Amonyum, kalsiyum, potasyum, magnezyum ve sodyum, 4 mM bakır sülfat, 4 mM formik asit ve 3mM 18-taç-6’dan oluşan bir asit Ion Phort BGE’de analiz edildi; asetat, klorür, sitrat, fosfat, sülfat ve tartrat analizi, başka bir tescilli tampon sistemi olan Anitront ve bir Micro-Coatt kapiler yük-tersine çevirme maddesinin kullanılmasını gerektirdi.

Gizli eroin numunelerinde bulunan eroin, ikincil ürünler ve katkı maddelerini hızlı bir şekilde belirleyebilen bir CZE yöntemi, 100 mM potasyum fosfat tamponu pH 3.23.175 içinde 20 mM b-CD kullanılarak açıklanmıştır.Bu koşullar altında, eroin, morfin, 6-monoasetilmorfin (MAM ), asetilkodein, papaverin, kodein ve noskapin başlangıçta 10 dakikadan daha kısa sürede çözüldü. Elde edilen iyi doğrulama sonuçları, ele geçirilen kontrollü ilaç preparatlarının gerçek vakalarına uygulanmasına izin verdi.

Morfin, MAM ve eroinin aynı anda belirlenmesi için çevrimiçi permanganat kemilüminesans (CL) tespiti ile CZE oluşturuldu. B-CD’lerin ayırma verimini iyileştirebileceği ve CL sinyalini artırabileceği bulundu. Bu çalışmada da teyit edildiği üzere, CL, gürültü seviyesini artırmak için nadiren arka plan emisyonu veya saçılımı olduğundan, diğer emisyon prosedürlerinden daha düşük tespit limitleri vermelidir. Ayrıca, az sayıda bileşik kimyasal olarak ışıldadığından, karmaşık matrislerde endojen bileşiklerden minimum etkileşim olmalıdır.

Kumarinler farmakolojik olarak aktiftir ve çok çeşitli hastalıkların tedavisinde kullanılmıştır. Kumarin yapılarının büyük çeşitliliği ve geniş kutupsallıkları, eşzamanlı analizleri için özel problemler ortaya çıkarır. Yakın akraba yedi kumarinin CZE ile ayrılması incelenmiştir.

Optimize edilmiş koşullar, 200 mM borik asit 250 mM tetraborat tamponu pH 8.5 ile toplandı ve Chrysanthemum segetum bitkisinden elde edilen köklerden ve havai kısımlardan ekstraktlarda kumarinlerin belirlenmesine uygulandı. Altı kumarinin taban çizgisi ayrılması 10 dakika içinde elde edildi.

Kapiller elektroforez
PAGE elektroforez
Kapiler elektroforez cihazı NEDİR
Kapiller elektroforez cihazı
Elektroforez çeşitleri
Kapiler zon elektroforez
Kapiler elektroforez kullanım alanları
Kapiler elektroforez çalışma prensibi

Sulu Olmayan Kılcal Elektroforez

Sulu olmayan ortamın kullanımı, hidrofobik bileşiklerin analizi için, sulu ortamdaki düşük çözünürlükleri nedeniyle analiz edilmesi genellikle zor olan yeni çekici olanaklar sundu. Sulu tamponlarda elde edilmesi zor olan seçicilikler, sulu çözücülere kıyasla sulu olmayan çözücülerdeki yakından ilişkili iki madde için iyonize edilmiş, iyonize olmayan dengede daha büyük farklılıklar nedeniyle sulu olmayan sistemler kullanılarak kolayca elde edilebilir.

Metanol, ACN, etanol, formamid, dimetil formamid veya çözünmüş tuzlu DMSO gibi organik çözücüler NACE’de BGE olarak kullanılır. Çalışma tamponunda organik çözücülerin kullanılması, düşük akımlar ve düşük joule ısınması ile sonuçlanarak, yüksek elektrik alan kuvvetlerinin kullanımına izin verir.

Üretilen düşük akımlar yalnızca daha yüksek elektrolit tuz konsantrasyonlarının ve daha yüksek elektrik alan kuvvetlerinin kullanılmasına izin vermekle kalmaz, aynı zamanda daha geniş iç çapa sahip kapilerler kullanılarak örnek yükü ölçeklendirilebilir ve bu da genel algılama hassasiyetinin artmasına neden olur.

