğal bir antikoagülan görevi görür.
Protein S, aktive protein C için bir kofaktör görevi görür. Bir diğer önemli bulgu, faktör V molekülünün bir kusuru olan faktör V Leiden mutasyonu nedeniyle aktive protein C direncinin oluşabileceğidir.
Bu, artan venöz tromboz riski ile ilişkilidir ve bilinen en yaygın kalıtsal protrombotik risk faktörüdür. Bu faktörü dışlamak için protrombotik öyküsü olan hastalarda PCR taraması önerilir. G2020 protrombin mutasyonu için PCR taraması da trombofili taramasının bir parçası olarak rutin olarak gerçekleştirilir.
Fibrinoliz
Fibrinoliz, fibrin pıhtısının parçalanması ile sonuçlanır ve vasküler endotelden doku tipi plazminojen aktivatörü (tPA) ve ürokinaz tipi plazminojen aktivatörü (uPA) salınımı ile başlatılır. Bu aktivatörler, plazminojeni, fibrini parçalayan aktif enzim plazmine dönüştürür.
Ayrıca, plazmin için doğal bir inhibitör, II anti-plazmin ve endotel tarafından salınan, serbest tPA ve uPA'ya bağlanan ve bunları inaktive eden plazminojen aktivatör inhibitörü tip 1 (PAI-1) vardır.
Antikoagülan ilaçlar listesi
Antikoagülanlar
Antikoagülan ilaçlar hangileridir
Antikoagülan nedir
Antikoagülan ilaçlar nedir
Heparin
Antikoagülan ne ise yarar
Antikoagülan tedavi
Aktif pıhtılaşma belirteçleri
Son birkaç yılda hiper pıhtılaşabilirliğe ve tespiti için mevcut testlere artan bir ilgi olmuştur. Pıhtılaşma aktivasyon belirteçleri için tahlillerin, tromboza yatkın klinik durumları olan hastaları karakterize etmek, akut trombotik olayların teşhisine yardımcı olmak ve antikoagülan tedaviyi izlemek dahil olmak üzere çeşitli potansiyel kullanımları vardır.
Bu, pıhtılaşma aktivasyonu sırasında üretilen pıhtılaşma zimojenlerinin enzimatik formlarının ölçülmesiyle veya dolaylı olarak zimojenler aktive edildiğinde oluşturulan aktivasyon peptitlerinin ölçülmesiyle gerçekleştirilebilir. Ek olarak, doğal olarak oluşan plazma inhibitörleri tarafından enzim inaktivasyonundan kaynaklanan kompleksleri ölçerek başka bir yaklaşım da mevcuttur.
Faktör IX ve X aktivasyon peptitleri gibi pıhtılaşma faktörlerinin aktivasyonundan üretilen fragmanları ölçmek için bir dizi immünolojik test mevcuttur. Protrombinin trombin aracılı aktivasyonundan kaynaklanan protrombin fragmanı 1 + 2 ve fibrinojen zincirinden trombin tarafından ayrılan fibrinopeptit A, sırasıyla trombin oluşumunun ve aktivitesinin göstergeleridir.
Protein C aktivasyon peptitini veya aktive protein C'yi ölçmek için immünoanalizler, trombin ve trombomodulin fonksiyonunun indeksleri olarak kabul edilebilir.
Trombin, anti-trombin gibi enzim ile inhibe edilen komplekslerin ve aktive protein C'nin protein C inhibitörü ve anti-tripsin tarafından inhibisyonundan kaynaklanan diğer komplekslerin ölçümü için immünolojik testler de mevcuttur.
Şu anda, pıhtılaşma aktivasyon belirteçlerinin yararlılığı, hiper pıhtılaşmayı değerlendirmek için akut trombotik olayların teşhisinden daha iyidir. İkinci amaç için, D-dimer gibi fibrinoliz aktivasyon belirteçlerini ölçmek daha etkilidir.
