Pantotenik Asit – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Methanobacterium bryantii’de bulunan kobamidlerin analizinde gradyan ters fazlı HPLC de kullanılmıştır. Nötr pH’ta izokratik ters fazlı HPLC ile ilk saflaştırmadan sonra, 100 mM lityum klorür-metanol ve son mobil faz 100 mM lityum klorür-metanol ile bir C1 sabit faz kullanılarak gradyan HPLC’ye tabi tutuldu. 254 nm’de UV abzorbansı ile saptama, 1 pmol kadar az siyanocobalamin miktarının belirlenmesine olanak verdi.
Biyotin
Biyotin ve analoglarının tespiti ve analizi için mevcut tahliller ya enzime bağlı tahlillere dayanır ya da biotinin avidin için yüksek afinitesini kullanır.
Biyotin için kromatografik analizlerin erken gelişimi, iyon değişim destekleri ile açık kolon kromatografisini kullandı. Teknik son derece zaman alıcıdır ve ayrıca biyotinin zayıf UV emilimi nedeniyle ayrıştırılan ürünlerin saptanması zorlaşır. Bu sorunlar, gradyan HPLC teknikleriyle birleştirilmiş ön kolon türevlendirme prosedürlerinin geliştirilmesiyle sonuçlanmıştır.
Biyotin ve analoglarının analizi için nispeten basit bir yöntem, floresan tespitini (360 nm’de eksitasyon ve emisyon) kolaylaştırmak için türevlendirme ajanları olarak 2,4′-dibromoasetofenon (DBAB) veya 4-bromometil metoksikumarin (MCM) kullanılarak tasarlanmıştır.
Türevlendirmeden sonra, numuneler önce türetme prosedürünün yan ürünlerini çıkarmak için silika üzerinde kromatografiye tabi tutuldu ve daha sonra bir C1 sabit fazına uygulandı. Elüsyon, bir tetrahidro-furan-su gradyanı kullanılarak gerçekleştirildi. DBAB ile derivatizasyon ve 254 nm’de UV saptamanın yaklaşık 0.5 pmol / pl’lik bir saptama limiti verdiği rapor edilmiştir.
MCM türevlerini ve floresan saptamayı kullanarak, duyarlılık sınırının on kat arttığı bildirildi. Bir kütle spektrometresine bağlı bir HPLC sistemi kullanılarak biyotinin DBAB esterleri için eşit derecede yüksek bir hassasiyet bildirilmiştir.
Yağ Asidi
Lipoik asit, lizin kalıntılarının epsilon amino grubu aracılığıyla serbest veya proteine bağlı olabilir. Bağlanan malzemenin% 90’ından fazlası, 24 saat 110 ° C’de 6 M HC1 ile işleme tabi tutularak geri kazanılabilir.
İnce tabaka kromatografisi ile lipoik asit ve türevlerinin analizine yönelik sistemleri açıklayan kapsamlı bir literatür mevcuttur, ancak ters fazlı HPLC, şu anda lipoik asit ve analoglarının ayrılması için tercih edilen yöntemdir.
Bir CIS sabit fazı ve asetik asit içinde% 25 ila% 75 metanol arasında bir mobil faz gradyanı kullanılarak, lipoik asit, dihidrolipoik asit, lipoamid, lipoil glisinamid, 8-metil-lipoik asit dahil olmak üzere on bir lipoik asit türevi çözüldü. 6,9-ditiyononanoik asit, metil tetra-norlipoat S-oksit, tetranorlipoik asit, P-hidroksibisnorlipoik asit, bisnorlipoik asit ve metil lipoat. Elüsyon, türeve bağlı olarak 330 nm, 240 nm veya 285 nm’de UV emilimi ile izlendi.
Pantotenik Asit Nedir
Pantotenik asit Faydaları
Pantotenik asit
Pantotenik asit koenzim A
Pantotenik asit Fiyatı
B5 vitamini
B5 Vitamin
Pantotenik asit eksikliği
Pantotenik Asit
İnce tabaka kromatografisi ve gaz-sıvı kromatografisi dahil olmak üzere pantotenat türevlerinin ayrılması için çeşitli yöntemler mevcuttur. Ters faz, normal faz ve iyon değişimi dahil olmak üzere pantotenatların ayrılması için çeşitli HPLC modları kullanılmıştır.
