Hücreler, steril koşullar altında kültür şişelerinde kültürlenir. Hazırlık genellikle dikey laminer akışlı dolaplarda yapılır, ancak bunsen brülörü ve uygun aseptik teknik ile açık bir tezgah üzerinde yapılabilir. Şişelere eklenen medyum izotonik ve uygun pH değerine sahip olmalıdır ve genellikle fizyolojik olarak dengelenmiş tuz solüsyonlarına dayanır.
Besiyerinin tam bileşimi hücre tipine göre değişebilir. Detaylı tarifler pratik rehber kitaplarda mevcuttur. Renk değişimiyle hücre metabolizmasının tanınmasını sağlamak için bir gösterge boyası eklemek yararlıdır (sağlıklı ve büyüyen hücreler bir asit ortamı üretir).
Büyüme için esansiyel amino asitler ve protein gereklidir ve bunlar genellikle fetal buzağılardan elde edilen serum formunda sağlanır.
Antibiyotikler, ana kaynakları su kaynaklı bakteriler, karbondioksit kaynağından maya ve kontamine reaktiflerden veya operatörden Mycoplasma türleri olan bakteriyel veya fungal kontaminasyona karşı ek bir önlem olarak büyüme ortamına sıklıkla eklenir. İkincisi, hücrelerin virüs büyümesini destekleme yeteneğini ciddi şekilde azaltacaktır.
Bir kez birleşme noktasına ulaşıldığında, hücreler, steril bir silikon kauçuk çubukla ('kauçuk polis' olarak bilinir) fiziksel araçlar kullanılarak veya daha genel olarak, hücrelerin plastiğe bağlanmasını bozan tripsin ve EDTA ile muamele edilerek sıyrılabilir. yüzey ve hücrelerin yuvarlanıp ayrılmasına neden olur.
Hücreler bu aşamada bir hemositometrede sayılabilir ve yeniden süspansiyon için uygun hacim (optimum tohumlama konsantrasyonunu vermek için) hesaplanabilir. Bununla birlikte, deneyimle, gerekli hacmin kaba bir tahmini yeterli olacaktır.
Hücreler daha fazla pasajlanmayacaksa, ör. inokülasyon için hazır tüplerde bulunanlar, daha sonra birleştiklerinde, büyüme ortamı bakım ortamı ile değiştirilir, fark, ikincisinde serum konsantrasyonunun önemli ölçüde azalmasıdır. Bakım ortamındaki hücre kültürü tüplerindeki uyumlu hücreler birkaç gün hayatta kalacaktır, ancak sonunda ortam değişikliklerine rağmen yavaş yavaş bozunacaklardır ve bu noktada atılmaları gerekir.
Virüs araştırmaları için çoğaltılan hücreler, ihtiyaç fazlası olduğunda sıvı nitrojende dondurulmuş tohum havuzları olarak korunabilir. Hücreler, buz kristali oluşumunun hücrelere zarar vermesini önleyen dimetil sülfoksit içeren ortamda süspansiyon haline getirilir. Yenilenen ihtiyaçla veya kullanımdaki hücrelerin bakteriyel kontaminasyonu durumunda, dondurulmuş hücreler hızla çözülebilir ve taze kültürler hazırlanabilir.
Virüs İzolasyonu İçin Klinik Örnekler
Virüs izolasyonu için hücre kültürüne inoküle edilebilecek klinik materyalin doğası üzerinde herhangi bir kısıtlama yoktur. Sıvı örnekleri (örn. Beyin omurilik sıvısı, CSF, tükürük, idrar, vezikül sıvısı, nazofaringeal aspirat, bronkoalveolar lavaj sıvısı, kan, ishalli dışkı) laboratuvara steril bir kapta gönderilebilir ve uygun hücre kültürü tüplerine tek başına veya sonra eklenebilir.
Kuru sürüntülerde virüsler hayatta kalamayacağından, sürüntüler (örneğin konjunktival, boğaz, ülser tabanı, servikal, rektal) viral taşıma ortamına (izotonik sıvı artı mikrobiyal aşırı büyümeyi engellemek için antibiyotikler) bölünmelidir.
Şişeyi, çubuktan ortama mümkün olduğunca fazla hücresel malzeme salmak için vorteksledikten sonra, taşıma ortamı hücre tabakalarına aşılanır. Doku biyopsileri de (örn. Beyin, bağırsak, akciğer) viral taşıma ortamına yerleştirilmelidir. Doku ince bir şekilde kıyılabilir ve hem hücresel hem de süpernatan malzeme kültüre aşılanabilir.
