Sfingolipidler nedir
Sfingolipidler
Sfingolipidler nerede bulunur
Sfingozin nedir
Sfingolipidler nelerdir
Sfingolipid yapısı
Sfingolipid ne işe yarar
Sfingolipid sentezi

UV saptamanın hassasiyeti, molekül başına en az bir çift bağ bulunması koşuluyla 1 nmol fosfatilkolin düzeyindedir.

Fosfolipidlerin tespitinin hassasiyetini artırmaya yönelik alternatif bir strateji, gelişmiş bir UV abzorbanına sahip bir türev oluşturmaktır. Birincil amino grupları içeren fosfolipitlerin kantitatif ölçümü için oldukça hassas bir yöntem, bifenilkarbonil türevleri oluşturmaktır.

Bu yöntem fosfatidilserin, fosfatidiletanolamin ve lizofosfatidiletanolaminin tespitine uygulanmıştır, burada alt tespit limitinin 10-13 pmol veya 0.3-0.4ng fosfolipid fosfor olduğu önerilmiştir.

Benzer şekilde, birincil amino grupları içeren fosfolipidler, DNS-C1 (1-dimetilaminonaftalin-5-sülfonil klorür) ile türetilebilir. DNS türevleri oldukça floresandır ve 342 nm’lik bir uyarma dalga boyu ve 500 nm’lik emisyon dalga boyu kullanılarak, yaklaşık 20 pmol’luk bir alt saptama limiti elde edilmiştir.

Fosfolipitlerin kantitasyonu için kullanılan diğer iki algılama sistemi alev iyonizasyon dedektörleri ve kırılma indisi (RI) dedektörleridir. Yazma sırasında HPLC sistemleriyle kullanılmak üzere hiçbir alev iyonizasyon dedektörü ticari olarak mevcut değildir.

RI detektörleri kullanılarak tespit sınırı, spesifik fosfolipide bağlıdır, ancak amniyotik sıvının ekstraktlarında fosfatidiletanolamin için 0.6 pmol / l ile lisolesitin için 55 pmol / l arasında değiştiği bildirilmiştir. Teknik gelişmelerin, RI dedektörlerinin hassasiyet sınırında önemli artışlar sağlayacağı tahmin edilmektedir.

Radyoaktif olarak etiketlenmiş fosfolipidlerin tespit edileceği durumlarda, elüsyon radyoaktivitesi, bir çevrimiçi akış detektörü ile veya fraksiyon toplama ve sintilasyon sayımı ile izlenebilir. Bu alternatif, yüksek spesifik aktiviteye sahip bileşikler mevcut olduğunda çok hassas bir tespit şekli sağlar.

Sfingolipidler

Uzun zincirli tabanlar ve seramidler

Seramidler, en yaygını sfingosin (trans-4-sfingenin) olan uzun zincirli bazlara sahip uzun zincirli yağ asitlerinin amidleridir. Uzun zincirli bazlar, asit hidrolizi ile glikosfingolipidlerden salınabilir ve daha sonra ters fazlı HPLC’ye tabi olabilecek türler oluşturmak üzere türevlendirilebilir.

Azo boyası 4-dimetilaminoazobenzen-4-sülfonilklorür (dabsil-C1) ile ön kolon türevlendirmesi yoluyla pikomolar aralıktaki sfingoid bazların belirlenmesi yakın zamanda açıklanmıştır.

Kullanılan sabit faz, bir Zorbax CN kolonuydu (Du Pont Instruments) ve mobil faz,% 90 asetonitrile yükseltilmiş bir asetonitril-0.0175 M sodyum asetat gradyanı, pH 6.0 (90:60) kullandı. 430 nm’de UV saptaması kullanılarak 5 pmol’luk bir saptama sınırı bildirildi ve çok çeşitli sfingoid bazları ayrıldı.

Alternatif bir dezinasyon giderme prosedürü, glikosfingolipidlerin asit hidrolizinden sonra sfingoid bazların bifenilkarbonil türevlerini oluşturur. Sonraki ters faz kromatografisi, Ultrasphere ODS’nin sabit bir fazını ve tetrahidrofuran-metanol-su veya metanol-suyun mobil fazlarını kullandı.

280 nm’de UV saptama kullanılarak, 1 nmol’den daha düşük bir alt saptama sınırı bildirildi ve aşağıdakiler dahil çok çeşitli bazlar çözüldü ve saptandı: C ,, – 5-hidroksifingosin, C ,, – eritro- ve treo- sfingenin, sfinganin, C1, -5-O-metil- ve 3-O-metil-sfingenin, C ,, – sfingenin, sfingosilfosfatidilkolin ve psikosin.

Seramidler, benzer kolonlarda hem ters fazlı HPLC hem de susuz ters fazlı HPLC ile çözülmüştür. Klo-roform-metanolün hareketli bir fazı ile kombinasyon halinde bir ODS sabit faz kullanılarak, yumurta sarısı ve sığır beyninden hem hidroksi hem de hidroksi olmayan seramidlerin benzoil ve p-nitrobenzoil türevlerinin çözüldüğü bildirilmiştir.

P-nitrobenzoil türevleri, 260 nm’de UV saptamasıyla nicelendirildi ve 50 pmol’luk bir alt saptama limiti bildirildi. Alternatif bir türetme prosedürü, değişen oranlarda metanol ve asetonitril içeren bir mobil faz ile kombinasyon halinde bir ODS sabit faz üzerinde kromatografi ile perbenzoil türevlerinin oluşturulmasını içerir.

Bu kromatografik sistemin, adrenolökodistrofi hastalarının periferik sinirlerinde bulunan serebrosidlerden ve sülfatidlerden seramidleri çözdüğü gösterilmiştir.

Hem hidroksi hem de hidroksi olmayan seramitlerin benzoillenmiş türevleri, n-pentan içinde% 0.05 metanol veya heksan-etil asetat karışımları dahil olmak üzere çeşitli mobil fazlarla sulu olmayan ters fazlı kromatografi kullanılarak çözüldü.