Kütle spektrometrisi (MS), uzun yıllardır gaz kromatografisi ile birlikte bir algılama modu olarak kullanılmıştır. 1 ml/dk akış hızına sahip tipik bir LC sisteminden akan büyük hacimli sıvı, başlangıçta LC ve MS kombinasyonunu engelledi.

Mikro delikli LC’nin (<1 mm iç çap) tanıtılması ve çok ince sıvı aerosollerin (elektrosprey) üretimindeki gelişmeler, LC-MS’nin uygulanabilir bir teknik haline gelmesiyle sonuçlanmıştır. LC–MS veya tandem MS (MS–MS), klinik laboratuvarda muhtemelen en hızlı büyüyen ayırma teknikleridir.

Biyolojik numuneler için ön numune hazırlama

Biyolojik numunelerin HPLC kullanılarak analiz edilmesinin bir komplikasyonu, birçok vücut sıvısındaki yüksek protein içeriğidir (plazma ve serumda yaklaşık 70 g/l).

Bu, arka plan paraziti üretebilir ve kolon tıkanmasına yol açabilir, bu nedenle genellikle analizden önce bir tür numune hazırlama gereklidir. Numune hazırlamanın tam şekli, spesifik uygulamaya göre değişecektir, ancak genellikle deproteinizasyon ve/veya ilgili bileşiğin ekstraksiyonu gerçekleştirilir.

Kan numunelerini içeren HPLC yöntemleri için hem sıvı-sıvı hem de katı faz ekstraksiyonları kullanılır. İdrar kullanıldığında, renkli veya flüoresan pigmentler mevcutsa UV veya flüoresan algılama yöntemlerinde girişim meydana gelebilir ve sıvı-sıvı veya katı fazda bir tür ekstraksiyon gerekli olacaktır.

Porfirinler nedir
Porfirinler
Porfirin nedir tip
Porfirin halkası
Porfirin biyosentezi
Porfirin METABOLİZMASI
Porfirin Nedir cilt
Hemoglobin porfirin

Uygulamalar

HPLC’nin laboratuvar tıbbındaki uygulamalarının çoğu klinik biyokimya alanına girer, ancak hematologlar da bu tekniği kullanır. HPLC tarafından klinik laboratuvarda düzenli olarak analiz edilen bileşik grupları arasında biyojenik aminler, amino asitler, porfirinler, ilaçlar, vitaminler, hemoglobin ve karbonhidratlar bulunur.

Nükleositler, kolajen bozunma ürünleri ve steroidler dahil olmak üzere araştırma amaçları için birçok başka özel uygulama tanımlanmıştır, ancak bunlar genellikle rutin test repertuarının bir parçası haline gelmemiştir.

Biyojenik aminler

Katekolaminler, adrenalin, noradrenalin ve dopamin ve bunların metabolitleri, nöral krest kaynaklı tümörlerin (feokromositoma ve nöroblastom) tespiti için plazma ve idrar numunelerinde ölçülür. Feokromositomalar, daha sonra 4-hidroksi-3-metil-mandelik aside (HMMA) metabolize olan büyük miktarlarda adrenalin ve/veya noradrenalin salgılar.

Feokromositoma hastalarından alınan idrarda hem katekolaminlerin hem de HMMA’nın artan konsantrasyonları, elektrokimyasal saptamalı ters fazlı HPLC kullanılarak saptanabilir. Bu teknik, çocuklarda nöroblastomlar tarafından üretilen anormal derecede yüksek miktarlarda dopamin ve metaboliti homovanilik asidi (HVA) saptamak için de kullanılabilir.

Serotonin (5-hidroksitriptamin, 5-HT) triptofandan sentezlenir ve monoamin oksidazlar tarafından 5-hidroksiindol asetik aside (5-HIAA) metabolize edilir.

Karsinoid tümörler anormal miktarlarda 5-HT salgılarlar ve kan/idrar serotonin konsantrasyonlarının veya idrar 5-HIAA atılımının ölçülmesi, tümörlerin saptanmasında ve tedavinin izlenmesinde faydalıdır. HMMA, HVA ve 5-HIAA’nın ters fazlı HPLC ile aynı anda belirlenmesine yönelik yöntemler, klinik laboratuvarlarda rutin olarak kullanılmaktadır.

Amino asitler

Amino asit metabolizması anormalliklerinin kalitatif tespiti için TLC kullanımı daha önce tarif edilmiştir. Spesifik amino asitlerin miktar tayini, özellikle fenilketonüri, tirozinemi veya akçaağaç şurubu idrar hastalığı gibi bozukluklarda tedavinin izlenmesi için sıklıkla gereklidir.