Sitopatik Ne Demek
Sitopatik etki Nedir
Viral replikasyon aşamaları
Virüslerin çoğalması
Virüsler enzim sentezler mi
Virüslerin üretilmesinde kullanılan ortamlar
Sitopatik etki nedir Tıp
Sitopatik etki virüsler
Virüs Büyümesinin Belirlenmesi
Bir klinik örnek hücre kültürü tüplerine inoküle edildikten sonra tüpler, materyalin elde edildiği yere en çok benzeyen koşullar altında inkübe edilir. Çoğu kültür 37 ° C'de tutulur, ancak bazı virüsler, en önemlisi üst solunum yolundakiler, biraz daha düşük bir sıcaklıkta daha iyi büyüyecektir, örn. 33 ° C'de ve% 5 karbondioksit varlığı.
Kültürler, hücre tabakasının havalandırılmasını iyileştiren veya sabit tutulabilen bir silindir tambur üzerinde yavaşça döndürülebilir. Mikrobiyolog için artık zorluk, belirli bir hücre kültürünün içinde virüsün çoğaldığı hücreler içerip içermediğini belirlemektir. Bu hedefe ulaşmak için bir dizi seçenek mevcuttur.
Sitopatik Etkiler
Virüsler hücreler içinde çoğaldığında, hücreler morfolojik değişikliklere uğrayabilir, ör. zar geçirgenliklerinin değişmesi nedeniyle şişme, hücre ölümüne bağlı büzülme, virüs tarafından kodlanan bir füzyon proteininin varlığına bağlı dev çok çekirdekli hücre oluşumu.
Işık mikroskobu altında görülebilen hücresel morfolojideki bu değişiklikler, sitopatik etki (CPE) olarak adlandırılır ve bu değişiklikleri tetikleyen virüslerin sitopatojenik olduğu söylenir. Bu nedenle, bir hücre kültürü içinde bir virüsün varlığı, bir CPE'nin geliştirilmesi için bir ışık mikroskobunun düşük güçlü lensi altında kültürün düzenli olarak incelenmesi (örneğin her gün) ile belirlenebilir.
Bir CPE'nin tam görünümü, hangi virüsün sorumlu olduğuna ve hangi hücre tipinde meydana geldiğine göre değişkendir. Hücreler boyut olarak şişebilir, büzüşebilir veya sinsitiye (dev çok çekirdekli hücreler) dönüşebilir.
Etki, tüm hücre tabakası boyunca yaygın olabilir veya doğası gereği çok daha odaklanabilir. Münhasıran olmasa da ağırlıklı olarak ortasından ziyade çarşafın kenarında görülebilir. CPE'nin gelişme hızı 18 saatten 4 haftaya kadar değişebilir.
Eğitimli bir virolog, tüm bu faktörlerin yanı sıra belirli bir numuneyle ilgili klinik ayrıntıları hesaba katarak, yalnızca CPE'nin ışık mikroskobu gözlemi yoluyla kültürde hangi virüsün bulunduğunu kesin bir şekilde teşhis edebilecektir.
Bu nedenle, 24 saatlik kültürden sonra ortaya çıkan ve ardından tüm hücre yaprağını yok etmek için hızla yayılan balon hücrelerinden oluşan vezikül sürüntüsünden kaynaklanan bir CPE'nin herpes simpleks virüsünden kaynaklanma olasılığı yüksektir.
Bunun tersine, CPE'nin kültürde yalnızca 10 gün sonra, yaprağın merkezinde sadece iki veya üç şişmiş hücre odağında görünmesine neden olan ve önümüzdeki birkaç gün içinde yavaşça yayılan bir vezikül sürüntüsü muhtemelen suçiçeği kaynaklı olabilir. -zoster virüsü. Spesifik virüslere özgü CPE'lerin resimleri gösterilmektedir.
Virüslerin Geçişi
Bir hücre sayfası içindeki virüs replikasyonu, görünür CPE'nin tek nedeni değildir. Yaprağa aşılanan malzeme sitotoksik olabilir, özellikle dışkı örneklerinde sık görülen bir sorun veya alınan tüm önlemlere rağmen diğer mikroorganizmalarla kontaminasyon meydana gelebilir. Bir CPE'nin kökenine ilişkin herhangi bir şüphe varsa, toksik etkinin aksine bir virüsü ayırt etmenin basit bir yolu, varsayılan virüsü geçmeye çalışmaktır.
