Glikosilseramidler, uzun zincirli bazın 1. konumu aracılığıyla glikoza veya galaktoza veya bir polisakkarit birimine bağlanan bir seramid birimi içerir. Serebrositler terimi, ikincisini tanımlamak için kullanılmıştır. Glikosilseramidlerin ayrılması ve saptanması için kullanılan en yaygın HPLC teknikleri, genellikle O-asilbenzoil türevini oluşturmak için kolon öncesi türevlendirmeyi ve ardından bir silika sabit fazda normal faz kromatografisini ve UV saptamayı içerir.

Erken kolondan türetme işlemlerinde türetme ajanı olarak benzoil klorür kullanıldı, ancak benzoil anhidrit, ya hidroksi olmayan yağ asitleri (NFA-CR) ya da hidroksi yağ asitleri (HFA-CR) içeren serebrosidler için de kullanıldı ve ardından bir silis üzerinde kromatografi yapıldı. pentan içinde% 0.13 metanol içeren bir mobil faz ile sabit fazdır.

Glikosilseramidlerin perbenzoil türevlerinin silika sabit fazlar üzerinde ayrıştırılması için daha yaygın olarak kullanılan bir mobil faz, hekzan içinde artan bir dioksan konsantrasyonu gradyanı kullanır.

Altıdan az şeker kalıntısı içeren glikosilseramidlerin perbenzoil türevlerinin ayrılması için heksan içinde% 1’den% 23’e kadar dioksan artan bir gradyan önerilmişken, gangliosidlerin perbenzoil türevleri için heksan içinde% 7’den% 31’e kadar bir dioksan artan bir gradyan önerilmiştir ve altıdan fazla şeker kalıntısı içeren glikosilseramidler yer alır.

Bu türevlerin kantitasyonu, yaklaşık 10 pmol’luk bir alt tespit limiti veren 230 nm’de UV tespitini kullandı. Heksan içinde etil asetat kullanılan perbenzoil türevlerinin ayrıştırılması için kullanılan alternatif bir mobil faz, ya izokratik olarak ya da hekzan içinde% 2’den% 17’ye kadar etil asetattan artan bir gradyan olarak yer alır.

Bu kromatografik sistem, nötr mono-, di-, tri- ve tetraglikosilseramidlerin perbenzoil türevlerini çözdü. Etil asetatın UV opaklığı, 230 nm’de izlemeyi imkansız kıldı ve bu nedenle, tespit duyarlılığında yaklaşık 70 pmol’luk bir alt sınıra sonuç olarak bir azalma ile 280 nm kullanıldı.

Yukarıda tarif edilen prosedürlerde yapılan modifikasyonlar, NFA-glikosilseramid ve NFA-galaktosilseramidin perbenzoatlanmış türevlerinin ayrıştırılması için mobil bir siklopentan-2-propanol fazına sahip bir Micropak NH, -10 kolonunun kullanılması olmuştur.

Nötr glikosilseramidlerin 0-asetil-Np-nitrobenzoil türevlerinin, heksan-diklorometan (2: 1) ve UV içinde 1-58 2-propanol mobil faz gradyan sistemi ile kombinasyon halinde bir silika sabit faz üzerinde müteakip kromatografi ile oluşturulması 254 nm’de tespit bildirilmiştir.

Murin miyelom hücrelerinden ve T-lenfositlerinden türetilen nötr glikosfingolipidler ayrılmış ve kloroform içinde değişen oranlarda metanol ve su içeren mobil fazlar kullanılarak bir silika sabit faz ve bir gradyan sistemi kullanılarak önceden türevlendirme yapılmadan saptanmıştır.

Hem 230 nm’de UV tespiti hem de elüsyon zirvelerinin radyoaktif tespiti niceleme için kullanıldı. Açıkça, türetme prosedüründen vazgeçmek, genel analiz hızını hızlandırır, ancak bu, saptamanın duyarlılığından bir miktar fedakarlık edilerek yapılır.

Gözenekli silika jel boncuklarının sabit fazına sahip düşük basınçlı HPLC, heksan ve su oranlarının değiştirildiği hareketli fazlı 2-propanol-heksan-su gradyan sistemi kullanılarak nötr glikosfingolipidlerin ayrıştırılması için kullanılmıştır. 

