Bakteri identifikasyonunda kullanılan biyokimyasal testler | Online (Parayla Ödev Yaptırma)

Bakteriyel Tanımlama Yöntemleri – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri

odevcimonline — Tue, 30 Mar 2021 11:35:26 +0000

Amaç
Glikoz fermente etmeyen bakterilerin bazı biyokimyasal reaksiyonlarını incelemek;

Malzemeler
Kanlı agar plakaları
Besleyici agar plakaları
TSI eğik
O-F glikoz derinlikleri
Oksidaz reaktifi (di- veya tetrametil-p-fenilendiamin)
Steril mineral yağ içeren damlalıklı şişe
Eğik Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii ve Escherichia coli kültürleri

Prosedürler

1. Her organizmanın Gram ile boyanmış smearını hazırlayın ve inceleyin.
2. Her organizma ile bir kan ve besleyici agar plağını inoküle edin. İzole koloniler elde etmek için plakayı sürme yöntemi ile ekin.
3. Her organizmayı aşılayın, kıçını keserek ve ilacı kırın.
4. Aşılama özenizi sütunun alt kısmına saplayarak her organizmaya iki tüp O-F glukoz aşılayın.
orta. Her iki tüp setinden birini yarım inçlik steril mineral yağ ile kaplayın.
5. Tüm plakaları ve tüpleri etiketleyin. Bunları 35 ° C’de 24 saat inkübe edin.
6. Her organizmayı, zimoksidaz varlığı için test edin. Prosedür aşağıdaki gibidir.
a. Bir parça filtre kağıdı içeren steril bir petri kabı alın.
b. Kağıdı oksidaz reaktifi ile ıslatın.
c. Aşılama halkanızla, P. aeruginosa etiketli tüpten bir miktar büyüme kazıyın ve onu kanınızın küçük bir alanına sürün.
Islak filtre kağıdı Alanın rengi açık pembeden değiştiğinden, anında pozitif oksidaz reaksiyonu görmelisiniz.
d. Tekrarlama prosedürü6büyüyüşü görmek için etiketlenmiş Abaumannii kontrol edin

Sonuçlar
1. Kanlı agar plağını hemoliz açısından ve besleyici agarı pigment üretimi açısından inceleyin. Aşağıdaki tüm biyokimyasal reaksiyonları okuyun ve kaydedin.

İdentifikasyon yöntemleri
Bakterilerin izolasyon yöntemleri
Bakterilerin ayrımında kullanılan yöntemler
Bakteri identifikasyonunda kullanılan biyokimyasal testler
Bakteri identifikasyonu nedir
Bakteriyolojik tanı yöntemleri
Nanat besiyeri hangi bakterinin ayrımında kullanılır
Bakterilerin izolasyon ve identifikasyon

Bakteriyel Tanımlama için Hızlı Yöntemler

Önceki bölümlerde gerçekleştirilen biyokimyasal testler, bakteriyel tanımlama için standart yöntemlerin temsilcisidir. Bazı durumlarda, yalnızca birkaç test kullanarak bir bakteriyi doğru bir şekilde tanımlamak mümkündür, ancak daha sıklıkla kapsamlı bir biyokimyasal “profil” gereklidir.

Çok çeşitli kültür ortamlarının hazırlanması ve el altında bulundurulması pahalı ve zaman alıcı olduğundan, birçok mikrobiyoloji laboratuvarı artık multimedya tanımlama kitlerini kullanmaktadır. Bunlar ticari olarak temin edilebilir ve özellikle yaygın enterik bakterileri tanımlamak için faydalıdır.

Bu tür kitlerin kullanımı, sonuçların okunabilmesi için her zamanki gibi gece boyunca inkübe edilmeleri gerekmesine rağmen, geleneksel olarak “hızlı yöntemlerin” bir uygulaması olarak anılır. Bazılarının aşılanması hızlıdır, bazıları ise 24 saat içinde tam teşhise izin verir.

Bir tip kit, Enterotube II (BD Diagnostic Systems), bir agar plakasındaki tek bir izole koloniden hızla inoküle edilebilen 12 bölmeli, geleneksel agar medyadan oluşan bir tüptür.

Sağlanan ortam, organizmanın karbonhidratları glikoz, laktoz, adonitol, arabinoz, sorbitol ve dulcitol fermente edip etmediğini, H2S ve / veya indol ürettiğini; asetilmetilkarbinol üretir; fenilalanini deamine eder; üreyi böler; dekarboksilatlar lizin ve / veya ornitin; ve ortamdaki tek karbon kaynağı olduğunda sitratı kullanabilir. Enterotube II tarafından sağlanan diğer testlerin mekanizması önceki alıştırmalarda veya deneylerde açıklanmıştır.

