Blog

Kromozom Analizi Sitogenetikçi, tüm kromozom çiftlerinin tanınan normal bantlama paternini gösterdiği konusunda tatmin olursa, normal bir karyotip rapor edilebilir. Karyotipler, ISCN terminolojisi kullanılarak açıklanmıştır. Genel olarak, bu şu sıraya sahiptir: toplam kromozom sayısı, cinsiyet kromozomu yapısı, anormalliğin tanımı (varsa) ve bunların her biri virgülle ayrılır. Böylece normal dişi karyotip formülü 46,XX ve normal erkek karyotipi 46,XY'dir. Bir kromozom anormalliği tespit edildiğinde, uygun karyotip formülü atanır. Her tür yapısal anormallik, ilişkili bir ISCN kısaltmasına sahiptir, örn. yer değiştirme için 't', ters çevirme için 'i' vb yer alır. İlgili kromozomlar ve herhangi bir kesme noktası, atanan karyotipik formüle dahil edilir, örn. Şekil 36.10'da gösterilen anormal karyotip 46,XY,t(5;14)(p15.2;q24.1) formülüne sahiptir. Bu, kromozom 5'in p kolunda 15.2 bandında kırıldığını, kromozom 14'ün ise q kolunda bant 24.1'de kırıldığını gösterir. Anormallik belirsizse veya mikroskobik inceleme ile kırılma noktaları net değilse, karyotiplerin hazırlanması, anormalliğin tam yapısını karakterize etmeye yardımcı olabilir. Eskiden bu, anormal hücrelerin fotomikroskopi kullanılarak fotoğraflanmasını, filmin geliştirilmesini, filmin basılmasını, kromozomların standart karyotip sırasına göre kesilmesini ve yeniden düzenlenmesini içeriyordu. Günümüzde, tanısal sitogenetik laboratuvarlarında karyotip üretimi, özel görüntü analiz sistemleri kullanılarak önemli ölçüde kolaylaştırılmıştır. Bu sistemler, mikroskobu, analiz edilecek metafaz yayılımının dijital görüntüsünü yakalamak için kullanılan bir dijital kameraya bağlar. Özelleştirilmiş sitogenetik yazılım daha sonra, çıktısı alınabilen ve/veya elektronik olarak saklanabilen nihai bir karyotip üretmek için bir bilgisayar ekranında kromozomların düzenlenmesini sağlar. Genetik bozukluklar nelerdir Sayısal kromozom anomalileri Genetik bozukluk neden olur Kalıtsal bozukluklar Tedavisi olmayan genetik hastalıklar Genetik bozukluk tedavisi Kromozom anomalileri Yapısal kromozom anomalileri Edinilmiş Kromozom Anormallikleri İçin Kromozom Analizi Malignitelerin (lösemiler ve katı tümörler) sitogenetik analizi, ilişkili edinilmiş kromozom anormalliklerini saptamak için rutin olarak gerçekleştirilir. Bu tür anormalliklerin tespiti, hastalık teşhisi, hasta prognozu ve tedaviye yanıtın izlenmesi ile ilgili hayati bilgiler sağlar. Edinilmiş kromozom anormallikleri için kromozom analizi, yapısal analizden birkaç önemli farklılık taşır. Edinilmiş kromozom anormallikleri klonaldir ve sadece malign hücrelerle sınırlıdır. Ek olarak, malign hücrelerden elde edilen metafazlar, malign olmayan hücrelere kıyasla tipik olarak daha düşük morfoloji (kısa ve zayıf bantlar) gösterir. İlk olarak, sitogenetik uzmanının küçük klonal anormalliklerin saptanmasını sağlamak için daha fazla sayıda hücreyi analiz etmesi önemlidir (yani, saptanan tüm hücreler anormal klona ait olmayabilir) ve ikinci olarak, önlemek için tüm metafazların temsili bir seçiminin incelenmesi önemlidir. Daha kaliteli fakat muhtemelen habis olmayan hücrelerin yanlışlıkla seçilmesi gerekir. Moleküler Sitogenetik Rutin tanısal sitogenetik alanındaki en son önemli gelişme, 1980'lerde moleküler sitogenetik tekniklerin tanıtılması olmuştur. Floresan in situhibridizasyon (FISH) tekniği ile insan karyotipinin belirli