Çemberi Kapatmak Nedir? – Kontrol Örneklerinde Test Öğesinin Tespiti

Son birkaç yılda, ilaçlarla yapılan toksisite çalışmaları, GLP İlkelerinin oluşturulmasına neden olan olayları anımsatan bir problemle yüklenmiştir. GLP İlkelerine bağlılığın faydasını işaretli bir şekilde gösterdiği için burada biraz uzun anlatılacaktır.

Test hayvanlarının test maddesine maruziyetini kanıtlamak için, test maddesinin ve metabolitlerinin kandaki veya plazmadaki (toksikokinetik) konsantrasyonlarının tespiti 1990 yılı civarında yapılmaya başlanmış ve daha sonra toksikokinetik tayinler toksisite çalışmalarının zorunlu kısımları olarak ilan edilmiştir. 1994 yılında yürürlüğe giren S3A kılavuzundaki Uluslararası Uyum Konferansı tarafından yapılmıştır(ICH, 1994).

Çok geçmeden, muhtemelen tedavi edilmemiş kontrol hayvanlarının kanının analizinin küçük miktarlarda test maddesinin varlığını gösterdiği bazı örnekler bilinmeye başladı. Bu durum yalnızca birkaç kişide meydana geldiği sürece ve tespit edilen konsantrasyonlar düşük doz grubunda gözlemlenenlerden daha düşük olduğu sürece, bu bulgular tekil olaylar olarak kabul edilebilir ve kalite ve güvenilirlik açısından hiçbir sonuç doğurmayabilir. 

Bununla birlikte, bazı çalışmalar test öğesi kan veya plazma konsantrasyonlarının düşük doz grup hayvanlardakilere benzer veya hatta daha yüksek olduğunu gösterdiğinde ve bu tür bulgular birkaç kişiyle sınırlı olmadığında, ancak yüksek oranda gözlemlenebildiğinde kontrol grubu hayvanlarına, bu tür çalışmaların bilimsel geçerliliği sorusu sorulmalıydı. Gerçekten de, bu tür bazı çalışmalar geçersiz ilan edildi ve tekrarlanması gerekiyordu.

Bir bakıma durum, Düzenleyici Otoritelerin kendilerine sunulan verilerde tutarsızlıklar tespit ettikleri 1970’lere benziyordu; Öyleyse, düzenleyicilerin deneysel davranışta ilk başarısızlıktan ve GLP’ye uymamanın bu sorunların temelinde olduğundan şüphelenmelerine şaşmamalı.

Beyaz Kutu testi
Yazılım test yaklaşımları
Yazılım test Süreçleri
Yazılım testi
Yazılım test örnekleri
Psikometri testi
Yazılım test Çeşitleri
Yazılım test Metodolojileri

Bu nedenle, Çalışma Direktörü ve Kalite Güvence GLP Beyanlarının varlığına rağmen, “orijinal günah” ın GLP İlkelerine uyumsuzluktan biri olup olmadığını belirlemek büyük önem taşıyordu.

Bununla birlikte, şu andan beri, GLP İlkeleri ilgili tüm test tesislerinde uygulanmaktadır ve tüm çalışmaları için, çalışma denetimleri ve test tesisi teftişlerinin yapılması, öngörülen prosedürlere uymama fikrini ortadan kaldırmak nispeten kolaydır. veya GLP gerekliliklerine uyulmaması bu olayların nedeni olmuştur.

Dahası, GLP’nin kayıt gerekliliklerine sıkı sıkıya bağlılık, araştırmacılara ve bilim adamlarına, çalışmanın yeniden yapılandırılmasına, tüm aktivitelerin yeniden izlenmesine ve örneklerin, örneklerin ve verilerin akışının izlenmesine olanak tanıyan önemli bir araç sağladı.

Bu da, kontrol numunelerinde test öğesinin ortaya çıkması için en makul nedenleri belirlemede etkili oldu.
Kontrol numunesi kontaminasyonlarının nedenlerine yönelik bu tür çok sayıda araştırmanın sonucundan en önemli mesaj olarak, hiçbir durumda kontrol hayvanlarının sistematik olarak yanlış dozlanması için test tesisinin suçlanamayacağı gerçeğinden bahsedilebilir.

