Yıkama zirveleri, hareketli bir tel alev iyonizasyon detektörü ile izlendi. Karaciğerde bulunan nötr lipidlerin ve serbest yağ asitlerinin benzer bir ayrımı, sabit bir silika fazı kullanılarak gösterilmiştir.

Bu sistemde 2,2,4-tri-metilpentan-tetrahidrofuran-formikasitin (90: 10: 0.5) bir mobil fazı, bir kırılma indisi detektörü ile birlikte kullanıldı ve tepe başına -0.5-1.0 pg’lik bir alt tespit limiti sağladı. . Bu yazarlar, bu tür ayırmalarda ters faz tekniklerinin kullanılmasının, tek tek asilgliserolleri çözerek, sonuçta ortaya çıkan kromatogramı aşırı karmaşık hale getirdiği için faydasız olduğuna işaret ettiler.

Silika sabit fazlar kullanılarak, ancak alternatif mobil fazlarla benzer ayırmalar, serum lipidleri, keten tohumu yağı ve soya fasulyesi yağı ve çoklu asilgliserollerin kromatografik analizinde kullanılmıştır.

Gümüş nitrat yüklü silika sabit fazları kullanan argentasyon HPLC, 2-doymamış-1,3-doymamış (SUS), l-doymamış-2,3-doymamış (USS) dahil olmak üzere trigliseridlerin konumsal izomerlerinin analizi için kullanılmıştır. tamamen doymuş (SSS) ve tamamen doymamış (UUU) izomerler vardır.

Bu ayırmalarda, silika% 10 gümüş nitrat ile yüklendi ve kullanılan mobil fazlar ya benzen ya da toluen idi. Lipid türlerinin çözünürlüğünün, kolon sıcaklığı düşürüldükçe arttığı bulundu ve bu ayrımlarda sıcaklık, 6.0-6.8 “C’de tutuldu.

Triasilgliserollerin en erken bağlanmış faz kromatografik ayrımlarından bazıları, aseton-su-heptan artı% 1 piridin mobil fazları ile kombinasyon halinde düşük basınç koşulları altında sabit bir hidroksialkoksipropil Sep-hadeks fazı ve asit hidrolizini azaltmak için veya 2-lik bir gradyan sistemi kullanmıştır.

Bu ayrımlarda, doymamış trigliseridlerin her bir çift bağ için daha önce 1.42 metilen birimine eşdeğer olarak ayrıştırılmasıyla Cı ila Cı trigliseridlerinin iyi çözünürlüğü rapor edilmiştir. Daha yakın zamanlarda, ters faz ayrışmaları, aseton-asetonitrilin mobil fazları ile birlikte ODS sabit fazlarının kullanımı üzerinde yoğunlaşmıştır.

Bu sistemlerde, ayrı ayrı tri-gliseridlerin ayrılması, ayrı ayrı esterlenmiş yağ asitlerinin zincir uzunluğu ve doymamışlık derecesi temelinde yapıldı. Yağlı asit zincirinin uzunluğu arttıkça, trigliseridlerin alıkonma süresi artarken, bir çift bağın eklenmesi, tutma süresini yaklaşık iki daha az metilen birimi olan bir trigliseridinkine düşürdü.

Triaçilgliserol
Trigliserit kimyasal formülü
Yağ asidi formülü
Doymamış yağ asitleri
Trigliserit sentezi
Trigliserit nerede depolanır
Oleik asit
Trigliserit nedir

Benzer şekilde, risinoleik asit gibi hidroksi yağ asitlerini içeren trigliseridler, normal trigliseridlerden biraz önce ayrıştırıldı ve yağlı asitlerde epoksi gruplarının varlığı da tutulma süresini büyük ölçüde azalttı.

Durağan fazın özelliklerinin de önemli olduğu gösterilmiştir, trigliseridlerin daha iyi çözünürlüğü ya artan karbon yüklemesi ya da azaltılmış partikül boyutu ile kolonlardan elde edilmiştir.

Trigliserid analizi için HPLC kullanmayı planlayan kromatografi için pratik bir değerlendirme, kolon verimliliği üzerinde alışılmadık derecede büyük bir etkiye sahip olduğu için numunenin içinde çözündüğü çözücünün seçiminde biraz dikkatli olunması gerektiğidir.

İdeal olarak, mobil faz, ekstraksiyondan sonra sulandırıcı çözücü olarak kullanılmalıdır, ancak çözünürlük sorunları nedeniyle bunun pratik olmadığı durumlarda, kullanılacak en iyi çözücü asetondur, çünkü kloroform, dietil eter ve tetrahidrofuran kullanımından kesinlikle kaçınılmalıdır. 