İlk uzman HPLC sistemi, renkli türevler üretmek için ninhidrin ile kolon sonrası reaksiyonu takiben spektrofotometrik algılama ile amino asitlerin katyon değişim kromatografisi ile ayrılmasına dayanan amino asit analizörüydü.

Artık amino asitleri UV, floresan veya elektrokimyasal algılama ile ters fazlı HPLC ile ayırmak için birçok alternatif türevlendirme yöntemi tarif edilmiştir.

Porfirinler

Porfirinler, hem biyosentetik yolun ara ürünleri olan porfirinojenlerin oksidasyonu ile oluşan siklik tetrapirollerdir. Spesifik enzim eksikliklerinin öncüllerin birikmesine yol açtığı bir kalıtsal hastalık sınıfı (porfiri) vardır.

Porfirilerin klinik prezentasyonu, kronik fotosensitiviteden akut karın ağrısına kadar çeşitlidir ve semptomlardan kesin tanı hakkında bir miktar fikir elde edilebilmesine rağmen, porfiri tipinin karakterizasyonu kan ve idrardaki porfirin paterninin tanımlanmasını gerektirir. 

Bu, porfirinlerin sıvı-sıvı ekstraksiyonu ve ardından porfirinler doğal floresansa sahip olduğundan, UV veya floresan algılama ile ters fazlı HPLC ile başarılabilir. HPLC ile porfirin ayırmanın bir örneği  gösterilmektedir.

İlaçlar

İmmünoassay teknikleri, yerleşik anti-konvülzanların çoğu için rutin yöntem olarak HPLC’nin yerini almıştır, örn. fenitoin, fenobarbiton, valproat ve karbamazepin. Bununla birlikte, lamotrijin, vigabatrin, gabapentin, topiramat, leviterasetam ve okskarbazepin dahil olmak üzere daha yeni nesil antikonvülzanlar, UV saptamalı ters fazlı HPLC ile ölçülür.

Bununla birlikte, geniş terapötik pencereleri (lamotrijin, topiramat ve leviterasetam) olduğundan veya plazma konsantrasyonları klinik ile zayıf korelasyon gösterdiğinden, yeni antikonvülzanların çoğu için terapötik ilaç izlemesinin önceki ilaçlara kıyasla daha az önemli olduğu düşünülmektedir. etkinlik (gabapentin, vigabatrin). Bu nedenle izleme, öncelikle tedaviye uyumsuzluk şüphesi olduğunda gerçekleştirilir.

Diğer uyuşturucular

Biyolojik sıvılardaki binlerce başka ilaç için tahliller geliştirilmiştir. Daha fazla bilgi arayan okuyucular, bu bölümün sonundaki İleri Okuma bölümüne başvurmalıdır. LC dahil ayırma tekniklerinin kullanımı, bir ilacın ana ilaçla birlikte ölçülmesi gereken aktif bir metabolitine sahip olduğu durumlarda özellikle önemlidir, örn. amiodaron, dothiepin, vb.

Glike hemoglobin dahil hemoglobinler

Hemoglobinin 400’den fazla yapısal varyantı bilinmektedir ve bunların çoğu birey için klinik sekelleri yoktur. Ancak bazı varyantlar hastalıkla ilişkilidir, örn. HbS (orak hücre hastalığının hemoglobini).

Kesin tanı, mevcut varyantın tanımlanmasını gerektirir. Nispeten yakın zamana kadar, hemoglobinlerin ayrılması elektroforez ile sağlanıyordu, ancak şimdi iyon değişim kromatografisine dayalı birkaç ticari özel HPLC sistemi ortaya çıktı. Bunlar daha hızlı numune çıktısına sahiptir ve hemoglobinopatiler için popülasyon taramasında faydalıdır.

Bu sistemlerde yapılan modifikasyonlar, 4-8 dakikalık bir analitik döngü süresi ile hemoglobinin glike edilmiş fraksiyonu HbA1c’nin nicelleştirilmesinde kullanılmalarını sağlar. Boronat jel afinite kromatografi yönteminin, kalıtsal hemoglobin varyantlarının varlığından etkilenmeme avantajına sahip bir HPLC versiyonu da mevcuttur.

HbA1c ölçümü için, endoproteinaz Glu-C ile hemoglobinin peptitlere ayrılmasını ve ardından HPLC-elektrosprey iyonizasyon-kütle spektrometrisi (ESI-MS) ile hekzapetidlerin ayrılmasını ve nicelleştirilmesini içeren bir referans yöntemi oluşturulmuştur.

The post Porfirinler – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).

