Lipidler – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Dansil klorür (DNS-CI) (1-dimetilaminonaftalin-5-sülfonil-klorür). Bu reaktif başlangıçta protein kimyasına yirmi yılı aşkın bir süre önce son grup analizi için tanıtıldı ve OPA ve fluramın aksine reaksiyonun basitliği ve hem birincil hem de ikincil aminlerle reaksiyona girme kabiliyeti nedeniyle yaygın olarak kullanıldı.
Ayrıca, diğer floresan reaktiflerin aksine, dansil türevleri asit hidrolize karşı stabildir ve bu nedenle hidrolizden önce N-grubu etiketlemede kullanılabilir. Dansil türevlerinin HPLC ayrımları yakın zamanda yayınlandı.
Algılama hassasiyeti düşük pikomol seviyesindedir. Lizin ve daha az ölçüde histidin ve tirozin ile meydana gelebilen yan reaksiyonlar nedeniyle duyarlılık sınırlıdır.
Dabsil klorür (DBS-CI) (4,4-dimetilaminoazobenzen-4-sülfonil-klorür), Amino asitlerin dabsil klorür ile reaksiyonu, UV tespiti (436 nm) kullanılarak pikomol seviyesinde tespit edilebilen bir bileşik üretir. Ürün, oda sıcaklığında stabildir ancak diğer reaktiflerle aynı ilgiyi görmemiştir.
Diaminoarobenzeneisothiocyanate (DABITC) (4-N, N-dimetilamino-arobenzen-4-izotiyosiyanat). Bu reaktif, proteinlerin ve peptitlerin manuel olarak sıralanmasında başarıyla kullanılmıştır.
Tiyohidantoin türevlerinin (DABTH) tespiti, ince tabaka kromatografi plakalarında, türevlendirilmiş amino asitlerin asit buharına maruz bırakıldığında kırmızı lekeler olarak görünmesiyle gerçekleştirilebilir. Son zamanlarda, 436 nm’de UV saptamalı izokratik ters faz sistemi 5 pikomole kadar bir hassasiyet verdi.
Normal Faz Kromatografisi
Ters faz desteklerine kıyasla normal faz desteklerindeki farklı amino asit seçiciliği, aksi takdirde zor olan birçok ayırmanın gerçekleştirilmesine izin verir.
Örneğin, önceden tarif edilen bir yöntemin bir modifikasyonu kullanılarak, bir kolajen hidrolizatında bulunan amino asitlerin çoğu ayrılabilir ve daha da önemlisi, çapraz bağlı kalıntılar hidroksilisinonorlösin ve dehidrolizinonorlösinekan da çözülebilir.
Bu sistemin tek dezavantajı, amino faz kolonunun göreli dengesizliğidir (Bölüm 6). Amino asit ayrımlarının diğer yönleri (yani enantiyomerik ayırmalar) ilerleyen bölümlerde tartışılmaktadır.
HPLC’nin protein kimyasındaki muazzam popülaritesi, mevcut metinde bildirilen ayırma koşullarının bazılarının, ya geliştirilmiş ayırmalar ya da yeni teknolojik ilerlemelerle zaten aşılmış olabileceği anlamına gelecektir. Bu nedenle okuyucuya sadece güncel literatürü düzenli olarak gözden geçirmesi değil, aynı zamanda bu konuyla ilgili düzenli toplantılara da katılması şiddetle tavsiye edilir.
Lipidler Biyokimya
Lipidlerin sınıflandırılması
Lipidler PDF
Lipitler nedir
Tablolarla biyokimya lipidler
Lipid Nedir
Lipitlerin özellikleri
Lipitlerin görevleri
Lipidler
Lipidler olarak adlandırılan bileşikler grubunu içeren birkaç ana sınıf ve alt sınıf vardır. Lipitler, aşağıdakiler dahil olmak üzere çok çeşitli biyolojik işlevleri yerine getirir: (a) enzimde koenzim olarak işlev gören reaksiyonlar; (b) zarlarda yapısal bileşenler olarak hareket etmek; (c) bazı bakteri, bitki ve böceklerin hücre duvarları üzerinde koruyucu dış tabakalar oluşturmak, (d) metabolik yakıt olarak hareket etmek ve (e) metabolik yakıt için bir depolama formu görevi görmek.
Bu bölümde, yağ asitleri, fosfolipidler, sfingolipidler, seramidler, glikosilseramidler, gangliosidler ve asilgliseroller dahil olmak üzere lipidlerin kromatografisini ve saptanmasını tartışacağız.