Zincir uzunlukları ve doymamışlık dereceleri temelinde ayrı trigliserit türlerinin ayrılması için bir dizi alternatif ters faz sistemi kullanılmıştır. Örneğin, birinci geleneksel ters fazlı HPLC ayırmada,% 60 sulu metanolden oluşan bir mobil faz kullanılmıştır.

Bir asetonitril-aseton fazı için bir metanol-aseton mobil fazının ikamesinin, tutma süresinde küçük değişikliklere neden olduğu ve bir yağlı aside bir çift bağın ilk mobil fazda 2,2 karbon atomuna eşdeğer olduğu ve ikinci mobil fazda 2,4 karbon atomuna eşdeğerdir.

Bir mobil asetonitril-tetrahidrofuran-heksan fazının, kritik trigliserit çiftlerinin çözülmesinde yararlı olduğu gösterilmiştir. Metilen klorür-asetonitril veya tetrahidrofuran-asetonitrilin mobil fazlarında tributirin, trikaprilin, trilaurin ve tripalmitinin benzer kromatografik ayrımları bildirilmiştir.

Bir gradyan HPLC sisteminde propiyonitril-asetonitril karışımlarının kullanımının, trigliseridlerin ayrı moleküler türlerinin iyi çözünürlüğünü sağladığı yakın zamanda gösterilmiştir ve iki çözücünün kesin oranının aseton-asetonitril karışımlarından daha az kritik olduğu öne sürülmüştür.

Bununla birlikte, bir uyarı olarak, propiyonitril, aksi takdirde çözücüde birikebilecek alkali safsızlıkları gidermek için kullanımdan önce fosforlu pentoksit üzerinde damıtılmalıdır.

Son olarak, metanol-2-propanolün mobil fazı (3: 1) artı 0.05 N gümüş klor oranı ile kombinasyon halinde bir ODS kolonu kullanılarak oldukça alışılmadık bir mobil faz ve sabit faz kombinasyonu rapor edilmiştir.

Sabit faza gümüş iyonlarının eklenmesinin trilino-lenin, triolein ve trielaidinin çözünürlüğünü iyileştirdiği, ayırmaların zincir uzunluğu ve doymamışlık derecesi temelinde gerçekleştirildiği bildirilmiştir.

Yukarıda açıklanan ters faz ayrımlarında elüsyon zirvelerini izlemenin en popüler yöntemleri, refraktif indeks detektörleri ve alev iyonizasyon detektörlerinin kullanılması olmuştur.

İkincisi artık ticari olarak mevcut olmasa da, refraktif indeks detektörlerindeki teknolojik gelişmeler sürekli olarak alt tespit limitlerini geliştirmektedir ve trigliseridler için bu 0.5-1.0 pg aralığındadır. Sulu olmayan ters faz sistemi, 1700 cm- ‘dalga boyunda bir kızıl ötesi detektör izleme ile kombinasyon halinde kullanılmıştır.

Daha yakın zamanlarda, trigliseridler, doğrudan bir sıvı arayüz yoluyla kabul edilen kolon eluentiyle bir dört kutuplu kütle spektrometresi kullanılarak analiz edilmiştir.

Bu tekniği kullanan bir numune için tespit limiti yaklaşık 50 ng idi, ancak kolon eluentinin sadece% 1’i kütle spektrometresine enjekte edildiğinden kolon enjeksiyonu için en az 100 kat daha fazla materyal gerekliydi.

Son olarak, açilgliserollerin ve trigliseridlerin moleküler türlerinin ayrıştırılması için jel geçirgenlik kromatografisi kullanılmıştır. Tetrahidrofuran ile ayrıştırılan stiragel kolonlar, serbest gliserol ve mono-, di- ve triasilgliserollerin ayrıştırılması için kullanılmış olup, eluent bir kırılma indisi detektörü ile izlenmektedir.

Trigliseridlerin serum lipoproteinleri içindeki dağılımı, 0.15 M sodyum klorür ile ayrıştırılan bir TSK GEL permeasyon kolonu kullanılarak da analiz edilmiştir.

Ayrıştırılan trigliseridler, son aşama N-etil-N- (3-metilfenil) -N-asetiletilendiamin bileşiğinin 550 nm’de güçlü bir şekilde emilen bir kinon diamin boyasına dönüştürüldüğü bir dizi sütun sonrası enzimatik türevlendirme reaksiyonuna tabi tutuldu. . Bu türetme prosedürünü kullanan alt saptama sınırının, yıkanan tepe başına yaklaşık 1 pg olduğu bildirildi.

The post Triasilgliseroller – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).