Folat eksikliğine genellikle malabsorpsiyon veya yetersiz diyet alımı (veya hamilelikte olduğu gibi artan gereksinimle bunlardan birinin kombinasyonu) neden olur.

Takviye basittir ve bazı ülkelerde gıdalar rutin olarak ilave folat ile takviye edilir, ancak kobalamin eksikliği olan bir hastaya folat verilmesi kordun subakut kombine dejenerasyonuna neden olabileceğinden dikkatli olunması gerekir. Kobalamin eksikliğinin önemli bir nedeni, mide parietal hücrelerinin artık ileal kobalamin emilimi için gerekli olan intrinsik faktörü üretemediği pernisiyöz anemidir (PA).

Ön araştırma, gastrik parietal hücre antikorlarının ve intrinsik faktör antikorlarının değerlendirilmesini içerebilir. İlki, PA vakalarının %90’ında pozitiftir, ancak normal deneklerin %3-10’unda mevcut olduğu için durum için zayıf özgüllüğe sahiptir. İntrinsik faktör antikorları PA için oldukça spesifiktir ancak duyarlılıkları düşüktür.

IF’nin kobalamine bağlanmasını bloke eden ve IF-kobalamin kompleksinin terminal ileum tarafından alınmasını bloke eden iki tür intrinsik faktör antikoru vardır. Eski antikor rutin olarak ölçülen antikordur ve PA vakalarının %50’sinde bulunur.

Geçmişte, uygulanan kobalamini absorbe etme yeteneğini belirlemek ve bunun intrinsik faktör eksikliğinden (PA’da olduğu gibi) kaynaklanıp kaynaklanmadığını belirlemek için Schilling testi (ilave intrinsik faktör varlığında ve yokluğunda radyoaktif kobalamin absorpsiyonunun ölçülmesi) kullanılırdı. ) veya ileal hastalık gibi başka bir neden.

Kas içi enjeksiyon yoluyla uygulanan etiketsiz kobalamin ile önceden doygunluk, emilen tüm etiketli kobalaminlerin atılmasını sağlar. Schilling testi, radyoizotopların kullanımıyla ilgili problemler ve testin genel olarak uygun olmaması nedeniyle geçmişte olduğundan daha az kullanılmaktadır.

Protoporfirin nedir
Porfirin nedir
Eritrosit protoporfirin nedir
Porfirin sentezi
Porfirin METABOLİZMASI
Protoporfirin 9 nedir
Porfirin Nedir cilt
Porfirin halkası

PA vakalarının yaklaşık %80’inde, pariyetal hücrelerin hidroklorik asit üretememesi nedeniyle ilişkili aklorhidrinin bir sonucu olarak serum gastrin yükselmiştir, bu nedenle serum gastrin PA’nın araştırılmasında değerli olabilir.

İlginç bir şekilde, diyetteki doğal bağlayıcı proteinlerden diyetle alınan kobalamin (ve folatın) salıverilmemesi emilimi bozabileceğinden, mide asidinin yokluğu başlı başına önemlidir. Bu nedenle, doğal gıdalardan proteine ​​bağlı kobalamin emen bir hastada normal bir Schilling testi (serbest kobalamin emilimini ölçen) ortaya çıkabilir.

Pernisiyöz aneminin araştırılması için bir laboratuvar kademesi gösterilmiştir. Bu, Schilling testinin kullanılmasını önler, ancak bir dizi laboratuvarda, özellikle Birleşik Krallık’ta rutin olarak mevcut olmayan ölçümleri içerir.

Metilmalonik asit nadiren bulunur ve gastrin mevcut olmasına rağmen bu bağlamda çok az kullanılır. PA tedavisinde oral kobalamin takviyesi etkisiz olduğundan, kesin tanı önemlidir.

Demir

Demir, sadece hemoglobin sentezinde değil, moleküler oksijen kullanımında yer alan hem ve hem de içermeyen birçok metaloporoteinde rol oynayan önemli bir elementtir. Eksikliğinin en belirgin etkisi demir eksikliği anemisidir, ancak diğer metabolik süreçlere katılımından kaynaklanan daha ince değişiklikler olabilir.

Demirin Fe(II) ve Fe(III) olmak üzere iki temel oksidasyon durumunda bulunması ve bunun sonucunda bir elektron transferine katılabilme kolaylığı, onun önemli bir kullanıma sahip olan potansiyel bir oksijen serbest radikal kaynağı olmasına neden olur. konakçının bakterilere karşı savunmasında, ancak uygun konumlarıyla sınırlı değilse, konak dokularına oldukça zarar verir.

