Apoptoz
Apoptoz (programlanmış hücre ölümü), hem lenfosit ontogenisi hem de normal bir bağışıklık tepkisinin evriminin bir parçası olarak T hücrelerinin önemli bir işlevidir. Otoimmün lenfoproliferatif sendrom (ALPS), lenfositlerin apoptoza girme yeteneğinin bozulduğu yerde tarif edilmiştir.
Her bir bağışıklık tepkisi ile, enfektif uyaran ortadan kalktığında, lenfositlerin çoğalması, karşılık gelen bir lenfosit ölümüyle dengelenmez. Bu tür hastalarda serum immünoglobulinleri, kanıtlanabilir otoantikorları olan otoimmün hastalıkları, genişlemiş lenf düğümleri ve anormal bir CD4/CD8 T hücresi birikimi ile yüksek periferik kan lenfosit sayısı artmıştır.
Bu klinik tablonun, tümü hücre yüzeyindeki kusurlar veya apoptozun hücre içi sinyal aracıları ile ilgili birçok nedeni vardır. ALPS’nin en yaygın türü, Fas proteinindeki (CD95) mutasyonlardan kaynaklanır. Fas aracılı apoptozdaki kusurları saptamak için, hastanın T hücreleri, onları Fas aracılı apoptoza duyarlı hale getirmek için önce in vitro olarak uyarılır.
Fas molekülüne karşı bir antikor kültüre eklenir. Normal bireylerde, bu tahlilde Fas ligasyonuna yanıt olarak T hücrelerinin büyük bir kısmı apoptoza uğrar. ALPS’li hastalarda bu belirgin şekilde bozulmuştur. Bu şekilde indüklenen apoptoz bir dizi teknikle ölçülebilir, ancak en uygun olarak akış sitometrisi ile ölçülebilir.
Ölçülebilen apoptotik hücrelerin özellikleri arasında nükleer yoğunlaşma (propidyum iyodür boyama ile saptanır), eksternalize fosfatidil serine anneksin V bağlanması, DNA nükleozomal fragmantasyonu (floresan terminal nükleotid uç etiketleme ile saptanır) veya floresan kaspaz substratı Phi kullanılarak kaspaz aktivasyonu bulunur.
Apoptoz ve kanser
Apopitoz nedir
Apoptoz mekanizmaları
Apoptoz Nedir
Apoptoz yolakları
Apoptoz ve nekrozun farkları
Embriyogenez apoptoz
Patolojik apoptoz sonucu
in vivo Testler
T hücre fonksiyonunun in vivo testleri de mümkündür. Antijenleri geri çağırmak için gecikmiş (Gell ve Coombs tip IV) cilt reaktivitesi, T hücresi bağışıklık yeterliliğinin iyi bir göstergesidir. Bu testler ucuz ve hızlıdır ancak küçük çocuklarda kullanıma uygun değildir.
Dermise az miktarda antijen enjekte edilir ve 2-5 gün sonra kızarıklık ve şişme reaksiyonu, bu antijene karşı pozitif bir bağışıklık tepkisi olduğunu gösterir. Bu yanıta esas olarak T hücreleri ve makrofajlar aracılık eder. Yetersiz beslenme, HIV enfeksiyonu ve sarkoidozda ve kortikosteroidler veya diğer immünosupresif tedavi ile baskılanır.
Bununla birlikte, rutin olarak sadece tüberküloz için temas ve bağışıklık testi için yapılır (Heaf testi veya Mantoux testi). Önceki maruziyet veya BCG aşılama durumu bilinmiyorsa, negatif bir testin yorumlanması zordur. Kabakulak, Candida ve tetanoz toksoidi gibi diğer her yerde bulunan antijenler de bu tür tepkileri ortaya çıkarabilir, ancak rutin klinik uygulamada kullanılmazlar.
Doğal öldürücü hücreler
Sitotoksisite, hem CD8+ T hücrelerinin hem de NK hücrelerinin bir fonksiyonudur. CD8+ T hücre sitotoksisitesi antijene özgüdür ve rutin klinik uygulamada ölçülmez. NK hücre sitotoksisitesi, K562 hücre hattının parçalanması ölçülerek uygun bir şekilde değerlendirilebilir. K562 hücreleri, HLA sınıf I ekspresyonundan yoksundur ve bu nedenle NK hücreleri için doğal bir hedeftir.
