CEC, LC’nin sabit fazını, benzersiz seçiciliklerin elde edilebildiği CE’nin elektrikle çalışan mobil faz nakli ile birleştiren bir hibrit ayırma tekniğidir. Solütler, her iki faz arasında bölünmelerine ve yüklendiklerinde elektroforetik hareketliliklerine göre ayrılır. CEC, yüksek LC seçiciliği ve yüksek CE verimliliği avantajları nedeniyle ilaçların safsızlık profillemesi için çok uygun görünmektedir. Küçük partikül boyutlarına sahip uzun kolonlar, yüksek pik verimlilikleri ve yüksek pik kapasiteleri oluşturmak için kullanılabilir; bu, safsızlık profili için paha biçilmezdir.

CEC, 3 mm C18 ile paketlenmiş 143 mm’lik bir kolon üzerinde 1,6 dakika içinde isradepin ve altı yan ürününün tekrarlanabilir şekilde ayrılmasını sağladı. CEC, flutikazon propiyonat ve sefuroksim aksetil gibi farmasötik bileşiklerin safsızlık profili için MEKC’ye kıyasla daha seçici olduğu bulundu.

3 mm oktadesilsilil (ODS) silika parçacıkları ile paketlenmiş ev yapımı bir sütun ile flutikazon propiyonat ve safsızlıkları için elüsyon süreleri 35 ila 160 dakika arasında değişiyordu.280 Bununla birlikte, mobil fazın hem pH hem de organik içeriğini artırarak çalışma süresi 10 dakikaya büyük ölçüde düşürüldü ve önceden LC ile tespit edilmeyen bir kirlilik zirvesi ayrıldı.

Benzer bir CEC sistemi kullanılarak, ancak MS tespiti ile flutikazon safsızlıklarının karakterizasyonu mümkün olmuştur. CEC / MS kurulumu, yüksek verimliliğe ulaşılabilen nispeten uzun bir kolon (90 cm) kullanımını gerektirdi.309 Daha sonraki bir çalışmada, CEC ile flutikazonun safsızlık profili, güçlü katyon değişimi (SCX) gibi çeşitli sabit fazlarda gerçekleştirildi. malzemeler, hem ODS hem de SCX fazlarını içeren karma mod malzeme ve normal bir ODS sütunudur.

Karışık mod ve ODS fazları, CEC’de aynı seçiciliğe sahipken SCX fazları, elüsyon sırasının tersine çevrilmesine neden olan oldukça farklı bir seçiciliğe sahipti ve benzer hidrofobiklikteki safsızlıkları ayıramadılar.

Kapiler elektroforez nedir
kılcal (kapiller) elektroforez
Kapiler elektroforez kullanım alanları
Kapiler elektroforez çalışma prensibi
Kapiler elektroforez cihazı NEDİR
Capillary electrophoresis
İmmünoelektroforez
Elektroforez çeşitleri

Prostaglandin ve benzamidofenol, enon ve trans-izomer dahil olmak üzere ilgili safsızlıkları, çeşitli tetrasiklin karışımlarının ayrılması için 3 mm Spherisorb CEC içeren bir C18 kapiler kullanılarak paketlenmiş bir kolon kullanılarak seçici olarak çözüldü ve tetrasiklin için daha iyi ayrımlar ve tepe şekilleri bulundu , OTC ve CZE ayrımlarına kıyasla safsızlıkları; ancak, doksisiklin ve metasiklinin profili elde edilememiştir.34 30 kV’luk bir uygulanan voltajda basınçlı bir CEC sistemi, bir N-metillenmiş C- ve N-korumalı tetrapeptidin metillenmemiş analogundan temel ayrılmasını sağladı.

Tipredan ve daha önce LC ile çözülmemiş olan C-17 diastereoizomeri dahil beş ilgili maddesinin temel ayrımı, LC için kullanılan amonyum asetat tamponunun Tris tamponu ile değiştirilmesiyle gerçekleştirildi. CEC, 2-fenilmetil-1-naftol ve bununla ilgili üç maddenin LC ayrılması için bir yöntem geliştirme aracı olarak kullanılmıştır.

Hızlı ve verimli bir CEC yöntemi geliştirilebilir ve daha sonra rutin uygulama için daha sağlam LC’ye aktarılabilir ve aynı kolon tipinde LC ve CEC ayırmaları arasında bileşiklerin tutma davranışında önemli paralellikler bulunmuştur.

Bu nedenle, benzer sütunlar kullanılarak, yöntemleri CEC’den LC’ye ve muhtemelen tersi yönde aktarmak mümkündür; ancak, bu yaklaşımı değerlendirirken, tekniklerden herhangi birini ayrı ayrı etkileyen faktörlerin tanınması gerekir.

Mevcut bir LC yöntemine dayalı olarak, CEC koşulları, steroidal olmayan analjezik bir ilacın yapısal olarak ilişkili safsızlıklarının ayrılması ve kantitasyonu için optimize edilmiş ve doğrulanmıştır. Optimize edilmiş sistem, ilacın yapısal olarak ilişkili altı safsızlıktan 22 dakika içinde ayrılmasına izin verirken, LC ayırma 75 dakikalık bir toplam döngü süresi gerektirdi.

Tetrasiklin ve bununla ilgili maddelerin analizi için LC, CZE ve CEC teknikleri karşılaştırılmış ve CEC’in en iyi LC ve CE tekniklerini birleştiren ideal teknik olabileceği sonucuna varılmıştır.