Otomatik Pıhtılaşma
Teknolojideki son gelişmeler, pıhtılaşma taraması için otomatik aletlerin kullanıma girmesinin habercisi olmuştur. İş yükündeki artış, daha fazla özgüllük talebi ve el emeğindeki azalma, çoğu laboratuvarın artık yarı veya tam otomasyona sahip olmasını sağlamıştır.
Sonuçlar enstrümanlar arasında büyük farklılıklar gösterse de çoğu manuel yöntem enstrümantasyon için değiştirilebilir. Faktör testleri de dahil olmak üzere tüm rutin pıhtılaşma tarama testleri otomatik cihazlarda analiz edilebilir.
Daha gelişmiş cihazlar, özel pıhtılaşma testleri için kromojenik deneylere izin verir. İlk araçlar, fibrin pıhtısının elektrotlar aracılığıyla tespit edilmesini içeriyordu. Bir elektrot reaktifin/plazmanın içinde ve dışında hareket eder. Kalsiyum eklenir ve ilk fibrin pıhtısı oluşur oluşmaz elektrik devresi tamamlanır ve zamanlayıcı durdurulur.
Günümüz araçlarının çoğu, foto-optik uç nokta algılamayı içerir. Pıhtılaşma süreci gerçekleştikçe sabit bir ışından saçılan ışık artar. Pıhtılaşma süresi, örneğin saçılan ışık yoğunluğunun önceden ayarlanmış yüzdesine ulaşması için gereken süre olarak pıhtılaşma eğrisinden elde edilir.
Tam enstrümantasyon, robotik numune alma, numunelerin barkod okuması, otomatik reaktif dağıtıcılar ve bir veri yönetim sistemi içerir. Bununla birlikte, son nokta saptama yöntemine bağlı olarak farklı cihazlar arasında pıhtılaşma süreleri değiştiğinden, otomasyondan elde edilen sonuçlar kesin olarak karşılaştırılabilir değildir. Bu nedenle, manuel teknikler hala referans yöntemler olarak kullanılmaktadır.
SİTOGENETİK
Kromozom bantlama ve analizi
Sitogenetik, sağlık ve hastalıkta insan kromozomlarının incelenmesini içerir. İnsan çekirdeğinde genetik materyal (DNA), proteinlere kimyasal olarak bağlıdır ve kromozom adı verilen farklı yapılara paketlenir.
Tipik olarak, insan hücreleri, her bir kromozom çiftinin bir üyesi her bir ebeveynden kalıtılan toplam 46 kromozom veya 23 çift barındırır. Her hücrenin DNA'sı, her hücre bölünmesinde genetik materyalin her iki yavru hücreye doğru şekilde ayrılmasını kolaylaştırmak için kromozomlar halinde paketlenir.
İnsan gamet hücreleri, spermler ve yumurtalar üretildiğinde, mayotik hücre bölünmesi yoluyla kromozom sayısı 23'e yarıya indirilir, böylece bir sperm ve bir yumurtanın füzyonuyla yeni bir zigot oluştuğunda, hücreler doğru kromozom sayısına sahip olmalıdır.
Tarihsel olarak 1956, modern insan sitogenetiğinin başlangıcı olarak kabul edilir, çünkü bu zamandan önce normal insan hücresindeki kromozom sayısının 48 olduğu düşünülürdü.
Sitogenetik analiz, kromozom anormalliklerinin saptanmasını sağlar. Bu anormallikler sayısal (fazla veya eksik kromozomlar) veya yapısal (delesyonlar, duplikasyonlar, translokasyonlar vb.) olabilir. Kromozom preparatları, periferik kan, amniyotik sıvı, deri veya kemik iliği dahil olmak üzere çeşitli vücut dokularından hazırlanabilir ve analiz edilebilir.
Asite Dayanıklı Lekeler
Bakteri cinsi Mycobacterium’un üyeleri, hücre duvarlarında büyük miktarlarda lipit (yağlı) maddeler içerir. Bu yağlı mumlar, sıradan yöntemlerle lekelenmeye direnir. Bu cins, önemli insan hastalıklarına neden olan türler içerdiğinden (tüberküloz ajanı bir Mycobacterium’dur), teşhis laboratuvarı bunları klinik örneklerde veya kültürlerde ortaya çıkarmak için özel boyalar kullanmalıdır.