Hücreler, hücre içi radyoetiketli 51 krom ile yüklenir ve hastanın lenfositleri (efektör NK hücrelerini içeren) ile birlikte inkübe edilir. Hedef hücrelerin sitotoksik lizizi, kromun kültür ortamına salınmasıyla tanımlanır. Akış sitometrisi ile K562 hücrelerinin öldürülmesini değerlendirmek de mümkündür.
Hastanın kendi lenfositlerinden ayırt edilebilmesi için hastanın lökositleri ile inkübasyondan önce hedef hücreler bir floresan lipofilik boya ile etiketlenmelidir. Sitotoksik öldürme, canlı hücreler tarafından dışlanan propidyum iyodür geçirgenlikleri ile tanımlanır.
Her iki yöntemde de öldürme, bir dizi hedef: efektör hücre oranları üzerinden değerlendirilmelidir. NK öldürme kusurları, kısmi albinizm (örn. Chediak-Higashi ve Griscelli sendromları) ile ilişkili nadir immün yetmezliklerde ve ailesel hemofagositik sendromlarda görülür.
B lenfositleri
B hücre fonksiyonu, hastanın serum immünoglobulinleri ve spesifik enfeksiyöz ajanlara ve/veya aşılara karşı antikorları ölçülerek en kolay şekilde değerlendirilir. Düşük antikor seviyeleri bulunursa, aşıya verilen yanıt test edilebilir ve bu, B hücre fonksiyonunun mükemmel bir global göstergesidir. B (ve T) hücre proliferasyonu, pokeweed mitojen tarafından uyarılabilir, ancak bu, immünoglobulin üretimi hakkında hiçbir bilgi vermez.
Bu, uyarılmış B hücrelerinin immünoglobulin bağlayıcı eritrositler içeren agaroz içine kaplandığı bir ters plak tahlili ile test edilebilir. Kompleman eklenir ve kırmızı hücreye bağlı immünoglobulin komplemanı sabitler ve hemolizi indükler.
Böylece, her bir immünoglobulin üreten hücre, çevreleyen hemoliz plağı ile tanımlanabilir. Bu tahlil zaman alıcıdır ve serum antikor testlerinden elde edilmeyen çok az ek bilgi verdiği için artık nadiren uygulanmaktadır.
Nötrofiller
Nötrofiller, organizmaları aktif olarak yutan ve öldüren kısa ömürlü hücrelerdir. En yaygın nötrofil kusuru, bu hücrelerin sayısının azalmasıdır. Bu doğuştan olabilir (örn. Swachmann sendromu veya Kostmann sendromu), ancak çoğunlukla kemik iliği yetmezliğine (örn. ilaçlar veya neoplazmaların neden olduğu) ikincil olarak edinilir. Nötrofillerin fonksiyonel kusurları nispeten nadirdir, ancak in vitro olarak kolayca araştırılabilir.
İstilacı bir organizmayı ortadan kaldırmak için nötrofillerin önce dolaşımdan dokuya göç etmesi gerekir. Bu, kemotaktik uyaranlara yanıt verme ve vasküler endotelyuma yapışma yeteneğini içerir. Nötrofil yapışma ve kemotaktik göç testleri mevcuttur.
Cam yünü, plastik kültür kapları ve kültürlenmiş endotel hücreleri gibi malzemelere yapışma ölçülebilir. Bununla birlikte, bu tür testlerle tespit edilen kusurların tümü lökosit yapışma eksikliği sendromlarından kaynaklanır ve akış sitometrisi ile lökosit integrin ekspresyonunun ölçülmesiyle daha kolay teşhis edilir.
Nötrofil kemotaksisi, kazein ve F-met-leu-phe gibi uyaranlara karşı nötrofil hareketinin mikroskobik gözlemi ile ölçülebilir. Bu, nötrofillerin bir mikro gözenekli filtre ile kemotaktik uyarıcıdan ayrıldığı ve filtreden geçen nötrofillerin ön yüzünün ölçüldüğü bir Boyden odası kullanılarak gerçekleştirilebilir.
Alternatif olarak, bir nötrofil süspansiyonu ve kemotaktik uyaranlar, agaroz jeli içinde kesilmiş bitişik kuyucuklara yerleştirilir ve agaroz altındaki nötrofillerin uyarana doğru hareketi ölçülür. Nötrofil göçü bozuklukları, hiper-IgE sendromu ve Chediak-Higashi sendromunun yanı sıra diğer bazı hastalıklar da dahil olmak üzere birincil immün yetmezlik durumlarında tanımlanmıştır. Bununla birlikte, anormallikler tanısal veya tutarlı değildir.