CEC’in, Lilly bileşiği LY3000164’teki ilaçla ilişkili safsızlıkların belirlenmesi için LC, CZE ve MEKC’ye tamamlayıcı bir ayırma tekniği olduğu bulundu ve ilaç, 6 dakika içinde üç potansiyel safsızlıktan seçici olarak ayrıldı, oysa LC ayırma uzun bir süre gerektirdi. analiz süresi ve CZE, MEKC ile ayrılabilen, ancak verimsiz nötr safsızlıkları çözemedi.

ACN ve tetrahidrofuran içeren ikili bir çözücü bileşimi kullanan CEC, LC’nin analiz süresinin yaklaşık yarısı içinde norgestimate ve dört bozunma safsızlığının hızlı ve güvenilir bir şekilde ayrılmasını sağladı. Sistem,% 0.1 seviyesinde bozunma safsızlıklarını ölçmek için etkili bir şekilde kullanılabilir. CEC, bir Spherisorb ODS I kolonu ve bir heksilamin içeren mobil faz kullanarak, temel bileşikler fluvoksamin ve stereoizomerinin (potansiyel bir safsızlık) Safsızlık profili için CEC. Hareketli fazda (heksilamin) maskeleme amininin varlığı, bazik bileşiklerin iyi pik şekilleri için önemlidir.

LIF tespiti ve 1,5 mm partikül boyutlu ODS kolonları ile, LC’ye kıyasla daha yüksek zirve sayısına sahip yasadışı metamfetaminin safsızlık profillemesinde büyük ölçüde iyileştirilmiş verimlilik elde edilmiştir. Yüksek oranda floresan bir naftalin kromoforu içeren safsızlıklar için ow ng / ml aralığında iyi hassasiyet elde edilmiştir.

Benzer şekilde, LIF tespiti ile CEC, LC ve MEKC’ye kıyasla eroinin safsızlık profili için önemli ölçüde daha yüksek pik sayısını çözdü.320 Pozitif yüklü bir sabit faz [monodispers poli (glisidil metakrilat-divinilbenzen) mikrosferler, kuaterner amonyum oktadesil grupları ile türetilmiş] kullanarak ve 30 mM fosfat tamponunda% 45 ACN ve% 10 etanol içeren bir mobil faz, pH 8.0, eritromisin A’nın safsızlıklarının birçoğundan temel ayrımı sağlandı, makrolitler ve silika bazlı sabit fazlar arasındaki ters elektrostatik etkileşimler azaltıldı.

CEC, ibuprofen kalite kontrolü için LC’ye alternatif bir teknik olarak kullanılabilir. RP-18 ile paketlenmiş bir kapiler ve pH 2.5 ve ACN’de amonyum format tamponu içeren bir mobil faz kullanılarak ibuprofen ve onun dört safsızlığının ayrılması, LC’ye kıyasla (20 dakika) 32 dakikalık uzun bir çalışma süresi ile sağlanabilir.

Aksine, KT’nin, bilinen ilgili üç safsızlığının ve dahili standart flufenamik asidin CEC ile ayrılması, RP-18 paketlenmiş kapiler ve 50 mM amonyum format pH 3.5, su ve ACN ( 10:20:70, v / v / v) oranıdır.

The post Kılcal Elektrokromatografi – Farmasötik Analiz İçin Kapiller Elektroforez Yöntemleri – Ayırma Teknolojisi – FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).

Amonyum, kalsiyum, potasyum, magnezyum ve sodyum, 4 mM bakır sülfat, 4 mM formik asit ve 3mM 18-taç-6’dan oluşan bir asit Ion Phort BGE’de analiz edildi; asetat, klorür, sitrat, fosfat, sülfat ve tartrat analizi, başka bir tescilli tampon sistemi olan Anitront ve bir Micro-Coatt kapiler yük-tersine çevirme maddesinin kullanılmasını gerektirdi.

Gizli eroin numunelerinde bulunan eroin, ikincil ürünler ve katkı maddelerini hızlı bir şekilde belirleyebilen bir CZE yöntemi, 100 mM potasyum fosfat tamponu pH 3.23.175 içinde 20 mM b-CD kullanılarak açıklanmıştır.Bu koşullar altında, eroin, morfin, 6-monoasetilmorfin (MAM ), asetilkodein, papaverin, kodein ve noskapin başlangıçta 10 dakikadan daha kısa sürede çözüldü. Elde edilen iyi doğrulama sonuçları, ele geçirilen kontrollü ilaç preparatlarının gerçek vakalarına uygulanmasına izin verdi.

Morfin, MAM ve eroinin aynı anda belirlenmesi için çevrimiçi permanganat kemilüminesans (CL) tespiti ile CZE oluşturuldu. B-CD’lerin ayırma verimini iyileştirebileceği ve CL sinyalini artırabileceği bulundu. Bu çalışmada da teyit edildiği üzere, CL, gürültü seviyesini artırmak için nadiren arka plan emisyonu veya saçılımı olduğundan, diğer emisyon prosedürlerinden daha düşük tespit limitleri vermelidir. Ayrıca, az sayıda bileşik kimyasal olarak ışıldadığından, karmaşık matrislerde endojen bileşiklerden minimum etkileşim olmalıdır.

Kumarinler farmakolojik olarak aktiftir ve çok çeşitli hastalıkların tedavisinde kullanılmıştır. Kumarin yapılarının büyük çeşitliliği ve geniş kutupsallıkları, eşzamanlı analizleri için özel problemler ortaya çıkarır. Yakın akraba yedi kumarinin CZE ile ayrılması incelenmiştir.

Optimize edilmiş koşullar, 200 mM borik asit 250 mM tetraborat tamponu pH 8.5 ile toplandı ve Chrysanthemum segetum bitkisinden elde edilen köklerden ve havai kısımlardan ekstraktlarda kumarinlerin belirlenmesine uygulandı. Altı kumarinin taban çizgisi ayrılması 10 dakika içinde elde edildi.