Bu organizmalar, ısı ile veya konsantre bir çözelti içinde uygulanan karbolfuksin gibi bazik bir boya ile boyandığında, leke lipid hücre duvarına nüfuz edebilir ve hücre sitoplazmasına ulaşabilir. Sitoplazma lekelendiğinde, çözülemeyen ve mikobakteriyel lipid duvarının altına nüfuz edemeyen asit-alkol gibi sert ajanlarla bile renk açmaya direnir.
Bu boyama koşulları altında, mikobakterilerin aside dirençli olduğu söylenir. Hücre duvarları yüksek konsantrasyonlarda lipid içermeyen diğer bakteri, karbolfuksin ile boyandıktan sonra asit-alkol ile kolayca renklendirilir ve asitsiz oldukları söylenir. Tıbben önemli bir cins olan Nocardia, kısmen aside dirençli türler içerir.
Zayıf (% 1) bir sülfürik asit çözeltisiyle renk giderilmesine direnirler, ancak asit-alkol ile işlendiklerinde karbolfuksin boyasını kaybederler. Aside dirençli teknikte, fuksinin hücreler içinde renklerinin giderilip giderilmediğini ve ikinci lekenin alınıp alınmadığını göstermek için bir karşıt boya kullanılır.
Carbolfuchsin’i ısı ile uygulamak için orijinal teknik, adını 1800’lerin sonlarında geliştiren iki bakteriyologdan alan Ziehl-Neelsen boyası olarak adlandırılır. Tekniğin sonraki modifikasyonu, leke penetrasyonunu sağlamak için ısıdan ziyade daha konsantre karbolfuksin reaktifi kullanır ve “Kinyoun boyası” olarak bilinir.
Günümüzde birçok klinik laboratuvarda daha modern bir floresan tekniği kullanılmaktadır. Bu yöntemde hasta numunesi, ultraviyole ışık kaynağına maruz kaldığında floresan veren boya otoramini ile boyanır. Aside dirençli herhangi bir basil bu boyayı aldığından ve bir flüoresans mikroskobu ile görüntülendiğinde koyu bir arka plana karşı parlak bir şekilde floresan ışıldadığından, yayma 1000 (yağa daldırma) büyütme yerine 400 (yüksek kuru) büyütme altında incelenebilir. Sonuç olarak slayt, aside dirençli basillerin varlığı açısından daha hızlı taranabilir.
Nitrik asit Paslanmaz çelik
Paslanmaz çelik pasivasyon Nedir
Eliogard
Paslanmaz asit TEMİZLEME
Mermer Koruyucu Kaplama
Mermer masa koruyucu Cila
Paslanmaz Pasivasyon nasıl yapılır
Paslanmaz Pasivasyon Sıvısı
Amaç
Aside dirençli tekniği öğrenmek ve klinik bir numuneyi boyamak için kullanıldığında değerini anlamak için;
Malzemeler
Mycobacterium phlei’nin (bir saprofit) genç bir eğik kültürü
Bacillus subtilis’in 24 saatlik et suyu kültürü
Huzurevinden 70 yaşındaki bir erkeğin balgam örneğini taklit eden bir balgam örneği,
göğüs ağrısı ve kanlı balgam ile hastane
Gram boyama reaktifleri
Asit-alkol solüsyonu
Metilen mavisi
Slaytlar
Elmas cam işaretleme kalemi
Kalem veya kalem işaretleme
2 adet 3 cm filtre kağıdı şeridi
Kaydırmalı raf
Prosedürler
1. Her kültürden iki sabit smear ve simüle edilmiş balgamdan iki tane hazırlayın. Uygulamada, yaymalar bir dakika boyunca metanol ile sabitlenir veya mevcut tüberküloz basillerinin öldüğünden emin olmak için 65 ila 75 ° C’de ısı ile sabitlenir. Agar eğik kültürün yayılmasını sağlamak için önce üzerine bir damla su koyun. kaydırın ve sonra bu damlada küçük bir miktar kolonyal büyümeyi emülsiyon haline getirin.