API Sistemi (bioMérieux Inc.), bakterilerin hızlı bir şekilde tanımlanması için başka bir kit tipini temsil eder. Bu sistem, tek bir şerit halinde, tanımlanacak bakterinin salin süspansiyonu ile rehidre edilmiş 20 mikrotüp (minyatür test tüpleri) içeren bir dizi dehidrate ortam sağlar.

Şeritte yer alan testler, organizmanın glikoz, mannitol, inositol, sorbitol, ramnoz, sakaroz, melibiyoz ve amigdalini fermente edip etmediğini belirler; indol ve H2S üretir; üreyi böler; triptofan (fenilalanin ile aynı mekanizma), lizin, ornitin ve arginin amino asitlerini parçalar; jelatinaz üretir; glikozdan asetilmetilkarbinol oluşturur (VP testi); ve bileşik o-nitrofenil -‘- D-galaktopiranosidi (ONPG) böler. ONPG üzerinde etkili olan ‘-galaktosidaz adı verilen enzim de laktoz fermentasyonundan sorumludur.

Bununla birlikte, bazı bakteriler, ‘-galaktosidaza sahip olsalar da, laktozu parçalanmak üzere hücrelerine taşıyamazlar. Bu nedenle laktoz suyunda, bu tür bakteriler asit üretimi göstermede başarısız olur veya bunu yalnızca günler veya haftalar sonra yaparlar.

Aksine, ONPG ortamında ‘-galaktosidazları substratı birkaç saat içinde böler ve parlak sarı bir son ürün üretir. Bu nedenle ONPG, bir organizmanın laktozu fermente etme yeteneğinin hızlı bir şekilde gösterilmesi için kullanılabilir.

Üçüncü tip bir kit olan MicroScan (Dade Behring), duyarlılık testi için kurutulmuş antimikrobiyal maddeler ve enterik ve glukoz fermente etmeyen gram-negatif basillerin tanımlanması için biyokimyasal reaktifler içeren çok oyuklu bir panelden oluşur.

Panelin kuyuları, standartlaştırılmış bir organizma süspansiyonu ile aşılanır, 16 ila 24 saat 35 ° C’de inkübe edilir ve ardından görsel olarak veya otomatik bir cihazda okunur. Bu şekilde, antimikrobiyal duyarlılık testi ve organizma tanımlama eşzamanlı olarak sağlanır.

Enterik organizmalar için, kuyularda bulunan biyokimyasallar karbonhidratların (glukoz, sukroz, sorbitol, rafinoz, ramnoz, arabinoz, inositol, adonitol, melibioz) fermantasyonunu test eder; üreaz, H2S ve indol üretimi; lizin, arginin, ornitin, triptofan ve eskülinin parçalanması veVP ve ONPG reaksiyonlarıdır.

Ek olarak, glukoz fermente etmeyenler için yapılan testler arasında O-F glukoz; sitrat, malonat, tartrat ve asetamid içeren minimal ortamda gelişme yeteneği; ve nitratı azaltma yeteneğidir.

Daha doğru bakteri tanımlamasına izin vermek için, her bir pozitif biyokimyasal reaksiyona bir numara atayan bu üç kitin her biri için bilgisayarlı bir tanıma sistemi tasarlanmıştır. Bu rakamlar, her organizmaya sayısal bir kod vermek için bir arada gruplandırılmıştır.

Bilinmeyen bakteriler, bir dizin kitabındaki pozitif tepkileriyle sağlanan kod numarasına bakılarak tanımlanabilir. Aynı bakterinin farklı suşları, belirli biyokimyasal test sonuçlarında değişiklik gösterebilir ve bu nedenle farklı kod numaralarına sahip olabilir.

Bu varyasyonlar bazen epidemiyolojik belirteçler olarak kullanılabilir, tıpkı faj tiplemesinin farklı Staphylococcus aureus suşlarını tanımak için kullanıldığı gibidir.

Diğer bir gelişme, hem tanımlama hem de animikrobiyal duyarlılık testlerinin sonuçlarını okumak ve yorumlamak için otomatik cihazların kullanılmasıdır. Testler, bir dizi biyokimyasal madde ve çeşitli antimikrobiyal ajanların farklı konsantrasyonlarını içeren özel, şeffaf plastik çok hücreli odalarda yapılır.

Plastik odalar daha sonra, pH göstergelerinin rengindeki değişiklikler için her bir biyokimyasal kuyuyu periyodik olarak tarayan ve türbidite (direnci gösterir) açısından antimikrobiyal madde kuyularını tarayan cihazda inkübe edilir.