Kapiller elektroforez
PAGE elektroforez
Kapiler elektroforez cihazı NEDİR
Kapiller elektroforez cihazı
Elektroforez çeşitleri
Kapiler zon elektroforez
Kapiler elektroforez kullanım alanları
Kapiler elektroforez çalışma prensibi

Sulu Olmayan Kılcal Elektroforez

Sulu olmayan ortamın kullanımı, hidrofobik bileşiklerin analizi için, sulu ortamdaki düşük çözünürlükleri nedeniyle analiz edilmesi genellikle zor olan yeni çekici olanaklar sundu. Sulu tamponlarda elde edilmesi zor olan seçicilikler, sulu çözücülere kıyasla sulu olmayan çözücülerdeki yakından ilişkili iki madde için iyonize edilmiş, iyonize olmayan dengede daha büyük farklılıklar nedeniyle sulu olmayan sistemler kullanılarak kolayca elde edilebilir.

Metanol, ACN, etanol, formamid, dimetil formamid veya çözünmüş tuzlu DMSO gibi organik çözücüler NACE’de BGE olarak kullanılır. Çalışma tamponunda organik çözücülerin kullanılması, düşük akımlar ve düşük joule ısınması ile sonuçlanarak, yüksek elektrik alan kuvvetlerinin kullanımına izin verir.

Üretilen düşük akımlar yalnızca daha yüksek elektrolit tuz konsantrasyonlarının ve daha yüksek elektrik alan kuvvetlerinin kullanılmasına izin vermekle kalmaz, aynı zamanda daha geniş iç çapa sahip kapilerler kullanılarak örnek yükü ölçeklendirilebilir ve bu da genel algılama hassasiyetinin artmasına neden olur.

Ancak, kalitatif ve kantitatif ölçümler sırasında numunenin ve elektroforez ortamının buharlaşması ciddiye alınmalıdır. Şimdiye kadar, safsızlık profili için NACE kullanan sınırlı sayıda çalışma bildirilmiştir.

NACE’nin, tetrasiklin hidroklorürü, bilinen dört ve birkaç bilinmeyen safsızlıktan 10 dakika içinde oldukça seçici olarak ayırdığı bulunmuştur. Elde edilen seçicilikler, sulu CE ve LC’de elde edilen seçiciliklerle karşılaştırılabilir veya hatta onlardan daha iyidir. Bilinmeyen safsızlıkları ortaya çıkarmak için LC’ye değerli bir katkı olduğu kanıtlanmıştır.

N-metil formamid içinde 500 mM magnezyum asetat tetrahidrat içeren sulu olmayan bir elektroforez ortamı kullanılarak, OTC ve bununla ilgili maddeler ve bir merhemden tek bir aşamada ekstrakte edilen bozunma ürünleri için seçici ayırma gerçekleştirildi.

Yöntemin, çeşitli ekstraksiyon aşamalarından oluşan sıkıcı bir numune ön işlem prosedürü gerektiren LC ve sulu CE’ye göre avantajlı olduğu bulunmuştur. Sonraki bir çalışmada, OTC ve safsızlıklarından üçünün, tetrasiklin, 4-epiyotetrasiklin ve 4-epitetrasiklin ayrılması, NACE tarafından sağlandı ve katı faz ekstraksiyonu ile domuz plazmasındaki bileşiklerin belirlenmesinde başarıyla uygulandı.

ECD’li NACE’nin safsızlık profili oluşturma potansiyeli, suda çözünürlüğü düşük olan trimetoprimdeki safsızlıkların belirlenmesi ile gösterilmiştir. Farklı miktarlarda bir katışkı ile eklenmiş 2 mM trimetoprim içeren numuneler analiz edildi ve% 0.001 seviyesine kadar tespit limitleri elde edildi.

Simetidinin altı safsızlıktan ve bir bozunma ürününden ayrılması için hem sulu hem de susuz sistemler araştırıldı. Sulu sistemle, iki safsızlık çözünmezdi ve simetidin ve onun safsızlıklarından biri için önemli zirve tortusu gözlemlendi. NACE’nin, hidrofobik safsızlıkları daha iyi pik şekilleriyle ayırmada sulu CE’ye göre faydalı olduğu bulunmuştur; ancak, sekiz bileşenin tümü tek bir deneyde ayrılamadı.

BRL29060 ve BRL57138A, SB202026A ve BRL57259 gibi yapısal olarak benzer bazik bileşikler ve imipramin ve desipramin içeren üç test karışımı, ilk iki test karışımı için çalıştırma tamponu olarak ACN / metanol karışımında sodyum asetat2asetik asit kullanılarak NACE ile kısa bir analiz süresi içinde iyice ayrıldı. ve üçüncü karışım için ACN / metanol karışımı içinde sodyum format2formik asit.

Ayrıca, çalıştırma tamponu olarak ACN / metanol karışımında amonyum asetat kullanan NACE / MS ile analiz edildi ve sonuçlar, tüm bileşenlerin tespiti ile uyumluydu, ancak BRL29060 ve BRL57138A’nın yetersiz ayrılması yoktu. Bu nedenle, veriler niteliksel olarak pik kimliğinin doğrulanması ve yöntem optimizasyonunda pik takibi için kullanılmıştır, ancak MS parametreleri tam olarak optimize edilmediği için niceliksel araç olarak kullanılamaz.

Hidrofobik, yakından ilişkili naftalin sülfonik asitler içeren asidik bir test karışımı için, kısa uçlu enjeksiyon kullanan NACE, ayrılması için uygun bulunmuş ve üç bilinmeyen safsızlık tespit edilmiştir.