bölgelerini vurgulamak için kullanılabilecek çok çeşitli ticari olarak temin edilebilen problar mevcuttur. FISH, herhangi bir bantlama tekniğinin sınırlarını aşan bazı çok ince anormalliklerin tespit edilmesini sağlar. FISH probları, bantlama teknikleri kullanılarak tespit edilen karmaşık veya tanımlanamayan kromozom anormalliklerini hızlı ve doğru bir şekilde karakterize etmek için de kullanılabilir. Ayrıca, FISH probları, bölünen metafaz yayılımları mevcut olmasa bile, numunelerin önemli sitogenetik anormallikler açısından taranmasına olanak da tanır. Amniyotik sıvı örnekleri, kromozom preparatları üretmek için kültürde yeterli hücrenin büyümesini 2 haftaya kadar beklemek yerine 24 saat sonra FISH tarafından belirli anormallikler için taranabildiğinden, bu hızlı doğum öncesi tanıyı mümkün kılmıştır. FISH, mitotik hücrelerin elde edilmesinin zor olabileceği malignite çalışmalarında da özellikle de yararlıdır. Tüm rutin tanısal sitogenetik laboratuvarları, rutin bantlama yöntemlerini tamamlayan bu FISH testlerine artık çok fazla güveniyor. Birçok durumda FISH testleri aslında alternatif tam karyotip analizinden daha da uygundur. Floresan Hibridizasyonu Floresan in situ hibridizasyon (FISH), güncel genetik araştırma alanlarında önemli bir rol oynayan güçlü bir tekniktir. Kendileri floresan olan veya immünofloresan mikroskopi ile tespit edilebilen kimyasallarla etiketlenmiş tek sarmallı nükleik asit moleküllerinin (sondalar) belirli hedef nükleik asit dizilerini tanımlamak için kullanıldığı bir dizi ilgili prosedürü ifade eder. Sitolojik preparatlarda da bulunması söz konusu olabilir. Teknik doğrudan, ilk olarak 1960'larda Speigleman tarafından öncülük edilen ve mikroskop lamları üzerinde sabit materyaldeki nükleik asit dizilerini tanımlamak için radyo-etiketli problar kullanılarak birkaç grup tarafından uyarlanan orijinal nükleik asit hibridizasyon deneylerinden türetilmiştir. Erken örnekler, Xenopus oositlerinin nükleollerindeki ribozomal RNA genlerinin ve metafaz fare kromozomlarında sentromerik uydu DNA'nın tanımlanmasını içeriyordu. Protokoller o zamandan beri büyük ölçüde gelişmesine rağmen, temel adımlar büyük ölçüde değişmeden kaldı. Tekniğin tüm varyasyonları, bir nükleik asit probu, bir sitolojik preparasyon ve bir saptama sistemi içerir. Tekniğin varyasyonları ve uygulamaları ile karşılaşılmadan önce sistemdeki temel adımlar bu noktada açıklanacaktır. Prob Seçimi Birçok durumda DNA'nın genomik bir klonu kullanılabilir, ancak daha sonra görüleceği gibi, kromozom boyama için başka DNA kaynakları da kullanılabilir. Günümüzde nadiren yapılmasına rağmen bazı uygulamalarda RNA molekülleri kullanılabilir. Prosedür sonunda hibridize materyali tespit etmek için prob kullanımdan önce etiketlenmelidir. Prob tespitinde bir faktörün bir probun uzunluğu olduğunun farkına varmak önemlidir. Aynı etiketleme ve algılama sistemleri altında, daha küçük bir sonda her zaman daha uzun bir sondadan daha zayıf bir sinyal verecektir. Bazı durumlarda 500 baz çifti kadar küçük problar saptanabilse de, yaklaşık 40 kb klonlanmış DNA içeren bakteriyofajdan türetilen vektörler olan kozmidler en popüler prob kaynaklarıdır. Bakteriyel yapay kromozomlar (BAC'ler), P1 yapay kromozomlar (PAC'ler) veya maya yapay kromozomları (YACS'ler) gibi daha büyük ekleri taşıyan vektörlerde klonlanmış DNA, her durumda daha da iyi çalışacaktır.