Kükürt Giderme
Suudi Arabistan Petrol Şirketi, bir tankta veya bir düşük basınçlı ayırıcıda bulunan iyonik sıvı kükürt giderme işlemini önermektedir. Düzen, büyük ölçüde yeni ekipmanın mevcut hidro-işleme reaktörleri ile entegrasyonuna gerek kalmadan rafineriler içinde entegrasyonu ifade eder. Şekil 3.11, bu buluş sahiplerinin önerisinin basitleştirilmiş bir akış diyagramını göstermektedir.
Tipik bir hidro-arıtma sisteminden çıkan atık su ve susuz iyonik bir sıvı ile karıştırılır ve düşük basınçlı bir soğuk ayırıcıya (225–275 IC) gönderilir ve burada temastan sonra iki faz ayrılır. İyonik sıvı içeren hidrokarbon fazı, alttan (geri dönüştürülebilen) iyonik sıvıyı ve üstten kükürt giderilmiş hidrokarbonu elde etmek için bir fraksiyonlama cihazından geçirilir.
Kombine atık su ve iyonik sıvı akışı, bir faz ayırma kabına geçirilir. Su ayrıştırılır ve iyonik sıvı geri dönüştürülmeden önce rejenerasyon için bir vakumlu damıtma ünitesine gönderilir. Kükürt açısından zengin damıtılmış dizel fraksiyonu, kükürt indirgeme işlemine gönderilir.
Su varlığında kükürt ekstraksiyonu için daha az etkinliğe sahip iyonik sıvılar için benzer bir işlem sunulmuştur. Yemi aynı anda su ve iyonik sıvı ile karıştırmak yerine işlem iki aşamada gerçekleştirilir. Hidrokarbon önce yıkanır ve ayrıldıktan sonra iyonik sıvı ile işlemden geçirilir.
Rafinerilere entegre edilen başka bir öneri Chevron’dan geliyor, ancak bu durumda iyonik sıvı destekleniyor. İşlemde, bir hidrokarbon besleme, gözenekli bir destek üzerine çökeltilmiş bir iyonik sıvıdan oluşan bir adsorban ile temas ettirilir ve hidro-işleme aşamasından önce kükürt ve nitrojen bileşiklerini ortadan kaldırmak için yerleştirilir. Adsorban ayrıca bir yağlama yağı üretmek için bir yöntem olarak bir izomerizasyon mum alma aşamasından önce yerleştirilebilir.
Bir kükürt giderme işleminde kullanılacak en uygun iyonik sıvı ile ilgili olarak, literatürdeki çalışmaların çoğu, yalnızca bir kükürt bileşiğinin (normalde dibenzotiyofen) iyonik sıvı içindeki çözünürlüğüne dayanmaktadır. Diğer çalışmalar, bir iyonik sıvı, kükürt içeren bir bileşik ve bir alifatik hidrokarbondan oluşan sistemlerin sıvı-sıvı dengesine odaklanmaktadır.
Bu amaç için önerilen iyonik sıvıların gelişimi, iyonik sıvıların evrimi ile çakışmaktadır. Yakıtlardan seçici olarak sülfür ekstraksiyonu için test edilen ilk iyonik sıvılar, havada kararsız olan su ile reaksiyona giren haloalüminatlardır. Sonraki çalışmalar, heksaflorofosfat ve tetrafloroborat anyonları içeren imidazolyum iyonik sıvılara karşılık geldi.
Bununla birlikte, bu anyonlar, hidroflorik asit gibi hidroliz ürünlerinin belirli koşullar altında olası oluşumunu ifade eder. Halojen içermeyen iyonik sıvıların daha sonra bu ayrışma sorunlarına çözüm olduğu düşünülmüştür. Bis (triflorometilsülfonil) imid anyonunun yüksek fiyatları ve toksisitesi, kullanımı için potansiyel olarak sınırlayıcı faktörler olabilir.
Çelikte kükürt giderme
Yüksek fırında kükürt giderme
Kükürt giderme
Çelikte oksijen giderme
Kükürt giderme tesisi
Kükürt giderme işlemi nasıl ve neden yapılır
Pota metalurjisi
Kükürt giderme prosesleri
Kükürt giderme için sonradan önerilen iyonik sıvıların çoğu anyonda kükürt atomlarına sahiptir. Ayrılmadan sonra yağ fazındaki iyonik sıvı içeriği ihmal edilebilir olsaydı bu bir sorun olmazdı. Bununla birlikte, tuzla gerçekten az miktarda kirlenme (birkaç ppms) belirleyici olabileceğinden, kükürt giderme maddeleri olarak bu tür anyonların kullanımının yüksek riski vardır.