Penisilin V ve ilgili maddelerin tayini için hem UV hem de MS tespiti ile 20mM amonyum asetat içeren sulu ve susuz CE sistemleri uygulandığında, NACE bazı avantajlar sunsa da, seçicilik ve duyarlılık açısından en iyi sonuçlar ile elde edilmiştir. 

The post Kılcal Elektroforez – Farmasötik Analiz İçin Kapiller Elektroforez Yöntemleri – Ayırma Teknolojisi –FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).

Polarite, farmasötikler gibi küçük organik bileşiklerin analizinde önemli bir rol oynadığından (çoğu organik bileşik nötr olabilir), MEKC’nin tanıtılması bu alandaki uygulamalarda bir patlama ile sonuçlandı. CE ile biyomedikal analizde, MEKC, farmasötik preparatlardaki veya vücut sıvılarındaki ilaçların analizi için tercih edilen tekniktir. Birkaç ilaç grubu önemli bir başarı ile analiz edilmiştir.

Tipik bir MEKC ayırma örneği, levokabastin ilaç maddesinin organik saflığının belirlenmesi için Şekil 13’te gösterilmektedir.68 Bu ürün için orto-, meta- ve para-floro yer izomerlerini HPLC kullanarak ayırmak zordu. Bu nedenle, bir MEKC yöntemi geliştirilmiş, doğrulanmış ve düzenleyici makamlara dosyalanmıştır. Aslında bu yöntem, bir farmakope monografında yayınlanan ilk CE yöntemidir. MEKC başvuruları, Bölüm 5, 6 ve 11’de kapsamlı bir şekilde incelenecektir.

(c) Kiral Kapiler Elektroforez (CCE):

CE, kimyasal ve farmasötik analizlerde kiral bileşiklerin ayrılması için yoğun bir şekilde uygulanmıştır.1,7,58,67269 İlk kiral ayırmalar, Gozel ve ark. 70 tarafından, diastereomerik kompleks oluşumunu kullanarak bazı dansile amino asitlerin enantiyomerlerini ayıran rapor edilmiştir. Cu2þ-aspartam.

Daha sonra Tran ve ark. böyle bir ayırmanın amino asitlerin L-Marfey reaktifi ile türevlendirilmesiyle de mümkün olduğunu gösterdi. Nishi vd. safra tuzlarını kiral selektörler ve misel yüzey aktif maddeler olarak kullanarak bazı kiral farmasötik bileşikleri ayırmayı başardılar.

Bununla birlikte, Fanali, siklodekstrinlerin kiral selektörler olarak kullanımını ilk kez gösterene kadar, uygulama sayısında bir patlama kaydedildi. Siklodekstrinler tampon elektrolitine eklenir ve sonuçta ortaya çıkan hidrofobik inklüzyon, hidrojen bağı ve sterik itme mekanizmaları nedeniyle bir kiral tanıma kolaylıkla elde edilebilir.

Küresel yapıları sayesinde, seçiciler (konakçılar) başka bir (konuk) veya başka bir molekülün bir kısmını uzamsal olarak kapatabilir. Bu nedenle, bu mekanizma aynı zamanda “ev sahibi / misafir” etkileşimi olarak da bilinir. Siklodekstrinlerin yanı sıra, şiral bileşiklerin ayrılması için taç eterler de uygulanmıştır.

Enantiyomerik ayırma, proteinleri kiral selektörler olarak kullanarak da sağlandı. Literatürde açıklanan bir örnek, Leucovorin’in kiral seçici olarak sığır serum albümini (BSA) ile kiral ayrılmasıdır. Transferrin, ovalbumin vb. Gibi diğer proteinler de uygulanabilir.

Siklodekstrinler günümüzde en sık uygulanan kiral seçicilerdir. Hem doğal hem de türetilmiş siklodekstrinler, CCE’de büyük ölçüde uygulanır. Ancak en büyük zorluk, doğru siklodekstrini ve optimum konsantrasyonunda bulmaktır. Şimdiye kadar, hangi siklodekstrinin uygun kiral seçici olacağı teorik gerekçelere dayalı olarak tahmin etmek mümkün olmamıştır.

Seçim, deneme yanılma yaklaşımlarına dayalıdır ve karmaşık, zahmetli ve zaman alan çabalara yol açar. Bu seçimi hızlandırmak ve basitleştirmek için stratejiler önerilmiştir. Doğru kiral seçiciyi seçtikten sonra, test yöntemi sağlamlık ve aktarılabilirlik için optimize edilmelidir.

Bununla ilgili olarak, siklodekstrin konsantrasyonunun, tampon konsantrasyonunun, pH’ın ve örneğin bir organik modifiye edicinin konsantrasyonunun optimizasyonu çok önemlidir. Deneysel çalışmayı azaltmak için deney tasarımı metodolojisi tercih edilen bir yaklaşımdır.

Sonuç olarak, düzenleyici makamlara yeni ilaç başvurularında kabul edilen sağlam, güvenilir ve devredilebilir CE yöntemleri geliştirilebilir. Şekil 14, farmasötik bir bileşenin kiral saflığının belirlenmesi için tipik bir CCE ayrımını gösterir. Görülebileceği gibi, istenmeyen enantiyomerik safsızlık, sadece basit bir fosfat tamponuna optimize edilmiş miktarda siklodekstrin ilave edilerek numunelerde gerekli düşük seviyelere kadar tespit edilebilir.

kapiler elektroforez
Kapiler elektroforez cihazı NEDİR
Kapiler elektroforez kullanım alanları
Kapiler elektroforez çalışma prensibi
Elektroforez
Elektroforez çeşitleri

3. Kapiler Elektrokromatografi

MEKC’de olduğu gibi, CEC, misellerin çok küçük, yani 3 mm’den küçük katı veya yarı katı partiküller ile paketlenmiş veya açık bir kolonda değiştirilmesi gibi büyük farkla, CE ve kromatografi prensiplerini birleştirir. Parçacıklar, sıradan HPLC’den bildiğimiz gibi tipik bir sabit faz oluşturur.