Ancak, kalitatif ve kantitatif ölçümler sırasında numunenin ve elektroforez ortamının buharlaşması ciddiye alınmalıdır. Şimdiye kadar, safsızlık profili için NACE kullanan sınırlı sayıda çalışma bildirilmiştir.

NACE’nin, tetrasiklin hidroklorürü, bilinen dört ve birkaç bilinmeyen safsızlıktan 10 dakika içinde oldukça seçici olarak ayırdığı bulunmuştur. Elde edilen seçicilikler, sulu CE ve LC’de elde edilen seçiciliklerle karşılaştırılabilir veya hatta onlardan daha iyidir. Bilinmeyen safsızlıkları ortaya çıkarmak için LC’ye değerli bir katkı olduğu kanıtlanmıştır.

N-metil formamid içinde 500 mM magnezyum asetat tetrahidrat içeren sulu olmayan bir elektroforez ortamı kullanılarak, OTC ve bununla ilgili maddeler ve bir merhemden tek bir aşamada ekstrakte edilen bozunma ürünleri için seçici ayırma gerçekleştirildi.

Yöntemin, çeşitli ekstraksiyon aşamalarından oluşan sıkıcı bir numune ön işlem prosedürü gerektiren LC ve sulu CE’ye göre avantajlı olduğu bulunmuştur. Sonraki bir çalışmada, OTC ve safsızlıklarından üçünün, tetrasiklin, 4-epiyotetrasiklin ve 4-epitetrasiklin ayrılması, NACE tarafından sağlandı ve katı faz ekstraksiyonu ile domuz plazmasındaki bileşiklerin belirlenmesinde başarıyla uygulandı.

ECD’li NACE’nin safsızlık profili oluşturma potansiyeli, suda çözünürlüğü düşük olan trimetoprimdeki safsızlıkların belirlenmesi ile gösterilmiştir. Farklı miktarlarda bir katışkı ile eklenmiş 2 mM trimetoprim içeren numuneler analiz edildi ve% 0.001 seviyesine kadar tespit limitleri elde edildi.

Simetidinin altı safsızlıktan ve bir bozunma ürününden ayrılması için hem sulu hem de susuz sistemler araştırıldı. Sulu sistemle, iki safsızlık çözünmezdi ve simetidin ve onun safsızlıklarından biri için önemli zirve tortusu gözlemlendi. NACE’nin, hidrofobik safsızlıkları daha iyi pik şekilleriyle ayırmada sulu CE’ye göre faydalı olduğu bulunmuştur; ancak, sekiz bileşenin tümü tek bir deneyde ayrılamadı.

BRL29060 ve BRL57138A, SB202026A ve BRL57259 gibi yapısal olarak benzer bazik bileşikler ve imipramin ve desipramin içeren üç test karışımı, ilk iki test karışımı için çalıştırma tamponu olarak ACN / metanol karışımında sodyum asetat2asetik asit kullanılarak NACE ile kısa bir analiz süresi içinde iyice ayrıldı. ve üçüncü karışım için ACN / metanol karışımı içinde sodyum format2formik asit.

Ayrıca, çalıştırma tamponu olarak ACN / metanol karışımında amonyum asetat kullanan NACE / MS ile analiz edildi ve sonuçlar, tüm bileşenlerin tespiti ile uyumluydu, ancak BRL29060 ve BRL57138A’nın yetersiz ayrılması yoktu. Bu nedenle, veriler niteliksel olarak pik kimliğinin doğrulanması ve yöntem optimizasyonunda pik takibi için kullanılmıştır, ancak MS parametreleri tam olarak optimize edilmediği için niceliksel araç olarak kullanılamaz.

Hidrofobik, yakından ilişkili naftalin sülfonik asitler içeren asidik bir test karışımı için, kısa uçlu enjeksiyon kullanan NACE, ayrılması için uygun bulunmuş ve üç bilinmeyen safsızlık tespit edilmiştir.

Penisilin V ve ilgili maddelerin tayini için hem UV hem de MS tespiti ile 20mM amonyum asetat içeren sulu ve susuz CE sistemleri uygulandığında, NACE bazı avantajlar sunsa da, seçicilik ve duyarlılık açısından en iyi sonuçlar ile elde edilmiştir. 