Çevreye zarar vermeyen ve ucuz iyonlar olan asetat veya dialkil fosfat gibi diğer anyonlar ilginç alternatiflerdir. Ayrıca göreve özgü iyonik sıvılar da düşünülebilir. Bu karmaşık iyonik sıvılar, geleneksel olanlarla elde edilen sonuçları dengeleyebilir, ancak genellikle daha pahalıdır ve sentezlenmesi veya satın alınması zordur.
Bu özel görev için iyonik sıvıların taranmasında önemli bir adım Holbrey ve ark. dodekandan dibenzotiofenin ekstraksiyonu için farklı anyonlar ve katyonlar üzerinde çalışan, katyona bağlı olarak kükürt giderme için bu tuzların bir sıralamasını oluşturabilen: alkilpiridinyum piridinyum imidazolium pirolidinyum. Ancak bu, seçicilik gibi daha önemli bir parametreyi ihmal ederken, yalnızca çözünürlüğe dayalı bir sınıflandırmadır.
Şekil 3.12, 298.15 K’da n-heksan C tiyofen C iyonik sıvının sıvı-sıvı dengelerinden elde edilen çözünürlükleri ve seçicilikleri göstermektedir. Seçilen iyonik sıvılar, bu parametrelerin en yüksek değerlerine sahip literatürde bulunanlara karşılık gelir. Çözünürlükler ve seçicilikler için elde edilen yüksek değerler, hepsinin tiyofeni heksandan ayırabildiğini gösterir.
Dearomatizasyon bölümünde açıklandığı gibi, iyonik sıvıların geri kazanımının gerçekleştirilebileceği varsayılarak, seçicilik, en iyi iyonik sıvıyı seçmek için kriter olarak düşünülebilir (her zaman termodinamik açıdan). [C2mim] [EtSO4] kükürt içeren bir anyona sahip olduğu için dikkate alınmazsa, [C2 mim] [OAc] en iyi seçenek olacaktır.
Rodríguez-Cabo vd. bu iyonik sıvının büyük bir kükürt giderme kapasitesine ve yüksek bir seçiciliğe sahip olduğunu göstermişlerdir; bununla birlikte işlemde büyük miktarda aromatik hidrokarbon ekstraksiyonu da gerçekleşir. Bu nedenle, literatürde pratik olarak ihmal edilen bir adım olan iyonik sıvılar ile ekstraksiyon işleminin rafineride uygulanması dikkate alınması gereken kritik bir noktadır.
Bir çözücü içinde sülfür içeren bileşiklerin çözünürlüğünü geliştirmenin bir yolu, bu bileşenleri oksitleyerek daha kolay ayrılabilmelerini sağlamaktır. Bu, oksidatif kükürt gidermenin temelidir. Sülfür bileşiklerini sülfoksitlere ve ardından sülfonlara dönüştürmek için uygun bir oksitleyici ajanın seçimi kritik bir faktördür. İşlemi daha verimli hale getirmek için, genellikle oksidasyon reaksiyonu için bir katalizöre ihtiyaç vardır.
Oksidatif kükürt giderme uygulamasının önemli bir özelliği, nispi veriminin HDS’ninkinden farklı olmasıdır. Oksidatif reaktivite, sülfür türlerinin elektron yoğunluğu daha yüksek olduğunda artar: dibenzotiofen> 4,6-dimetildibenzotiyofen> benzotiyofen tiyofen. Sonuç olarak, geleneksel HDS’deki kolay erimeyen kükürt bileşikleri, oksidatif kükürt giderme ile kolayca çıkarılır.
En yaygın oksitleme sistemi olan H2O2 ve asetik asidin kullanılması, iyonik sıvılar ile oksidatif kükürt giderme için en uygun seçeneklerden biri gibi görünmektedir. Polioksometalatlar da olası katalizörler olarak test edilmiştir.
Diğer bir alternatif, aynı anda çözücüler ve katalizörler olarak çalışan asidik iyonik sıvıların kullanılmasıdır. Bunlar arasında, hidrojen sülfat veya dihidrojen fosfat gibi anyonların seçimi, daha problemli Fenton benzeri veya Brønsted asidik iyonik sıvılar için dikkate alınması ve tercih edilmesi gereken bir seçenektir.