Mobil faz, EOF’den kaynaklanan elektrikle çalıştırılan akış yoluyla elde edilir. CEC’de, çözünen maddelerin ayrılması, kromatografik bölümleme, elektromigrasyon veya her ikisinin bir kombinasyonundan kaynaklanan farklı göç ile elde edilir.

Ayırmalar, paketlenmiş kolonlar kullanılarak veya açık boru şeklinde gerçekleştirilir. 80 Açık boru şeklinde modda, sabit faz, kılcal kolonun iç yüzeyinde kaplanır. CEC neredeyse HPLC’ye benzer, ancak EOF’nin (mobil faz) düz profili ve muhtemelen elektrod dispersiyondan kaynaklanan istifleme etkisi nedeniyle daha yüksek bir ayırma verimliliği ile sonuçlanır.

Ek olarak, EOF geri basınç oluşturmadığından, CEC’de küçük partikül boyutlu fazlar uygulanabilir. Parçacıklar, çözücü, moleküler baskılı polimerler, sürekli monolitik yataklar ve ters fazlı (örneğin ODS C18), normal fazlı, iyon değişimli (SCX) veya boyut dışlama79 özellikli polimer / katmanlı silikat nanokompozitler olabilir.

Hızlı bir EOF sağlamak için tipik olarak CEC yüksek pH’ta gerçekleştirilir ve bu da kısa analiz sürelerine neden olur. Yüksek voltaj uygulamaları ve kısa kapiler uzunluklarla birlikte analiz hızı daha da artar. Daha iyi bölümleme için ayrışmayı azaltmak amacıyla bazen asidik bileşiklerin ayrılması için daha düşük bir pH gerekebilir.

Daha düşük pH’ta CEC, örneğin bir SCX fazı üzerinde sülfonik asit grupları içeren iyon değişim sabit fazları ile gerçekleştirilir. Sülfonik asit grupları, düşük pH’ta iyonize halde kalır ve böylece yeterince yüksek EOF oluşturur. CEC’deki uygulamalar, küçük organik nötr, bazik ve asidik ilaçlardan (kiral bileşikler dahil) peptidlere, proteinlere ve DNA fragmanlarına kadar uzanmaktadır.

CEC teorik olarak ayırma biliminde tercih edilen yöntem olma potansiyeline sahiptir; bununla birlikte, gelişimi kolon üretim proseslerinin son teknolojisine ve kolonların / enstrümantasyonun sağlamlığına bağlıdır.

Dahası, kolondan kolona ayrımların tekrarlanabilirliğini gösteren kanıtların hala oluşturulması gerekmektedir. Ek olarak, Joule ısıtması nedeniyle kılcalda kabarcık oluşumu ve sabit fazdan cam hamurundan açık tüpe geçerken EOF oranlarındaki değişiklikler, paketlenmiş CEC kolonunda hala çok zordur.

Görünüşe göre, açık boru şeklindeki CEC’de monolitik kolonların veya uygulamaların kullanımının bu sorunların çoğunun üstesinden geleceği varsayılmaktadır. Şu anda, sütun teknolojisinin iyileştirilmesi ve “çip üzerinde laboratuvar” ayırmaları için çekici bir seçenek olarak çip-CEC’nin geliştirilmesi için birçok çaba harcanmaktadır. Bölüm 18, CE’deki bu ümit verici teknolojiye ayrılmıştır.

The post Kiral Kapiler Elektroforez – Farmasötik Analiz İçin Kapiller Elektroforez Yöntemleri – Ayırma Teknolojisi –FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).

Kılcal elektroforez tekniği, üç ana yöntem grubuna ayrılır:

(1) Hareketli sınır CE
(2) Kararlı hal CE
􏰃 İzotakoforez (ITP)
􏰃 İzoelektrik odaklama (IEF)
(3) CE Bölgesi
􏰃 Kapiler jel elektroforezi (CGE)
􏰃 Ücretsiz çözüm CE
􏰄 Kapiler bölge elektroforezi (CZE)
􏰄 Misel elektrokinetik kapiler kromatografi (MEKC)
􏰄 Kiral CE (CCE)
􏰃 Kapiler elektrokromatografi (CEC).

En çok bölge kılcal elektroforetik yöntemler uygulanır ve bu nedenle daha ayrıntılı olarak tartışılır. Diğerleri kısaca tartışıldı.

A. Hareketli Sınır CE

Hareketli sınır elektroforezi, 1930’ların sonlarında Tiselius3,7 tarafından tanıtıldı, ancak şimdi zayıf ayırma yeteneklerinden dolayı modası geçmiş hale geldi. Teknik, Bölüm V.C.2’de açıklanan yeni bir CE sisteminin aynı konfigürasyonu kullanılarak bir kapilerde gerçekleştirilebilir. Örnek, enjeksiyon tarafındaki elektrolit bölmesine tek bileşen olarak doldurulur.

Diğer bölmede, numune bileşenlerinin hareketliliğinden daha yüksek bir hareketliliğe sahip bir elektrolit kullanılır. Kapiler ayrıca yüksek hareket kabiliyetine sahip elektroliti içerir ve iki bölmeyi birbirine bağlar. Uygun bir potansiyel uygulayarak, iyonlar üretilen elektrik alanında göç eder.