Bunun yerine, görünen nedenlerin ya test öğesinin özelliklerine, laboratuvar koşullarına ya da analitik prosedürlere bağlı olduğu ortaya çıktı. Avrupa Toksikolojik Patoloji Derneği’nin (www.eurotoxpath.org/activities/ impurities.htm) web sitesinden alınan birkaç örnek, GLP’nin bu “dedektif çalışmasına” nasıl yardımcı olduğunu göstermek için yeterli olacaktır:

• Oral uygulama ile maymunlarda yapılan 28 günlük bir çalışmada, 78 kontrol örneğinden 19’u, 0.11 ile 1.3 ng / ml arasında test öğesi konsantrasyonları gösterirken, düşük doz grubundaki 77 örnekten 77’sinde ilgili konsantrasyonlar 0.11 ila 26.6 ng aralığındaydı. / ml (LLOQ 0.1 ng / ml idi). Tüm prosedürleri inceledikten sonra, sorun biyoanalitik metodoloji ile sınırlandırılabilir: Çalışma sırasında, daha iyi hassasiyetle sonuçlanan değişiklikler gerçekleştirildi, yani LLOQ’nun 0.3 ng / ml’den 0.1 ng / ml’ye düşmesi, Bununla birlikte, ek etki ile, doğrulamada tespit edilmeyen taşınma etkileri çalışma örnekleri için gözlemlenebilir hale geldi ve bu bulguları açıkladı.

• Bir dizi kemirgen çalışmasında, kontrol numunelerinin yaklaşık% 15’inde test öğesi bulunmuştur. Yanlış dozlama, bir dizi bulgu ve bilimsel değerlendirmeyle göz ardı edilebilir. GLP-uyumlu SOP’ların ve kayıtların varlığı, daha sonra, biyoanalitik laboratuvarda ve ayrıca kanama ve işleme sırasında kan örneklerinin test öğesi kontaminasyonu olasılıklarını ortadan kaldıran yerinde prosedürlerin kapsamlı bir yeniden kontrolüne izin verdi. 

Daha sonra, gerekli çalışma / hayvan tanımlayıcıları ile etiketlenmeden önce, santrifüjlemeden sonra plazma transferi için kullanılan Eppendorff tüplerinin, uygulama solüsyonlarının bulunduğu aynı odada (hayvan odası alanının dışında) kapakları açık olarak saklandığı bulunmuştur. hazırlandık. Kontaminasyonu önlemeye yönelik ihtiyati tedbirler, hayvan odalarındakinden daha az katı olmuştur (örneğin, tek kullanımlık giysiler kullanılmamıştır) ve kaba hesaplamalar, hazırlık sırasında aerosol oluşumunun iyi bir şekilde açıklanabileceğini ve en makul açıklama olacağını göstermiştir. kontrol numunelerinin gözlenen kirliliğidir.

• Diğer durumlarda, bu tür kontaminasyonlar için olası veya makul bir neden bulunamamasına rağmen, GLP kapsamında test öğesinin kullanımı için hesap verebilirlik (bkz. Bölüm 9.1, sayfa 220) – yukarıda daha önce belirtildiği gibi – sistematik yanlış – kontrol (ve test grubu) hayvanlarının dozlanması. Başka kanıtların yokluğunda, kontrol hayvanlarının hava yoluyla (uçucu maddeler, toz parçacıkları üzerinde emilen test maddesi) veya bir kafesten diğerine yatak örtüsü ve dışkı dökülmesi yoluyla dolaylı maruziyetini dışlayamaz. Özellikle bu ikinci durumda, kafeslerin yerleştirme ve değiştirme kayıtları, böyle bir olasılığın olasılığının belirlenmesine yardımcı olabilir.

Çalışma geçerliliğinin bilimsel değerlendirmesinin sonuçları, Avrupa İlaç Değerlendirme Ajansı’nı ve Tescilli Tıbbi Ürünler Komitesi’ni (EMEA / CPMP) bu kontrol numunesi kontaminasyonu sorunuyla başa çıkmak için bir taslak kılavuz yayınlamaya teşvik etti (CPMP, 2004).

Bu taslak kılavuzda, GLP İlkelerine ve bunların bir çalışmadan elde edilen tüm sonuçları tam ve doğru bir şekilde temsil etme gerekliliğine atıfta bulunulmaktadır ve kılavuz, GLP uyumlu bir çalışma raporu için gerekli olanı şu şekilde vurgulamaktadır: “Kontrol numunelerinin kontaminasyonu toksikoloji çalışmalarında test bileşiği ile birlikte, bir GLP beyanı içinde bir sapma veya ihlal olarak uygun şekilde rapor edilmelidir. Kontrollerin kontaminasyonu da çalışma raporlarında açıkça belirtilmeli ve çalışmanın geçerliliği üzerindeki etkisi açısından Çalışma Direktörü tarafından tartışılmalıdır. “

The post Test Öğesinin Tespiti – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).

