HPLC tüm bu kriterleri karşılar ve artık memeli dokusu, bitki dokusu ve gıda özütleri dahil olmak üzere çeşitli kaynaklardan alınan örneklerin analizinde yaygın olarak kullanılmaktadır.

HPLC’nin genel verimliliği ve çeşitli kromatografik modlar, analizlerin çoğunun ters faz, ters fazlı iyon çifti, normal faz veya iyon değişimli HPLC ile yapılmasına izin verir. Boyut dışlama ve afinite gibi diğer kromatografik modlar, vitaminlerin kromatografisinde sınırlı uygulama bulmuştur.

Pek çok vitamin son derece kararsızdır ve ekstraksiyon ve HPLC analizi sırasında stabilitelerinin iyileştirilmesine büyük önem verilmiştir. Kararsızlıklarının bir sonucu olarak, vitaminlerin HPLC ile analiz edilmesindeki en büyük zorluk, onları bozulmalarına neden olmadan çevrelerinde bulunan karmaşık moleküllerden çözmektir.

Ekstraksiyon ve numune hazırlamanın tüm alanını kapsamaya yönelik hiçbir girişim yapılmaz ve okuyucu bir incelemeye yönlendirilir; ancak, uygun yerlerde metinde belirli örnekler verilmiştir. 

Yağda Çözünen Vitaminler

A vitaminleri

Bu vitamin sınıfı, retinoidler olarak da bilinen ve aynı zamanda vitamin A benzeri aktivite sergileyen bazı karotenleri (özellikle bitkilerden a -, / 3- ve y-karoten) içeren bir grup molekülü içerir. Bu bileşiklerin birçok türevi doğal olarak bulunur ve alkol, asetat ve palmitatı içerir.

A vitamini sınıfının çözünürlüğü için en iyi kromatografik mod, genellikle ekstraksiyon için kullanılan koşullar tarafından belirlenir.

Örneğin, lipidleri uzaklaştırmak için sabunlaşmadan sonra genellikle bir C veya Cı silika bazlı sabit faz kullanılarak sulu ters fazlı HPLC ile uyumlu olan heksan gibi çözücülere ekstraksiyon yapılır. Asetonitril içinde% 0.5 asetik asitin mobil fazını destekleyen bir Cı kullanan alternatif bir sistem rapor edilmiştir.

Alternatif olarak, numunelerin organik çözücülere ekstrakte edildiği yerlerde normal faz HPLC de kullanılabilir. Bu seçenek, A vitaminlerinin optik izomerlerinin çözünürlüğü için özellikle değerlidir ve örneğin, 13-cis-retinolkan bu sistem kullanılarak çözülebilir.

Retinoil türleri, kromatografiden önce retinole dönüştürülebilir, ancak sonraki profilin de üretilebilecek olası ara maddelerin sayısı nedeniyle yorumlanması zordur. Sulu olmayan ters faz kullanılarak iki tür tütün yaprağından A vitamini ekstraktlarının bilgisayar destekli bir analizi gösterilmektedir.

Kaydedilen karoten türevlerinin sayısı, hem kromatografik sistemler hem de saptama yöntemleri geliştikçe artmaktadır ve şu anda 300’den fazla doğal olarak oluşan karotenoid keşfedilmiştir. Karotenoidlerin tahlili için mevcut yöntemlerin yakın zamanda karşılaştırılması, HPLC’nin hız ve kantitasyon kolaylığı nedenlerinden ötürü diğer tekniklerden üstün olduğu sonucuna varmıştır.

A vitamini ve türevlerinin tespiti en uygun şekilde floresans izlenerek gerçekleştirilir; ancak 313-328 nm’de UV saptaması da mümkündür. Karotenlerin tespiti, 450 nm’de UV tespiti kullanılarak gerçekleştirilebilir.

Suda ve yağda çözünen vitaminler
Yağda çözünen vitaminler özellikleri
Suda çözünen vitaminler
Gıdalarda bulunan yağda çözünen vitaminler
Yağda çözünen vitaminler depolanır mı
Suda ve yağda çözünen vitaminlerin özellikleri
Yağda çözünen maddeler
Yağda çözünen vitaminler nerede depo edilir

D vitaminleri

D vitaminlerinin HPLC analizi özellikle zordur çünkü bunlar yalnızca çok düşük konsantrasyonlarda mevcuttur. Birçok ekstraksiyon yöntemi kullanılmıştır, ancak en yaygın olanı numuneyi sabunlaştırmak ve organik bir faza (genellikle heksan veya dimetil-sülfoksit) ekstrakte etmektir.