En yüksek hareketliliğe sahip olan kapilerdeki elektrolit, ilk önce kapiler boyunca hareket eder, ardından numunenin art arda daha yavaş bileşenleri gelir. Belli bir süre sonra, numune bölgesindeki en hızlı bileşik numune yığınından çıkar ve bunu, bir sonraki daha yavaş bileşik ve en hızlı bileşiğin bir karışımını içeren bir bölge izler.

Bu bölgeyi yine üçüncü yavaş bileşik ve ilk iki en hızlı bileşiğin bir karışımını içeren bir bölge izler. Aslında, yalnızca numunenin en hızlı yer değiştiren iyonunun saf bir bölgesini elde etmek mümkündür, bu da yöntemi yapar. Sistematik kullanım için daha az çekici.3,41 Hareketli sınır CE, dökme malzemenin hazırlayıcı olarak ayrılması için ilginç olabilir.

Elektroforez ne amaçla kullanılır
Jel elektroforezi
Elektroforez çeşitleri
Poliakrilamid jel elektroforezi
Kapiller elektroforez
SDS-PAGE elektroforez
Jel elektroforez nedir
Agaroz jel Elektroforezi sonucu yorumlama

B. Kararlı Durum Kapiler Elektroforezi

ITP ve IEF, sabit CE’deki ana temsilci modlardır. Bu yöntemlerde göç açısından belirli bir kararlı durum aşaması elde edilir. Şekil 1’de anlatılana benzer deneysel bir düzene sahip mevcut ticari CE sistemleri bu yöntemlerde kullanılabilir.

Tipik olarak, bir ayırma elde etmek için oluşturulacak bir gradyan gereklidir. “Öncü” ve “sonlandırıcı” elektrolit sistemleri kullanılarak, ITP’de potansiyel bir gradyan oluşturulur. Enjeksiyon yan bölmesi, numune bileşenlerinden çok daha küçük bir hareketliliğe sahip olan “sonlandırıcı bir elektrolit” ile doldurulmuştur.

Saptama tarafındaki kılcal boru ve bölme, numune bileşenlerinden daha yüksek bir hareketliliğe sahip bir “önde gelen elektrolit” ile doldurulur. Numune, kılcal damarın girişinden küçük bir tıpa içine enjekte edilir. Uygun bir voltaj uygulandığında, iyonlar hareketliliklerine göre göç eder. Önce, önde gelen elektrolit, ardından ardışık hareket kabiliyetine sahip numune bileşenleri ve son olarak sonlandırıcı elektrolit yer alır.

Birbirinden uzağa göç etme eğiliminde olan bölgelerin farklı göç hızları nedeniyle yüksek verimli ayırmalar sağlanabilir. Bölgelerin ayrılması, kılcal kısımların yalnızca su ile dolu olacağı (çok düşük iletkenlikle) ve akım akışının kesileceği anlamına gelecektir. Kılcal damar boyunca akım akışını sürdürmek için, bölgeler ayrı fakat birbirine bitişik göç eder.

Potansiyel gradyan her bölge içinde sabittir, ancak bölgeden bölgeye aşamalı olarak artar.122,7,19 ITP çok yüksek çözünürlüklü ayrımlara neden olur, ancak yalnızca iyonik bileşiklerin ayrılması için faydalıdır. EOF oluşumunu önlemek için genellikle ön işlem görmüş kılcal damarlar gerektirir. ITP, diğer CE tipi ayırmalardan önce örnek ön konsantrasyon adımı olarak faydalarını göstermiştir.

IEF’de tipik olarak amfolitten oluşan elektrolit sistemleri tarafından üretilen bir pH gradyanı kullanılır. Elektroozmozdan kaçınmak için kaplanmış bir kılcal damar kullanılır. IEF modu, özellikle proteinler, peptitler, amino asitler gibi zwitter iyonik bileşiklerin yanı sıra çeşitli ilaçların ayrılması için de uygundur.

Numunenin enjekte edilmesinden ve potansiyelin uygulanmasından sonra, numune bileşenleri, net yüklerinin sıfıra eşit olduğu kapilerdeki bir pH’a göç eder. Bu noktada, izoelektrik nokta, bir bileşiğin hareketliliği de sıfıra eşittir ve bu nedenle bileşiğin göçü durdurulur.

PH gradyanının odaklanma etkisi nedeniyle bant genişlemesinden kaçınılır. Bir sonraki adımda bölgeler dedektöre getirilir ve kılcal damarlardan çıkarılır (örneğin bir basınç farkı uygulayarak). 1,7,19 IEF uygulamaları Bölüm 12 ve 16’da verilmektedir.

C. ZoneKapiller Elektroforez

Bu yöntem grubunda, numune bileşenleri, bir jel (CGE) veya bir elektrolit (serbest çözelti CE) olabilen bir ortam içinde kapiler boyunca bölgeler içinde farklı şekilde hareket edebilir. Bölge elektroforezi için ticari CE sistemlerinin deneysel kurulumu, Şekil 1’de sunulana benzer.

1. Kılcal Jel Elektroforezi

CGE’de kılcal, kılcal kısımda polimerik bir ağ56 oluşturan bir poliakrilamid veya agaroz jel ile doldurulur ve analitler jelin gözeneklerinden geçerken türlerin moleküler boyuta göre ayrılması için bir moleküler eleme mekanizması sağlar (ayrıca yük yoğunluğunu belirler). . Ek olarak, jel difüzyon nedeniyle bölge genişlemesini önler ve duvar adsorpsiyonunu ve elektroozmozu önler.

Son derece yüksek verimli (metre başına 30 milyon teorik plaka) ayırmalar elde edilmiştir. CGE, Bölüm 14 ve 15’te kapsamlı bir şekilde tartışılacağı gibi, proteinler, polinükleotitler ve DNA fragmanları gibi büyük biyomoleküllerin ayrılması için özellikle faydalıdır.