Ters fazlı HPLC, pantotenat ara ürünlerinin ayrılması için en büyük esnekliği sağlar ve bir dizi fosfat-metanol tamponlu sabit bir C18 modifiye silika fazı kullanarak, CoASH, defosfo-CoA, pantotenik asit, 4′-pantotenik ayırmak mümkün olmuştur. Multivitamin preparatlarında kalsiyum pantotenat konsantrasyonlarının analizi için 0.9 M asetik asit mobil fazı ile birleştirilmiş Cı sabit faz kullanan alternatif bir ters faz sistemi kullanılmıştır.
İyon değişim HPLC, sabit faz olarak güçlü bir anyon değişim desteği (Partisil S A X) ve 196 mM potasyum fosfat, pH 3,9-izopropanol-tiyodiglikol mobil faz kullanılarak biyolojik numunelerde CoASH miktarının belirlenmesi için kullanılmıştır. CoASH’ın pikomol seviyeleri 254 nm’de UV tespiti kullanılarak ölçülebilir.
Antibiyotikler
Bir antibiyotik, mikroorganizmalara karşı büyüme önleyici aktivite gösteren kimyasal bir bileşik olarak tanımlanır. En eski ve en iyi bilinen antibiyotiklerden biri, bir mikrobiyal fermantasyondan bir ürün olarak izole edilen penisilindir; daha sonra, geniş bir aktivite spektrumuna sahip çeşitli kimyasal tipte antibiyotikler keşfedilmiştir.
Dahası, sentetik kimyagerin bu tür molekülleri modifiye etme yeteneği, eşit derecede çok sayıda yarı sentetik antibiyotiğe yol açmıştır. Birçok mikroorganizma, antibiyotikleri zararsız bileşiklere indirgeyebilen enzimler üreterek engelleyici etkinin üstesinden gelmek için mutasyona uğramıştır (örneğin, E. coli’deki P-laktamaz, penisilinlerdeki p-laktam halkasını parçalayabilmektedir).
Antibiyotik direncinin ortaya çıkışı, ilaç endüstrisinin yeni ve kimyasal olarak farklı antibiyotik sınıflarının keşfi için araştırmaya devam etmesini sağlar.
Birçok antibiyotik, in vivo toksik yan etkiler sergiler ve klinik durumda başarılı kullanımları, biyolojik sıvılarda doğru bir şekilde izlenmelerini gerektirir. Benzer şekilde, mikrobiyal fermantasyon broth’larında antibiyotik üretiminin doğru tespiti, üretim sürecinin kritik bir yönüdür.
Geçmişte antibiyotikler, çeşitli seyreltmeler alınarak ve in vitro inhibitör etkileri ölçülerek biyolojik sıvılarda izleniyordu. Bu tür tahlil teknikleri zaman alıcıdır ve ayrıca daha az aktif metabolik ürünlerin miktarının belirlenmesine de izin vermez.
Spektrofotometrik teknikler, ince tabaka kromatografisi, gaz-sıvı kromatografisi ve radyoimmunoassay gibi alternatif saptama yöntemleri geliştirilmiştir, ancak bunların her biri, deneylerinden önce kapsamlı ekstraksiyon veya türetme gereksinimi gibi dezavantajlardan muzdariptir.
Bu nedenle HPLC, antibiyotiklerin analizi ve miktar tayini için tercih edilen yöntem haline gelmiştir. Antibiyotik bileşiklerin çeşitli kimyasal doğası, spesifik HPLC tekniklerini genellemeyi zorlaştırır ve bu nedenle, her bir bileşik sınıfını ayrı ayrı ele almak gerekir.
Bu bölümde sadece ana antibiyotik sınıfları gözden geçirilecek ve geri kalanından sınırlı sayıda örnek alınacaktır. Literatürde çok sayıda antibiyotik için tercih edilen HPLC prosedürlerini içeren mükemmel bir derleme bulunabilir.
Ana antibiyotik sınıfları, p-laktamlar, aminoglikozitler, tetrasiklinler, peptitler, antrasiklinler ve diğerleri olarak alt gruplara ayrılabilir.
Genel Değerlendirmeler
Biyolojik sıvılardaki antibiyotiklerin HPLC analizi, önceden açıklanan teknikler dışında özel numune hazırlığı gerektirmez. Proteinin asit çökeltme veya ultrafiltreleme yoluyla uzaklaştırılması serum numuneleri için tatmin edicidir. İdrar numuneleri için ilk çözücü ekstraksiyonu genellikle yeterli bir temizleme adımı sağlar.
B5 Vitamin B5 vitamini Pantotenik asit Pantotenik asit eksikliği Pantotenik asit Faydaları Pantotenik asit Fiyatı Pantotenik asit koenzim A Pantotenik Asit Nedir