Proteinler – Farmasötik Analiz İçin Kapiller Elektroforez Yöntemleri – Ayırma Teknolojisi –FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Proteinler
En sonunda, yukarıda belirtilen tüm çabalar, bir CZE yönteminin, ” somatropin ”, ” ” somatropin yığın çözeltisi ” ve ” somatropin monograflarına dahil edilmesine yol açmıştır. Avrupa Farmakopesinde ” enjeksiyon için ”. 71 CZE, 13,2 g / l amonyum fosfat tamponu pH 6,0 ve 195 nm’de UV saptama kullanan deamide gibi yüklü varyantlar için tanımlama prosedürünün bir parçası olarak ve testte kullanılır. formlar.
İnsülin, iyi bilinen biyosentetik olarak üretilen bir protein hormonudur. İnsülinin seyreltik asit muamelesiyle bozunma sorumluluğu, CZE, doğal PAGE ve LC ile belirlendi.
Ana bozunma ürünleri olarak iki tip deamide insülin tanımlanmıştır. Farklı teknikler arasında mükemmel bir korelasyon gözlemlendi. İnsülin ve deamidasyon ürünleri arasında başarılı bir ayırma elde etmek için çalışan tampona zwitteryonların ve ACN’nin ilave edilmesinin gerekli olduğu bulundu.
İnsülini ölçmek için hem bozunma ürünleri hem de yaygın olarak kullanılan koruyucu m-kresol ana bileşikten ayrılmalıdır. Bozunma ürünleri ve m-kresol varlığında insülin deneyi için doğrulanmış bir CZE yöntemi, iki LC yöntemiyle karşılaştırıldı.
850 mM 2- (N-sikloheksilamino) etansülfonik asit ve% 10 (h / h) ACN içeren 50 mM’lik bir sodyum asetat tamponu, daha yüksek ayırma verimliliği ve LC tahlillerinden dört kata kadar daha kısa bir analiz süresi gösterdi. Dahası, ACN buharlaşmasından kaçınıldıysa, tekrarlanabilirlik LC yöntemlerinden daha iyi oldu.
Tagliaro ve arkadaşları tarafından yürütülen bir çalışma. farklı kalsitoninlerin ve kalsitonin triptik sindirimlerinin ayrılması için bir CZE yöntemi geliştirmek, pH’ın kılcal duvara protein adsorpsiyonu üzerindeki etkisini güzel bir şekilde örneklemektedir. Düşük pH, kılcal duvarın yükünü azaltır, böylece elektrostatik etkileşimleri zayıflatır. Alternatif olarak, proteinin pl değerinin üzerinde çalışmak elektrostatik itilmelere neden olabilir.
İki tampon sisteminde, yani 50 mM sitrat tamponu pH 2.5 ve 50 mM borat tamponu pH 9.5’te insan kalsitoninlerinin ve somon kalsitoninin tam bir çözünürlüğü elde edildi. Ayrıca, sitrat tamponunda somon kalsitonininin son dört tripsin parçalama fragmanının ve en azından geçici olarak dokuz ara bölünme ürününün ayrılması sağlandı.
RDNA’dan türetilen proteinlerin çoğu glikosile edilmiştir, yani karbonhidrat grupları polipeptidik zincirde N- veya O-bağlantısı yoluyla kovalent olarak bağlanmıştır. Rekombinant glikoproteinlerin oligosakkarit yapısı, büyük ölçüde gen ekspresyonu için kullanılan sisteme ve kültür koşullarına bağlıdır.
Glikoproteinler genellikle, içinde farklı oligosakaritlerin düzeneklerinin her bir glikosilasyon bölgesine translasyondan sonra eklendiği heterojen glikosile varyant popülasyonları (glikoformlar) olarak bulunur. Karbonhidrat kısımları yapılarında ve işlevlerinde önemli bir rol oynar. Oligosakarit yapısındaki varyasyonlar, çözünürlük, spesifik aktivite, antijenite ve termal denatürasyon gibi birçok protein özelliğini önemli ölçüde etkileyebilir.
Proteinler Nedir
Proteinler nelerdir
Proteinler Biyoloji
proteinlerin birincil ikincil, üçüncül ve dördüncül yapısı
Yapısal proteinler
Globüler proteinler
En çok protein içeren besinler
protein nedir, ne işe yarar
Aynı fermantasyon ortamında aynı proteinin birkaç glikosile edilmiş formu bulunduğunda, bu formların detaylı bir analizi zorunludur. CZE, bu amaç için çok uygundur, çünkü varyantlar, çeşitli sialilasyon, sülfatasyon veya fosforilasyon derecelerinin yanı sıra kütle farklılıkları ile ilgili yük farklılıklarına göre ayrılabilir.
Rekombinant glikoproteinlerin CE’deki ilerlemeleri başka bir yerde tartışılmıştır. Rekombinant insan eritropoietini (rhEPO), biyoteknolojik olarak üretilen bir glikoproteinin önemli bir örneğidir. RhEPO’nun farmasötik müstahzarları artık dünya çapında birçok üreticiden temin edilebilir.