Geleneksel levha jel elektroforezine göre önemli avantajları vardır: küçük numune gereksinimi, otomasyon, yüksek hassasiyet, yüksek verim, hızlı ve verimli moleküler kütle belirleme, iz kantitasyonu ve çok çeşitli büyük biyomoleküllere uygulanabilir.

Bu alandaki kapiler dizili aletlerin uygulanması, yüksek verim için çok tipiktir. CGE, genomik alanında tercih edilen yöntemdir ve yüksek verimli araçların piyasaya sürülmesi sayesinde, gen dizilimi bugün büyük ölçüde de ilerlemiştir.

The post CE’DE YÖNTEM VE MODLAR – Farmasötik Analiz İçin Kapiller Elektroforez Yöntemleri – Ayırma Teknolojisi –FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).

Son on yılda CE, farmasötik analiz için olgun bir ayırma tekniği haline geldi. Literatürde farmasötik Ar-Ge laboratuvarlarından ve akademiden çok sayıda onaylanmış yöntem bildirilmiştir. Bilgiler, kimlik, API testi, saflık belirleme, enantiyomerik ayırma ve stokiyometri belirlemeyi kapsar (Bölüm 7). Ek olarak, stabilite gösteren sıvı kromatografik yöntemlerin geliştirilmesi sırasında CE sıklıkla ortogonal bir teknik olarak uygulanmaktadır.

Sonuç olarak, CE, farklı ilaç şirketlerinin çeşitli düzenleyici sunumlarına dahil edilmiştir. Farmasötik analiz alanında gelişmiş bir ayırma tekniği olarak CE’nin artan ilgisi ve uygulaması, düzenleyici otoriteler tarafından kabul görmektedir. CE, Amerika Birleşik Devletleri Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) ve Uluslararası Uyum Konferansı’ndan (ICH) farklı kılavuz belgelerde özel bir analitik teknik olarak dahil edilmiştir.

CE ile ilgili genel bir monografi, Avrupa Farmakopesi (EP), Birleşik Devletler Farmakopesi (USP) ve Japon Farmakopesi’ne (JP) dahil edilmiştir. Ek olarak, CE, örneğin kimlik doğrulama testi veya enantiyomerik saflık testi gibi birkaç ürün için bir dizi spesifik monografta yer alır. Analitik kapiler elektromigrasyon terminolojisine ilişkin isimlendirme önerilerindeki farklılıkları önlemek için, teknikler Uluslararası Saf ve Uygulamalı Kimya Birliği (IUPAC) tarafından yayınlanmıştır. Bir kayıt dosyasında CE yöntemleri kullanılıyorsa, düzenleyici onayı yerine getirirken ICH yönergeleri izlenmelidir.

VIII. KAPILLAR ELEKTROFOREZ ENSTRÜMANTASYONUNUN NİTELİKLERİ

CE enstrümantasyonunun yeterliliği, risk analizi aracı olarak arıza modu ve etki analizi kullanılarak gerçekleştirilir (bkz. Bölüm 8). Cihaz, bileşen modülleri açısından incelenir ve bu bileşenlerin olası arızaları belirlenir. Bu arızaların potansiyel etkisi tanımlanır ve risk karakterize edilir.

Bu arızalara ilişkin mevcut herhangi bir değerlendirme belirlenir ve riski azaltmak için önerilen eylemler tanımlanır. Satıcılar tarafından sağlanan yeterlilik dosyalarının yanı sıra, şu anda, CE araçlarının operasyonel yeterliliği hakkında yayınlanmış çok az bilgi var gibi görünmektedir. FDA tarafından Kalite Risk Yönetimi için Endüstri Rehberi’nde sağlanan en son düşünce, tüm yeterlilik faaliyetlerinin risk temelli bir yaklaşım kullanılarak gerçekleştirilmesi gerektiğini önermektedir. Risk göz önünde bulundurulduğunda, değerlendirilen araç ” hastanın korunması ” bağlamında incelenmelidir.

Analitik araçların, verilerin geçerliliği, ilaç ürünlerinin güvenliliği ve etkililiğinin belirlenmesi veya ilaç ürününün ürün kalitesi üzerinde etkisi olabilir. İlaç ürününün kimliğini veya gücünü de etkileyebilirler ve bu nedenle, aletin yaşam döngüsü boyunca risk yönetimi gerçekleştirmek önemlidir. Bazı durumlarda, gayri resmi risk yönetimi süreçlerinin kullanımı da kabul edilebilir.

IX. CE YÖNTEMLERİNİN SAĞLAMLIK TESTLERİ

Biyomedikal ve farmasötik analizde, özellikle ilaç endüstrisinde, düzenleyici kurumlar tarafından belirlenen katı düzenlemeler nedeniyle elde edilen analitik sonuçların kalitesine çok dikkat edilir (Bölüm 9). Sonuç olarak, sağlamlık testi giderek daha önemli hale geldi. ICH yönergeleri, sağlamlığı “Analitik bir prosedürün sağlamlığı, yöntem parametrelerindeki küçük ancak kasıtlı varyasyonlardan etkilenmeden kalma kapasitesinin bir ölçüsüdür ve normal kullanım sırasında güvenilirliğinin bir göstergesini sağlar.”

Sağlamlık testi, yöntemin sağlamlığını değerlendirmek için uygulanan deneysel düzendir. ICH kılavuzları ayrıca şunu da belirtmektedir: ” Sağlamlık değerlendirmesinin bir sonucu, her kullanıldığında analitik prosedürün geçerliliğinin sürdürülmesini sağlamak için bir dizi sistem uygunluk parametresinin (örneğin, çözünürlük testleri) oluşturulması olmalıdır. ” İkincisi Sağlamlık tanımı, en yaygın olarak uygulandığı için Bölüm 9’da kullanılmıştır.