Bu çözücü, ters faz sistemi kullanılarak morina karaciğeri yağından D, D ve E vitaminlerinin mükemmel bir şekilde ayrılmasına izin verdiği için, bir mobil dietil eter fazının heksana tercih edilebilir olduğu ileri sürülmüştür.

D ve D vitaminlerinin analizindeki başlıca kirleticiler, bunların ilgili metabolik öncüleri olan 7-dehidrokolesterol ve ergosteroldür; bununla birlikte, hem normal faz hem de ters faz sistemleri tatmin edici ayrımlar sağlayabilir. Bu vitaminlerin tespiti genellikle 254 nm’de UV tespiti kullanılarak gerçekleştirilir.

E vitaminleri

HPLC artık bitki dokusu özlerinden E vitaminlerinin (tokoferoller) analizi için tercih edilen yöntem olarak kabul edilmektedir. Bununla birlikte, E vitaminlerinin ekstraksiyonundaki zorluklar, numuneleri her zaman uygun bir kromatografik tamponda bırakmaz ve sonuç olarak başka analiz yöntemleri de kullanılmıştır.

E vitamini aktivitesi, genellikle tokoferoller ve tokotrienoller olarak sınıflandırılan bir dizi kimyasal türde bulunur. En yaygın formlar a-, fi-, y- ve & tokoferollerdir ve her birinin ayrılması, normal faz veya ters faz kromatografisi kullanılarak gerçekleştirilebilir – E vitamini ve türevlerini içeren doku ekstraktlarının analizi genellikle sabunlaşmayı ve ardından organik çözücülere ekstraksiyonu içerir. .

Yakın tarihli bir rapor, doku ve plazma a-tokoferol seviyelerinin analizi için aseton ekstraksiyonunun ardından ters faz kromatografisinin kullanılmasını önermektedir. Sabit faz, metanol içinde% 2 su mobil fazı ile Lichrosorb RP-18 idi.

Normal fazlı bir Micropak Si-5 desteğini kullanan alternatif bir sistemin, 0.5-1.0 ng kadar düşük bir algılama hassasiyeti ile tokoferollerin doku özütlerinin tekrarlanabilir tahminlerini verdiği de rapor edilmiştir.

A-tokoferolün tespiti en iyi, sırasıyla 295 nm ve 340 nm’lik eksitasyon ve emisyon dalga boylarında flüoresan tespit kullanılarak gerçekleştirilir. 294 nm’de UV tespiti de mümkündür, ancak daha az hassastır.

K vitaminleri

K vitaminlerinin analizi için iki aşamalı bir kromatografik sistemin kapsamlı bir şekilde geliştirildiği bildirilmiştir. Başlangıçtaki normal faz kromatografisini ve ardından ters faz kromatografisini içeren bu yöntem gerekliydi çünkü süt ve plazma ekstrelerinde sadece küçük miktarlarda K vitamini mevcuttu.

Bitki özleri için alternatif metodolojiler bildirilmiştir. Yukarıda açıklanan ikiz kolonlu sistemin kullanımı, rutin hızlı analiz için dezavantajlara sahiptir ve K vitamininin heksana ekstrakte edilebildiği ve daha sonra doğrudan ters faza veya normal faz kromatografik analize tabi tutulabildiği basitleştirilmiş bir sistem önerilmiştir. Bu çalışmada normal fazın, kromatografik profili basitleştirerek ters fazlı kromatografiden üstün olduğu bulunmuştur.

Numuneler, silika sabit bir faza uygulandı ve izokratik koşullar altında heksan içinde% 0.2 asetonitrilden oluşan bir mobil faz ile elüte edildi. K vitamini grubundan bileşiklerin tespiti, 248-254 nm’de UV kullanılarak gerçekleştirilebilir.

Flüoresan veya amperometrik saptama ile birleştirilmiş bir kolon sonrası kolorimetrik indirgeme sistemi kullanılarak plazma özütlerinde saptamanın hassasiyetinin alt nanogram düzeyinde olduğu bildirilmiştir. Floresans tespiti, bildirilen minimum 25 pg seviyesine sahiptir ve normal faz veya ters fazlı HPLC ile kombinasyon halinde kullanılabilir.

The post Yağda Çözünen Vitaminler – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).