PH, tampon tipi ve organik modifiye edicinin rhEPO.80 glikoformlarının CZE ayrılması üzerindeki etkisini incelemek için sistematik bir yaklaşım kullanıldı. Karma bir tampon, 100 mM asetat-fosfat pH 4.0 ile optimum çözünürlük elde edildi. 1,3-, 1,4- veya 1,5- diaminoalkanların ayırma tamponuna eklenmesi, bu katkı maddelerinin kılcal duvara bağlanması nedeniyle (gliko) proteinlerin çözünürlüğünü iyileştirebilir, böylece EOF ve proteinler ve kaynaşmış silika duvar arasındaki etkileşim.
Bu faydalı etki, tüm ana rhEPO glikoformlarını ayırmak için kullanılmıştır. 1,4-diaminobutanın işletim tamponuna dahil edilmesiyle mükemmel çözünürlük elde edildi. BGE’de üre varlığı, protein agregasyonunu baskılayarak ayrılmaya daha da yardımcı oldu. Sonuçlar, ayrılmanın, glikoformlarda bulunan sialik asitlerin sayısının artması sırasına göre gerçekleştiğini gösterdi.
Yukarıda bahsedilen yöntem daha sonra çalışan tamponu biraz değiştirerek geliştirildi ve makul analiz süresi içinde sekiz bant rhEPO glikoform ayrıldı (bkz.Şekil 2) .82 Yöntemi lazerle indüklenen floresans (LIF) saptama ile uyumlu hale getirmek için, ek uyarlamalar 1,4-diaminobutanın morfolin ile değiştirilmesi dahil gerçekleştirildi.
Son olarak, bir CZE / ESI / MS yöntemi geliştirildi. Hiçbir tampon katkı maddesi kullanılmadı ve çıplak erimiş silika kapiler dinamik olarak poli (etilen imin) kaplı bir kapiler ile değiştirilerek protein adsorpsiyonu önlendi. Ancak bu koşullarda taban çizgisi ayrımı elde edilemedi.
Rekombinant proteinlerin analizi zor olabilir çünkü terapötik doz için gerekli aktif protein miktarları, eklenen büyük miktarlarda eksipiyanlara kıyasla genellikle küçüktür. Eksipiyanlar aynı zamanda, genellikle büyük plazma havuzlarından elde edilen ve kimyasal olarak homojen olarak kabul edilemeyen insan serum albümini (HSA) gibi proteinler olduğunda da özellikle zorluklarla karşılaşılır.
200 mM sodyum fosfat tamponu pH 4.0 ve 1 mM nikel klorürden oluşan bir elektroforetik tampon, rhEPO ve HSA’nın tamamen ayrılmasına ve ayrıca rhEPO’nun birkaç glikoform popülasyonuna ayrılmasına izin verdi.
Nikelin HSA ile seçici olarak etkileşime girdiği gösterildi. İki üreticinin ürünleri analiz edildi ve biyolojik aktivite birimleri açısından çok az kalitatif ancak önemli miktarlarda partiden partiye farklılıklar gösterdi. Peptid haritalama, glikoproteinlerdeki karbonhidrat eklerinin konumlarındaki ve dağılımlarındaki değişiklikleri izlemek için de yararlıdır.
CZE, Çin hamsteri yumurtalık hücrelerinden ifade edilen rhEPO’nun peptit haritasını karakterize etmek için uygulanmıştır. Metodoloji, peptit çözünürlüğünü artırmak, analit-duvar etkileşimlerini azaltmak ve glikopeptit mikroheterojenliğini değerlendirmek için 40 mM sodyum fosfat tamponu pH 2.5 içinde bir iyon eşleştirme maddesi olan 100 mM heptanesülfonik asit kullandı.
Toplam triptik harita, glikosile edilmemiş ve glikosile edilmiş peptitler olmak üzere iki bölgeye ayrıldı ve 16 triptik peptidin ve iki peptitten oluşan bir çift tepe noktasının taban çizgisi ayrılmasıyla sonuçlandı. Endoproteinaz V8 sindirilmiş rhEPO’nun karakterizasyonu için analitik bir yöntem olarak CZE / MS’nin bir değerlendirmesi yapılmıştır.
Kapiler, polietilen glikol (PEG) mevcudiyetinde polibren ile dinamik olarak kaplandı ve ayırmalar, 0.67M formik asit içinde gerçekleştirildi. Glikosilasyon siteleri ve karbonhidrat dal desenleri kolaylıkla değerlendirildi. RhEPO’nun yapısını çözmek için CZE / ESI / MS, matris destekli lazer desorpsiyon / iyonizasyon MS uçuş süresi (MALDI / TOF / MS) ve çevrimiçi LC / ESI / MS aynı anda kullanılmıştır.
Glikoproteinler için, doğal proteinin analizi ve peptit haritalamasının yanı sıra üçüncü bir analitik yaklaşım, oligosakaritlerin enzimatik veya kimyasal bölünme ile salınması ve ardından karbonhidrat haritalama olarak da adlandırılan ayrılmalarıdır.
80 mM amonyum sülfat, 20 mM sodyum fosfat ve 2.0 mM 1,5-diaminopentan içeren optimize edilmiş bir tampon sistemi kullanılarak, sialile kompleks tipte N-bağlantılı glikanlar için bir veri tabanı oluşturulmuştur. Veritabanı rhEPO’dan salınan oligosakaritlerin yapısını doğrulamak için kullanıldı.
En çok protein içeren besinler Globüler proteinler ne işe yarar protein nedir Proteinler Biyoloji Proteinler Nedir Proteinler nelerdir proteinlerin birincil ikincil üçüncül ve dördüncül yapısı Yapısal proteinler