Belirli bir sürenin sonunda, cihazdaki bilgisayar tüm reaksiyonları yorumlar ve ardından organizma tanımlama ve antimikrobiyal duyarlılık sonuçları yazdırılır. Kullanılan sisteme bağlı olarak 2 ila 6 saat gibi kısa bir sürede sonuç alınabilir.
Bu deneyde, bakterilerin tanımlanması için bazı hızlı otomatik olmayan yöntemler gösterilecektir.

The post Bakteriyel Tanımlama Yöntemleri – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).

Saf Kültür – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri

odevcimonline — Sat, 20 Mar 2021 17:45:13 +0000

Saf Kültürler Elde Etmek İçin Çizgi Çizme Tekniği

İnsan vücudunun deri ve birçok mukozal yüzeyi, normal veya yerli florayı oluşturan çok sayıda mikroorganizmayı destekler. Bu yüzeylerden klinik örnekler toplandığında ve kültürlendiğinde, aranan patojenik mikroorganizmalar diğer zararsız organizmalar arasında tanınmalı ve onlardan izole edilmelidir.

Patojenik türlerin kolonileri, karışık kültürden seçilmeli ve izole edilmiş saf kültürde büyütülmelidir. Mikrobiyolog daha sonra izole edilmiş organizmayı biyokimyasal ve immünolojik özelliklerini inceleyerek belirleyebilir. Saf kültür tekniği, mikroorganizmaların başarılı ve doğru bir şekilde tanımlanması için çok önemlidir.

Amaç

A.Karışık flora içeren bir örnekten saf kültürleri izole etmek için

B.Ağızın normal florasını kültürlemek ve incelemek

Malzemeler

Besleyici agar plakaları

Kanlı agar plakaları

Steril bezler

Aşağıdakileri içeren bir karışık et suyu kültürü

Serratia marcescens (pigmentli), Escherichia coli ve

Staphylococcus epidermidis

İyi sürme yöntemi ile izole edilmiş kolonileri gösteren, bu et suyundan yapılmış bir gösteri plakası kültürü

Cam slaytlar

Gram boyama reaktifleri

Saf kültür nedir
Saf kültür nedir Mikrobiyoloji
Bakteri identifikasyonunda kullanılan biyokimyasal testler
Saf kültür izolasyonu
Mikrobiyoloji ekim Yöntemleri nelerdir
Saf kültür elde ETME yöntemleri
Bakteri stok kültürü
Mikrobiyoloji kültür Çeşitleri

Prosedürler

A. Koloni İzolasyonu İçin Karışık Kültürü Sürerek Ekleme

1. Kültür tüpünün içeriğinin eşit şekilde karıştırıldığından emin olun.

2. Besin maddesinin yüzeyinde, besleyici tabakanın yüzeyinde, besleyici tabakanın yüzeyine yakın bir yerde, besleyici bir kültür yerleştirin.Loopflat ile agar yüzeyine karşı, aşıyı plak alanının yaklaşık sekizde biri boyunca hafifçe ileri ve geri sürün; agarı kazmayın.

3. Döngüyü sterilize edin ve havada soğumaya bırakın.

4. Sol elinizdeki açık plakayı döndürün, böylece her biri içinden geçen bir dizi dört çizgi ileri ve geri çekebilirsiniz.

inokülum ve plağın bir tarafı boyunca uzanır.

5. Döngüyü tekrar sterilize edin ve havada soğumaya bırakın.

6. Plakayı döndürün ve her biri son dört çizginin sonunu geçen ve enine uzanan dört çizgiden oluşan başka bir seri çizin.

plakanın bitişik tarafı.

7. Plakayı döndürün ve bu paralel çizgiyi bir kez daha tekrarlayın.

8. Son olarak, plakanın el değmemiş merkezinde birkaç çizgi yapın. Orijinal aşıya dokunmayın.

9. Plakayı (ters çevrilmiş olarak) 35 ° C’de inkübe edin.

B. Ağızdan Kültür Almak

1. Dilinizin ve diş etlerinizin yüzeyi üzerinde steril bir pamuklu çubuk döndürün.

2. Eküvyonu bir kan agar plağının yüzeyinin 112 cm2’lik küçük bir karesi üzerinde yuvarlayın, bir kenara yakın fakat dokunmadan. Eküvyonu bu alanda tamamen döndürün.