1. Kiral Test Yöntemleri

Enantiyomerik tahlil belirlemeleri tipik olarak, normalize edilmiş tepe alanı (alan%) hesaplama prosedürü kullanılarak rasemik karışımları karakterize etmek için uygulanır. Seçicilik çözümü, yöntemdeki ayırma kapasitesini göstermek ve pik tanımlamaya izin vermek için kullanılır. Önerilen bir numune enjeksiyon dizisi,

1. Boş
2. Seçicilik numune enjeksiyonu
3. Örnek çözelti enjeksiyonları
4. Seçicilik numune enjeksiyonu (her 10 numune enjeksiyonundan sonra ve dizinin sonunda).

2. Aşiral Test Yöntemleri

Aşiral tahlil belirlemeleri, dahili standardizasyon olsun veya olmasın harici bir kalibrasyon hesaplama prosedürüne göre yapılır. Kalibrasyon,% 100 w / w (% 100 w / w’de numune solüsyonunun nominal konsantrasyonuyla karşılaştırıldığında) referans standart solüsyona karşı gerçekleştirilir. Testin belirlenmesi için numune solüsyonu% 100 w / w seviyesinde kalır. Önerilen bir numune enjeksiyon dizisi;

1. Boş
2. Raporlama eşiği numune enjeksiyonu
3. Seçicilik numune enjeksiyonu
4. Referans solüsyon 1 enjeksiyonunu (1 ) kontrol edin
5. Referans çözüm 2 enjeksiyon (5 )
6. Test tayinleri için% 100 w / w seviyesinde numune solüsyon enjeksiyonları
7. Referans çözelti 2 re-enjeksiyon (1 , her 10 numune enjeksiyonundan sonra ve sonunda
dizinin)
8. Seçicilik numunesi enjeksiyonu (sıranın sonundaki son referans çözümünden sonra).

Limit Testi

Sınır testi, iyi tanımlanmış bir konsantrasyon seviyesinin üzerinde belirli bir bileşiğin varlığının belirlenmesine izin veren yarı kantitatif bir testtir. Tespitler, dahili standardizasyon olsun veya olmasın harici bir kalibrasyon hesaplama prosedürüne göre yapılır. Kalibrasyon, eşik seviyesinde bir referans çözeltiye karşı gerçekleştirilir (örneğin,% 100 w / w’de numune çözeltisinin nominal konsantrasyonuna kıyasla% 0.10 w / w olur.

Limit testi belirlemesi için örnek çözelti% 100 w / w seviyesinde kalır. Önerilen bir numune enjeksiyon dizisi;

1. Boş
2. Seçicilik numune enjeksiyonu
3. Eşik enjeksiyonunda referans çözüm (5 )
4.% 100 w / w seviyesinde örnek çözelti enjeksiyonları
5. Seçicilik numune enjeksiyonu (her 10 numune enjeksiyonundan sonra ve sekansın sonunda).

Yazılım test yöntemleri
Mobil uygulama test yöntemleri
Yazılım test Süreçleri
Dinamik test nedir
Yazılım Test örnekleri
Yazılım test çeşitleri
Beyaz Kutu testi
Yazılım regresyon testi

YÖNTEM GELİŞTİRME SÜRECİ

Referans 1’de tartışıldığı gibi, HPLC yöntemlerinde olduğu gibi, geç faz CE yöntemleri müşterilerle (QC laboratuarları) yakın işbirliği içinde geliştirilir. Şekil 2’de sunulan diyagram, geç aşama geliştirme sürecini daha ayrıntılı olarak göstermektedir1,2,4 ve geliştirme ile alıcı laboratuvar arasındaki bağlantıyı açıkça göstermektedir.

Geliştirme laboratuvarı (tedarikçi) ve alıcı laboratuvar (müşteri) arasındaki işbirliği, genel resmi tamamlamak için birbirine çok yakın bir yapbozun iki parçası gibi olmalıdır. Her iki laboratuvar, ürünlerini, yani analitik yöntemi geliştirmek için ortak bir çaba içinde birlikte çalışır. Bu şekilde teslim edilen yöntemin kalitesi garanti edilmektedir.

Geç aşama geliştirme süreci farklı adımlarda gerçekleştirilir ve kolayca tamamlanması birkaç ay sürebilir. Bu nedenle, kapsamlı bir planlama ile erken başlamak şarttır. Aşağıdaki adımlar dahildir1: Planlama, Geliştirme, Değerlendirme, Doğrulama, Transfer ve Performans İzleme.

 PLANLAMA AŞAMASI

A. Yöntem Belirleme

Yöntem geliştirmeye başlamadan önce, geç aşama yöntemi için gereksinimler bir MDR’de belirlenir. MDR, dahil olan tüm tarafların yöntem geliştirme gereksinimleri üzerinde hemfikir olduğu ve Kalite Güvencesi (QA), QC kaynak sahaları, Kararlılık, Geliştirme ve Düzenleyici dahil olmak üzere tüm paydaşlarla yakın işbirliği içinde ve mutabakat içinde oluşturulmuş resmi bir belgedir.