2. Her zamanki gibi işaret kaleminizle her çiftten bir slaydı çalın ve kodlayın.
3. Her bir çiftin diğer slaytları, elmas kalemle kodlanmış ve sağlamlaştırılmış, uzun süreli boyama işlemi sırasında bile izlerin kalması gerekir.
4. Gram, 2. adımda kurşun kalem veya kalemle işaretlenen slayt setini boyayın.
5. Elmas çizik slaytları Kinyoun tekniği ile boyayın:
a. Varsa, slaytları metal boyama tepsisinin üzerine uzatılmış bir slayt rafına yerleştirin.
b. Lekeyi slaytta tutmak ve çözülmemiş boyayı filtrelemek için smearı 2 adet 3 cm’lik filtre kağıdı ile kapatın.
c. Slaytı konsantre carbolfuchsin solüsyonu ile yıkayın ve beş dakika bekletin.
d. Slaytlardan filtre kağıdı şeritlerini çıkarmak ve şeritleri bir atık kabına yerleştirmek için forseps kullanın. Slaytları suyla durulayın ve boşaltın.
e. Lekeleri asit-alkol solüsyonuyla örtün ve iki dakika bekletin.
f. Tekrar suyla durulayın ve boşaltın.
g. Metilen mavisi ile yıkayın ve bir ila iki dakika zıt boyama yapın.
h. Durulayın, boşaltın ve havayla kurutun.
6. Tüm slaytları yağa daldırma altında inceleyin ve Sonuçlar altındaki gözlemleri kaydedin.
Sorular
1. Diferansiyel leke nedir? Bu tür lekelere iki örnek verin.
2. IsaGramstainanasit-hızlı leke yerine yeterli ikame?
3. Laboratuvardan aside dirençli boyama yapmasını ne zaman istemek uygundur?
4. Klinik geçmiş ve Gram ve aside dirençli yaymalarla ilgili gözlemleriniz ışığında, hastanın hastalığına dair kesin teşhisiniz nedir? Bu ön laboratuvar teşhisi nasıl doğrulanmalıdır?
5. Saprofitik mikobakteri asit hızlı mıdır?
6. Bir klinik örnekte aside dirençli organizmaların varlığı her zaman ciddi klinik hastalığı gösterir mi?
7. Pulmoner Nocardia enfeksiyonundan şüphelenilen bir hastadan alınan balgam örneğinin aside dirençli boyası nasıl yapılmalıdır?
Özel Lekeler
Bazı bakteriler, tanımlanmaları için taksonomik değere sahip olabilen karakteristik yüzey yapılarına (kapsüller veya flagella gibi) ve iç bileşenlere (örn., Endosporlar) sahiptir. Belirli bir organizmanın bir kapsüle sahip olup olmadığını, kamçılı olup olmadığını veya endospor oluşturup oluşturmadığını göstermek gerektiğinde, özel boyama teknikleri kullanılmalıdır.
Pek çok bakteri türü, karbonhidrat veya gliko-proteinden oluşan bir dış kapsüle sahiptir. Streptococcus pneumoniae (bakteriyel pnömoninin başlıca nedeni) ve Klebsiella pneumoniae (pnömoni ve yara ve idrar yolu enfeksiyonlarının bir nedeni) gibi birkaç patojenik tür, fagositik hücrelerin yutulmasını önleyerek virülansa katkıda bulunan iyi gelişmiş kapsüllere sahiptir ve bakterileri öldürmek gerekir.
Kapsüller boyama ajanlarını tutmaz, ancak basit, spesifik olmayan bir negatif boyama tekniği kullanılarak mikroskobik olarak görülebilir hale getirilebilir. Küçük bir damla çini mürekkebi veya nigrosin, bir cam slayt üzerindeki bakteri hücreleri süspansiyonuna eklenir. Bu maddeler hücrelere nüfuz etmez (veya çevreleyen kapsülleri boyar), ancak kapsülleri geride bırakan arka plan lekeleri olarak işlev görür.