3. Eküvyonu bir dezenfektan kabına atın.

4. Bir inokülasyon özesi kullanarak plağı şekil 9.1’deki gibi sürme yöntemi ile ekin.

5. Plakayı (ters çevrilmiş) 35 ° C’de inkübe edin.

Sonuçlar

A.Karışık Kültürden Çizilen Plakaların İncelenmesi

1. İnkübe edilmiş besleyici agar plağını dikkatlice inceleyin. Çizginizi şekil 9.2a ve b’de gösterilenle karşılaştırın. Eklenen her alandaki büyüme yoğunluğunu gösteren bir çizim yapın.

2. Ayırt edebileceğiniz her farklı koloni türünü tanımlayın.
3. Mevcut her türden izole bir koloninin Gram boyasını yapın. Ayrıca, ilk inokülümün yerleştirildiği alandaki gelişimin bir Gram boyasını hazırlayın. (Not: Bir agar besiyerinde kolonilerden bir leke yapılacaksa, önce slayt üzerine bir öze dolusu steril su veya salin koyun ve sonra bu damlada toplanan büyümeyi emülsiyon haline getirin. metanol ve leke.)
4. Gözlemlerinizi sağlanan tabloya kaydedin.

B.Kan Agar Plakasında Ağız Kültürünün İncelenmesi

1. Kanlı agar plakasında kaç farklı koloni türü bulabilirsiniz? Her birini tanımlayın.
2. Üç farklı koloninin her birinden bir Gram boyama yapın. Her birinin Gram reaksiyonunu kaydedin ve mikroskobik morfolojisini daireler halinde çizin.
3. Kanlı agar plağını “KİRLENMİŞ” işaretlenmiş bir kaba atın.

Sorular

1. Bir agar plağı inoküle edildiğinde, ilk inokülum takıldıktan sonra öze neden sterilize edilir?
2. Saf bir kültür, karma bir kültür tanımlayın.
3. Bir bakteri kolonisi tanımlayın. Bakteri kolonilerinin ayırt edilebileceği dört özelliği listeleyin.
4. Bir petri kabı neden uzun bir süre açık bırakılmamalıdır?
5. Plaklarınızı aşılamak için kullandığınız sürme yöntemi neden izole koloniler oluşturuyor?
6. Bireysel kolonileri karışık bir büyümeden izole etmek neden gereklidir?
7. Neden ağzınızdaki kültür için besleyici bir agar yerine kanlı bir agar plakası kullanıldı?
8. Ağızda bulunan çok sayıda mikroorganizma endişe kaynağı mıdır? Açıklamak.
9. Mikroorganizmalar ağza nasıl girerler?

Dökme Plak ve Alt Kültür Teknikleri

İzole koloniler elde etmek için, yüzeylerine sürme yöntemi ile ekim yapmak dışında agar plakaları kullanmanın alternatif bir yöntemi, bir “dökme plakası” hazırlamaktır. Bu durumda, kültürlenecek numunenin bir alikotu boş, steril bir petri kabının dibine yerleştirilir, ardından eritilir, soğutulmuş agar üzerine dökülür.

Agar soğumadan hızla, aşıyı dağıtmak için plak yavaşça sallanır. Agar çökeldiğinde ve plaka inkübe edildiğinde, örnekte bulunan herhangi bir bakteri, agar tabakası içine gömülü veya yüzeyinde lokalize olmuş her yerde büyüyecektir.

Kolonileri izole edilecek ve aşılama döngüsü veya düz bir tel agara yerleştirilerek yüzey altı konumlarından çıkarılabilir. Dökme plakalarını hazırlamak için inokülum sıvı bir örnek veya kültür olmalıdır. Değilse, petri kabına yerleştirilmeden önce steril sıvı içinde süspanse edilmelidir.

Bir dökme plakası hazırlamak için başka bir yöntem, numuneyi veya kültürü doğrudan eritilmiş, soğutulmuş, ancak henüz katılaşmamış agar tüpüne inoküle etmektir. Her iki elin uzatılmış parmakları arasında ileri geri yuvarlayarak karıştırın ve aşılanmış agarı steril bir petri kabına dökün. Agar sertleşmek için yeterince soğumadan önce bu adımlar hızlı bir şekilde gerçekleştirilmelidir.

Birincil izolasyon plakları uygun şekilde döküldüğünde veya sürme yöntemi ile ekildiğinde, tek tek koloniler bir inokülasyon özesi veya düz tel üzerinde alınabilir ve taze agar veya broth besiyerine inoküle edilebilir. İzole edilmiş organizmaların bu yeni saf kültürlerine alt kültürler denir.

Gerçekten saflarsa ve farklı türlerin karışımlarını içermiyorlarsa, sonraki alıştırmalarda göreceğiniz gibi aşamalı prosedürlerde tanımlanabilirler.

The post Saf Kültür – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).