Geliştirme süreci, kapsamlı bir geliştirme planıyla başlar. Zaman çizelgeleri belirlenir ve tercihen bir iletişim planı hazırlanır. Aynı yöntem geliştirme ekibi, belirlenen gereksinimlere ulaşmak için sunulan yöntemi değerlendirecektir.

Ticari üretimde DS ve DP’yi test etmek için nihai kalite kontrol yöntemlerinin sorunsuz bir şekilde geliştirilmesine olanak sağlamak için, tercihli olarak birkaç ön koşul yerine getirilir ve referans 1’de açıklandığı gibi destekleyici bilgiler sağlanır.

B. Geliştirme Planı

Kabul edilebilir bir zaman çizelgesine sahip bir geliştirme planı oluşturulur. Plan, zaman çizelgelerini, laboratuvar personelinin gereksinimlerini, enstrümantasyon ve ekipmanı, malzemeleri / sarf malzemelerini, kılavuzları, geliştirme numunelerini ve standartları içerir ve tüm paydaşlara iletilir.

Teknik Gereksinimler

Maksimum dedektör tepkisi:

􏰁 API nominal konsantrasyonu (% 100) için maksimum dedektör yanıtı, nitelikli dedektör doğrusal dinamik aralığının% 75’idir.

Sıcaklık:

􏰁 Yöntemler, sıcaklık kontrollü koşullarda (tercihen 25 ° C) gerçekleştirilir.

Arka plan elektrolitleri:

􏰁 MS uyumluluğu bir zorunluluk değildir, ancak tercih edilir. Aşiral saflık yöntemleri için, tanımlama amaçlarını desteklemek için MS uyumlu, destekleyici alternatif bir yöntem mevcuttur.
􏰁 Tamponlar, tampon sisteminin bileşenleri doğru tartılarak veya pipetlenerek hazırlanır. PH’ı titrasyon yoluyla ayarlamaktan kaçınılır. Tampon çözeltisinin pH’ının kontrol edilmesi önerilir.
􏰁 Yüksek viskozite ve reaktivite nedeniyle THF kullanılmamalıdır.

Elektroforez modu:

􏰁 Nihai yöntemler için sabit voltaj / akım çalıştırmaları tercih edilir.
􏰁 Sabit voltaj / akım koşulları kullanılamadığında, doğrusal gradyanlar tercih edilir. Gerekçelendirildiğinde, analiz süresinin kısaltılması için voltaj veya akımın kademeli gradyanları kullanılabilir.
􏰁 Analiz süresi, sağlamlık testi sırasında en kötü durum sonuçlarına göre ayarlanır.
􏰁 Her çalışmanın başlangıcında bir durulama adımı gereklidir.
􏰁 Seyreltilmiş bir tampon solüsyonu (tipik olarak 10 kattan fazla) numune seyreltme çözücüsü olarak tercih edilir, ancak gerektiğinde% 40’a kadar v / v organik çözücüler eklenebilir.
􏰁Başka bir şekilde kullanılmış silikakapillerisitenin koşullandırılması Farklı yaklaşımlar açıklanmıştır, ancak, aşağıdakiler uygulanabilir ve genellikle en iyi sonuçları verir:

30 dak 1 M NaOH solüsyonu,
15 dak su
Kılcal damar içinden hava veya nitrojen gazını temizleyerek 5 dakika kurutma.
􏰁 Analizden önce kapiller için günlük yıkama önerilir. Aşağıdaki yaklaşım önerilmektedir:
Arka plan elektrolitinin pH’ına bağlı olarak 0.1 M NaOH veya% 10 v / v fosforik asit ile 15 dakika (kılcal uzunluğa bağlı, 10 kapiler hacme eşdeğer),
Kılcal damar içinden hava veya nitrojen gazını temizleyerek 5 dakika kurutma.

Çalıştırma Öncesi Durulama

Bir numune çözeltisinin her enjeksiyonundan önce, ilk duvar yüzeyi özelliklerini elde etmek için kapiler yenilenmelidir. Kusursuz bir kılcal duvar, yeniden üretilebilir bir endosmotik akış için ilkeldir ve bu, yeniden üretilebilir migrasyon süreleri ve dolayısıyla ayrılmalar için kritiktir. Taze kılcal duvar koşullarının sağlanması, tekrarlanabilir CE ayrımlarının en kritik gerekliliklerinden biridir.

The post Test Yöntemleri – Farmasötik Analiz İçin Kapiller Elektroforez Yöntemleri – Ayırma Teknolojisi –FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).