The post Kılcal Elektroforez – Farmasötik Analiz İçin Kapiller Elektroforez Yöntemleri – Ayırma Teknolojisi –FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).

Kılcal elektroforez tekniği, üç ana yöntem grubuna ayrılır:

(1) Hareketli sınır CE
(2) Kararlı hal CE
􏰃 İzotakoforez (ITP)
􏰃 İzoelektrik odaklama (IEF)
(3) CE Bölgesi
􏰃 Kapiler jel elektroforezi (CGE)
􏰃 Ücretsiz çözüm CE
􏰄 Kapiler bölge elektroforezi (CZE)
􏰄 Misel elektrokinetik kapiler kromatografi (MEKC)
􏰄 Kiral CE (CCE)
􏰃 Kapiler elektrokromatografi (CEC).

En çok bölge kılcal elektroforetik yöntemler uygulanır ve bu nedenle daha ayrıntılı olarak tartışılır. Diğerleri kısaca tartışıldı.

A. Hareketli Sınır CE

Hareketli sınır elektroforezi, 1930’ların sonlarında Tiselius3,7 tarafından tanıtıldı, ancak şimdi zayıf ayırma yeteneklerinden dolayı modası geçmiş hale geldi. Teknik, Bölüm V.C.2’de açıklanan yeni bir CE sisteminin aynı konfigürasyonu kullanılarak bir kapilerde gerçekleştirilebilir. Örnek, enjeksiyon tarafındaki elektrolit bölmesine tek bileşen olarak doldurulur.

Diğer bölmede, numune bileşenlerinin hareketliliğinden daha yüksek bir hareketliliğe sahip bir elektrolit kullanılır. Kapiler ayrıca yüksek hareket kabiliyetine sahip elektroliti içerir ve iki bölmeyi birbirine bağlar. Uygun bir potansiyel uygulayarak, iyonlar üretilen elektrik alanında göç eder.

En yüksek hareketliliğe sahip olan kapilerdeki elektrolit, ilk önce kapiler boyunca hareket eder, ardından numunenin art arda daha yavaş bileşenleri gelir. Belli bir süre sonra, numune bölgesindeki en hızlı bileşik numune yığınından çıkar ve bunu, bir sonraki daha yavaş bileşik ve en hızlı bileşiğin bir karışımını içeren bir bölge izler.

Bu bölgeyi yine üçüncü yavaş bileşik ve ilk iki en hızlı bileşiğin bir karışımını içeren bir bölge izler. Aslında, yalnızca numunenin en hızlı yer değiştiren iyonunun saf bir bölgesini elde etmek mümkündür, bu da yöntemi yapar. Sistematik kullanım için daha az çekici.3,41 Hareketli sınır CE, dökme malzemenin hazırlayıcı olarak ayrılması için ilginç olabilir.

Elektroforez ne amaçla kullanılır
Jel elektroforezi
Elektroforez çeşitleri
Poliakrilamid jel elektroforezi
Kapiller elektroforez
SDS-PAGE elektroforez
Jel elektroforez nedir
Agaroz jel Elektroforezi sonucu yorumlama

B. Kararlı Durum Kapiler Elektroforezi

ITP ve IEF, sabit CE’deki ana temsilci modlardır. Bu yöntemlerde göç açısından belirli bir kararlı durum aşaması elde edilir. Şekil 1’de anlatılana benzer deneysel bir düzene sahip mevcut ticari CE sistemleri bu yöntemlerde kullanılabilir.

Tipik olarak, bir ayırma elde etmek için oluşturulacak bir gradyan gereklidir. “Öncü” ve “sonlandırıcı” elektrolit sistemleri kullanılarak, ITP’de potansiyel bir gradyan oluşturulur. Enjeksiyon yan bölmesi, numune bileşenlerinden çok daha küçük bir hareketliliğe sahip olan “sonlandırıcı bir elektrolit” ile doldurulmuştur.

Saptama tarafındaki kılcal boru ve bölme, numune bileşenlerinden daha yüksek bir hareketliliğe sahip bir “önde gelen elektrolit” ile doldurulur. Numune, kılcal damarın girişinden küçük bir tıpa içine enjekte edilir. Uygun bir voltaj uygulandığında, iyonlar hareketliliklerine göre göç eder. Önce, önde gelen elektrolit, ardından ardışık hareket kabiliyetine sahip numune bileşenleri ve son olarak sonlandırıcı elektrolit yer alır.