ICH yönergelerinde henüz sağlamlık testleri zorunlu olmamakla birlikte, Amerika Birleşik Devletleri’nde ilaçların tescili için FDA tarafından talep edilmektedir. Böyle bir sağlamlık testinin sonuçlarının oluşturulması ve işlenmesi aynı Bölümde tartışılmaktadır. Ayrıca, CE yöntemlerinin sağlamlık testi uygulamalarının bir literatür taraması ve eleştirisi sağlanmıştır.

Elektroforez çeşitleri
Kağıt elektroforezi
Jel elektroforezi
PCR elektroforez yöntemleri
Elektroforez nasıl yapılır
Kağıt elektroforezi nedir
Elektroforetik yöntemler
Jel elektroforez tekniği nedir

X. ANALİTİK YÖNTEMLERİN DOĞRULANMASI

Doğrulama, bir yöntemin amaçlanan amacı için kabul edilebilir olduğunu kanıtlama sürecidir. Doğrulananların sonuçlar değil yöntem olduğuna dikkat etmek önemlidir (Bölüm 10). Herhangi bir analitik yöntemin en önemli yönü, sonuçta ürettiği verilerin kalitesidir.

Yeni bir analitik yöntemin geliştirilmesi ve doğrulanması bu nedenle yinelemeli bir süreç olabilir. Doğrulama çalışmalarının sonuçları, prosedürde bir değişikliğin gerekli olduğunu ve daha sonra yeniden doğrulama gerektirebileceğini gösterebilir. Bir yöntem rutin olarak kullanılmadan önce doğrulanması gerekir. Farklı performans özellikleri farklı doğrulama kriterleri gerektireceğinden, bir analitik yöntemi doğrulamak için bir dizi kriter vardır.

Dikkate alınması gereken çeşitli doğrulama özellikleri doğruluk, kesinlik, özgüllük, saptama sınırı, kantitasyon sınırı, doğrusallık ve resmi yönergelere uygun aralıktır. Doğrulama gereksinimleri, yöntemin amacına göre tanımlanmalıdır.

Analitik yöntemlerin doğrulanması, genellikle kalite güvence sistemlerinin içsel bir gerekliliği olarak kabul edilir. Kalite kontrol analitik yöntemleri için test performansının ve yeterlilik testinin gerçekleştirilmesi ve yorumlanması için çeşitli onaylanmış referanslar (öneriler ve kılavuzlar) vardır.

Farmasötik yöntemler için USP, ICH ve FDA tarafından belirlenen yönergeler, bu tür doğrulamaların gerçekleştirilmesi için bir çerçeve sağlar. Bu nedenle, elektroforetik prosedürleri değerlendirirken, dünyanın her yerinde kabul edilebilmesi için doğrulama, bu mevcut kılavuzlarla sıkı bir şekilde uyumlu olmalıdır. CE için, olgun ancak daha genç bir teknik olarak, doğrulama çalışmalarının belirli bir yöntemin uygunluğuna dair daha güçlü kanıt sağlaması gerekir.

XI. FARMAKOPÖYLERDE CE YÖNTEMLERİ İHTİYACI

Çeşitli uluslararası farmakopeler, dünya çapında ilaçların kalitesini sağlamaya yardımcı olur. Bu farmakopeler, monograflarını sürekli olarak gözden geçirir ve revize eder. Bir ilacın üretim süreci değiştirilirse farklı bir safsızlık profili beklenebilir; bu, farmakopelere dahil edilmesi gereken yeni analitik yöntemlerin geliştirilmesiyle sonuçlanır. Daha önceki baskılarda, tanımlama ve saflık değerlendirme amaçları için renk reaksiyonları gerçekleştirildi.

Günümüzde, farmakopeler kromatografik yöntemlerden yararlanmakta ve daha az duyarlı TLC yöntemlerini HPLC testleri ile değiştirmeye çalışmaktadır. Bununla birlikte, bir ilacın safsızlık değerlendirmesini belirlemek için bazen HPLC’den daha faydalı olsalar bile, CE yöntemleri nadiren kullanılmaktadır (Bölüm 11). CE şu anda, özellikle peptidler ve proteinler durumunda EP ve USP’de kullanılmaktadır. Yeni uygulamalar için bu yöntemler ve bakış açıları aynı Bölümde verilmiştir.

XII. İLAÇLARIN SAFLIK PROFİLİNDE CE

Bölüm 12, safsızlık profillemesinde CE’nin olası uygulamalarını göstermektedir. Tekniğin yüksek tepe kapasitesi nedeniyle CE, ana ilaç bileşiğini genellikle ilgili bir kimyasal yapıya sahip olan olası safsızlıklarından ayırmak için son derece uygundur. Dahası, elde edilen yüksek verimlilikler ve düşük reaktif tüketimi, birçok ilaç analizi durumunda CE’yi HPLC’ye uygun bir alternatif haline getirir.

Düzenleyici otoriteler, halk sağlığı ve eczacılık endüstrisi için safsızlık profillemesinin uygunluğuna kısa bir giriş yaptıktan sonra, çeşitli CZE, susuz CE, MEKC, mikroemülsiyon elektrokinetik kapiller kromatografi, CGE ve CEC uygulamaları sunulmaktadır.

The post ELEKTROFOREZ YÖNTEMLERİ – FARMASÖTİK ANALİZ İÇİN KAPILLER ELEKTROFOREZ YÖNTEMLERİ – Ayırma Teknolojisi –FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).