Ekstraksiyon prosedürlerinin detayları metne dahil edilmemiştir çünkü bunlar hem lipid sınıfına hem de lipitin ekstrakte edildiği kaynağa bağlı olarak büyük farklılıklar gösterir; Ekstraksiyon sistemlerinin ayrıntıları için ilgilenen okuyucu başka bir yere yönlendirilir.
Yağ Asitleri
Yakın zamana kadar, gaz-sıvı kromatografisi (GLC), yağ asitlerinin tanımlanması ve miktarının belirlenmesi için en popüler yöntemdi; ancak, yeni türetme tekniklerinin ve detektör teknolojisindeki gelişmelerin ortaya çıkmasıyla birlikte HPLC, uygulanabilir bir alternatif sunmaktadır.
Yağ asitlerinin analizi için en sık kullanılan HPLC modu, ön kolon türevlendirmesi ile veya olmadan ters fazdır; ek olarak, argentasyon HPLC, türetilmemiş çoklu doymamış yağ asitlerinin belirli konumsal ve geometrik izomerlerinin ayrıştırılması için kullanılmıştır.
Ters fazlı HPLC’de kullanılan sabit faz hemen hemen her zaman ODS’dir, ancak bazen daha kısa alkil zincirleri kullanılmıştır. En popüler olarak kullanılan mobil fazlar arasında metanol-su ve asetonitril-su bulunur.
Yağ asitleri için ters fazlı HPLC’nin çözme gücünün güzel bir örneği, iki farklı mobil faz metanol-su-asetik karışımı kullanılarak bir ODS kolonunda altı farklı Cı yağ asidinin çözüldüğü gösterilmektedir.
Kromatogramlardan, yağ asidinin doymamışlık derecesi arttıkça, tutma süresinin azaldığı ve ayrıca hareketli fazın polaritesinin değişmesi ile yağ asitlerinin farklı konumsal izomerlerinin izole edildiği açıktır.
Suda artan bir asetonitril konsantrasyonu içeren bir mobil faz kullanan bir gradyan sistemi, yağ asitlerinin ayrıştırılması için yaygın olarak kullanılmıştır, ancak yıkama zirvelerinde üst üste binen ‘kritik yağ çiftleri’ ile ilgili bazı problemler kaydedilmiştir.
Asetonitnle-suyun mobil fazlarının, bir ODS durağan fazı ile kombinasyon halinde, hem araşidonik asidin konumsal izomerlerini (suda% 58 asetonitril) hem de linoleik asidin geometrik izomerlerini (suda% 60 asetonitril) çözmek için kullanılabileceği gösterilmiştir.
Aynı yazarlar, beyin gliserofosfolipidlerinden türetilen çoklu doymamış yağ asitlerinin bir karışımı için, çeşitli yağ asitlerinin ve bunların izomerlerinin çözünürlüğünün, farklı üreticiler tarafından sağlanan bireysel ODS kolonları için optimal olan belirli bir asetonitril konsantrasyonuna bağlı olduğunu belirtmişlerdir.
Bununla birlikte, genel olarak, yağ asidinin zincir uzunluğu arttıkça, tutulma süresi artmış ve doymamışlık derecesi arttıkça, tutulma da azalmıştır.
Bitişik yağ asidi türlerinin çözünürlüğünde sorunla karşılaşıldığında, yardımcı olabilecek bir kromatografik sistem,% 0.1 asetik asit içeren mobil tetrahidrofuran-asetonitril-su fazına sahip bir LiChrosorb Hiba ters faz kolonudur.
Türevlendirilmemiş yağ asitlerinin elüsyonunu izlemek için en sık kullanılan detektörler, diferansiyel kırılma indisi detektörleri, hareketli telli alev iyonizasyon detektörleri ve düşük dalga boylarında UV detektörleridir.
Açıkça, bu metotları kullanarak tespit, şu anda çok büyük bir hassasiyet sağlamamaktadır ve bunun gerekli olduğu durumlarda, yağ asitlerinin kolon öncesi türevlendirilmesinden de yararlanılmalıdır.
Yağ asitlerinin HPLC ile kantitatif analizinde, saptamanın hassasiyetini arttırmak için çok sayıda reaktif kullanılmıştır. Oluşturulan en popüler türevler şunları içerir: benzil türevleri; 2-naftasil türevleri; o- ve p-nitrobenzil türevleri; fenasil türevleri; p-bromofenasil türevleri; metoksifenasil türevleri ve l-nafilamid türevleri.
Lipid Nedir Lipidler Biyokimya Lipidler PDF Lipidlerin sınıflandırılması Lipitler nedir Lipitlerin görevleri Lipitlerin özellikleri Tablolarla biyokimya lipidler