Birbirinden uzağa göç etme eğiliminde olan bölgelerin farklı göç hızları nedeniyle yüksek verimli ayırmalar sağlanabilir. Bölgelerin ayrılması, kılcal kısımların yalnızca su ile dolu olacağı (çok düşük iletkenlikle) ve akım akışının kesileceği anlamına gelecektir. Kılcal damar boyunca akım akışını sürdürmek için, bölgeler ayrı fakat birbirine bitişik göç eder.

Potansiyel gradyan her bölge içinde sabittir, ancak bölgeden bölgeye aşamalı olarak artar.122,7,19 ITP çok yüksek çözünürlüklü ayrımlara neden olur, ancak yalnızca iyonik bileşiklerin ayrılması için faydalıdır. EOF oluşumunu önlemek için genellikle ön işlem görmüş kılcal damarlar gerektirir. ITP, diğer CE tipi ayırmalardan önce örnek ön konsantrasyon adımı olarak faydalarını göstermiştir.

IEF’de tipik olarak amfolitten oluşan elektrolit sistemleri tarafından üretilen bir pH gradyanı kullanılır. Elektroozmozdan kaçınmak için kaplanmış bir kılcal damar kullanılır. IEF modu, özellikle proteinler, peptitler, amino asitler gibi zwitter iyonik bileşiklerin yanı sıra çeşitli ilaçların ayrılması için de uygundur.

Numunenin enjekte edilmesinden ve potansiyelin uygulanmasından sonra, numune bileşenleri, net yüklerinin sıfıra eşit olduğu kapilerdeki bir pH’a göç eder. Bu noktada, izoelektrik nokta, bir bileşiğin hareketliliği de sıfıra eşittir ve bu nedenle bileşiğin göçü durdurulur.

PH gradyanının odaklanma etkisi nedeniyle bant genişlemesinden kaçınılır. Bir sonraki adımda bölgeler dedektöre getirilir ve kılcal damarlardan çıkarılır (örneğin bir basınç farkı uygulayarak). 1,7,19 IEF uygulamaları Bölüm 12 ve 16’da verilmektedir.

C. ZoneKapiller Elektroforez

Bu yöntem grubunda, numune bileşenleri, bir jel (CGE) veya bir elektrolit (serbest çözelti CE) olabilen bir ortam içinde kapiler boyunca bölgeler içinde farklı şekilde hareket edebilir. Bölge elektroforezi için ticari CE sistemlerinin deneysel kurulumu, Şekil 1’de sunulana benzer.

1. Kılcal Jel Elektroforezi

CGE’de kılcal, kılcal kısımda polimerik bir ağ56 oluşturan bir poliakrilamid veya agaroz jel ile doldurulur ve analitler jelin gözeneklerinden geçerken türlerin moleküler boyuta göre ayrılması için bir moleküler eleme mekanizması sağlar (ayrıca yük yoğunluğunu belirler). . Ek olarak, jel difüzyon nedeniyle bölge genişlemesini önler ve duvar adsorpsiyonunu ve elektroozmozu önler.

Son derece yüksek verimli (metre başına 30 milyon teorik plaka) ayırmalar elde edilmiştir. CGE, Bölüm 14 ve 15’te kapsamlı bir şekilde tartışılacağı gibi, proteinler, polinükleotitler ve DNA fragmanları gibi büyük biyomoleküllerin ayrılması için özellikle faydalıdır.

Geleneksel levha jel elektroforezine göre önemli avantajları vardır: küçük numune gereksinimi, otomasyon, yüksek hassasiyet, yüksek verim, hızlı ve verimli moleküler kütle belirleme, iz kantitasyonu ve çok çeşitli büyük biyomoleküllere uygulanabilir.

Bu alandaki kapiler dizili aletlerin uygulanması, yüksek verim için çok tipiktir. CGE, genomik alanında tercih edilen yöntemdir ve yüksek verimli araçların piyasaya sürülmesi sayesinde, gen dizilimi bugün büyük ölçüde de ilerlemiştir.

The post CE’DE YÖNTEM VE MODLAR – Farmasötik Analiz İçin Kapiller Elektroforez Yöntemleri – Ayırma Teknolojisi –FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).