Böylece demirin emilimi ve taşınması, serbest demirin varlığından kaçınmak için sıkı bir şekilde kontrol edilir ve aşırı demir yüklenmesi koşullarının ciddi klinik sonuçları olur.

Demir eksikliği ve aşırı yükün laboratuvar önlemleri

Hemoglobinin kendisinden ayrı olarak, en sık kullanılan demir durumu laboratuvar ölçümleri, serum demiri ve demir bağlama kapasitesi, serum ferritin, kırmızı hücre çinko protoporfirin ve daha yakın zamanda serum transferrin reseptörü (TfR) konsantrasyonudur.

Serum demir ve demir bağlama kapasitesi

Serum demiri, demir durumunun en belirgin ölçüsüdür, ancak konsantrasyonu, bağlayıcı proteini olan transferrin konsantrasyonu da dahil olmak üzere bir dizi faktörden etkilenir.

Bu nedenle, ya proteinin doğrudan ölçümü ile ya da transferrin konsantrasyonuna eşdeğer olan serumun demir bağlama kapasitesinin kimyasal olarak değerlendirilmesi yoluyla serum demir konsantrasyonunun yorumlanmasında bir miktar transferrin ölçümü gereklidir.

Ferritin

Ferritin, 4500’e kadar demir atomu içerebilen ve çoğu vücut dokusunda bulunan mevcut demirin ana depolama formunu oluşturan bir çekirdeğin etrafındaki 24 protein alt biriminden oluşur. Denatüre formda, ferritin hemosiderin oluşturur. Plazmadaki ferritin konsantrasyonu, her bir “g/l serum ferritini yaklaşık 8 mg depo demirine eşdeğer olmak üzere, demir depolarının seviyesi ile doğrudan ilişkilidir.

Bununla birlikte, aynı zamanda, konsantrasyonu enfeksiyon, iltihaplanma ve maligniteye yanıt olarak artan bir akut faz proteinidir ve bu, inflamatuar hastalığı olan demir eksikliği olan bir hastada “normal” serum ferritin seviyeleri ile sonuçlanabilir.

Çinko Protoporfirin (ZPP)

Hemoglobin sentezinde, ferroketalaz enzimi, hem vermek üzere protoporfirin halka sistemine demir (II) sokar. Yeterli demirin yokluğunda çinko eklenir (yine enzimatik olarak) ve çinko protoporfirin ömrü boyunca kırmızı hücrede kalır.

Bu nedenle, basit demir eksikliği veya yeterli demir depolarının varlığında fonksiyonel bir demir eksikliği nedeniyle kemik iliğinde demir bulunmadığında ZPP konsantrasyonu artar. Bu son durum, kronik hastalık anemisi ile ilgilidir.

Bu nedenle ZPP’nin ölçümü, kemik iliğinde azalan demir mevcudiyetini belirleme özelliğine sahiptir, ancak her zaman demir depoları hakkında doğrudan bilgi vermez. Artan ZPP ayrıca hem sentezinde (kırmızı hücre yaşam süresi sırasına göre) uzun süredir devam eden sorunları yansıtır ve örneğin gastrointestinal kan kaybının neden olduğu hızlı başlangıçlı demir eksikliğinde normal olabilir. Nadiren yorumlayıcı bir problem olmasına rağmen, ZPP kurşun toksisitesinde de ortaya çıkar.

Serum transferrin reseptörü (TfR)

Kemik iliğindeki çekirdekli kırmızı hücreler, transferrin reseptörlerinin büyük çoğunluğunu taşır, ancak diğer hücrelerde hücrelerin demir gereksinimlerini yansıtan sayılarda bulunurlar. Hücre zarında yer alan bu reseptörler, demirini serbest bıraktıktan sonra hücre dışı sıvıya geri dönen transferini içselleştirir.

Transferrin reseptörü, 95 kDa moleküler kütleye sahip iki özdeş protein alt biriminden oluşur. TfR sentezi demir temini ile kontrol edilir, hücre demirle dolu olduğunda azalır.

TfR plazmada bulunur, transferrine bağlıdır ve plazma veya serumdaki konsantrasyonu, hücresel transferrin reseptörlerinin sayısını yansıtır ve demir depoları yeterli olduğu sürece bu, kemik iliğinde gelişen kırmızı hücrelerin sayısını yansıtır.

Demir eksikliği, hücresel reseptörlerdeki artışa paralel olarak serum TfR’sinde artışa neden olur. Artan serum TfR, bu nedenle, azalan demir mevcudiyetini veya artan eritropoezi veya her ikisini yansıtabilir.

The post Çinko Protoporfirin – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).