Glikozil seramid içeren kremler
Glikozil seramid nedir
Glikosil Seramidler
Seramid ve Hyalüronik asit
Seramid Nedir tip
Seramid içeren temizleyiciler
Seramid Nedir
Humay seramid Cilt Bakım Kremi

Gangliositler

Gangliositler, bir veya daha fazla sialik asit grubu içeren kompleks seramid poliheksositlerdir. Gangliositlerin HPLC ile ayrıştırılması ve kantitasyonu için en hassas HPLC tekniği, silika üzerinde müteakip normal faz kromatografisi ile perbenzoil ganghosidler oluşturmak için kolon öncesi türevlendirmeyi kullanır.

Bu ayırmalardaki mobil fazlar, heksan içinde 7-238 dioksanın lineer gradyanlarını kullandı ve ana monosialogangliosidler GM1, GM2, GM3, GM4 ve ayrıca polisialogangliosidesGD3, GDlA ve GDlB’nin çözünürlüğünü sağladı.

Bununla birlikte, glikosfingolipidlerin perbenzoil türevlerinin hem sialik asit kalıntıları ile hem de sialik asit kalıntıları olmadan ayrılmasının aynı kromatografik koşullar altında gösterildiğine dikkat edilmelidir. Bu ayrımların her biri, 230 nm’de UV saptaması kullandı ve 50 pmol’luk bir alt saptama limiti bildirildi.

Türetilmemiş gangliosidlerin çözümlenmesi ve saptanması için bir HPLC sistemi, 0.01 M nihai HCl konsantrasyonu ile bir mobil kloroform-metanol-HC1 fazı ile bir silika sabit faz kullanılarak rapor edilmiştir.

Bu sistem GM3, GM2, GM1, GDla, GDlb ve GT1’i çözmeyi başardı ve elüsyon zirvelerinin kantitasyonu için alev iyonizasyon detektörlü hareketli bir tel sistemi kullandı. Algılamanın doğrusallığı 2-200 pg aralığında bildirilmiştir.

Türevlendirmeye dayanmayan alternatif bir sistem, mono-, di- ve tri sialogangliosidlerin ayrılması için bir silika sabit faz ile 2-propanol-hekzan-suyun doğrusal bir gradyanını kullanmıştır. Fraksiyon toplama ve ardından n tabakası kromatografik analizi kullanılan elüsyon bileşenlerinin kantitasyonuna geçilir.

Ters faz kromatografisi, çeşitli kloroform, metanol ve su karışımlarından oluşan bir mobil faz gradyanı ile bir ODS durağan faz kullanılarak ganghositlerin ayrılması için kullanılmıştır.

Daha yakın zamanlarda, hareketli bir metanol-su fazı ile bir ODS durağan fazı üzerinde müteakip gradyan kromatografisini kullanan, beyin gangliyonlarının p-nitrobenziloksiamin türevlerinin hazırlanması için bir prosedür açıklanmıştır.

Kolondan ayrıştırılan zirveler 254 nm’de tespit edildi, ancak 525 nm’de flüoresansın izlenmesiyle 100 ng’den daha az gangliosid miktarının elde edilebileceği öne sürüldü.

Asilgliseroller

Bu sınıftaki bileşikler, gliserol molekülünün hidroksil gruplarının sırasıyla bir, iki veya üç yağ asidi molekülüne esterlendiği mono-, di- ve tri-asilgliserollerdir.

Ayrı ayrı açilgliserol türlerinin ayrıştırılması için kullanılan en popüler kromatografik teknik, sulu olmayan ters faz sistemleri üzerinde son zamanlarda yapılan bazı çalışmalarla birlikte geleneksel ters fazlı kromatografi olmuştur.

Diğer lipit bileşenlerinden mono-, di- ve tri-açilgliserollerin çözünürlüğü, silika bazlı durağan fazlar kullanılarak normal faz kromatografisi ile elde edilmiştir ve başlangıçta bu ayrımları dikkate alacağız.

Karmaşık bir nötr lipid karışımının ayrılması için sabit bir faz olarak silikanın çok yönlü kullanımının iyi bir örneği  gösterilmektedir, burada açilgliserol türlerinin her biri sterollerden, sterol esterlerden, triterpen esterlerden ve serbest yağ asitleri vardır.

Ayırmada kullanılan mobil faz, başlangıçta toluen-heksan (1: 1) ve son olarak toluen-etil asetat (3: 1) artı% 1.2 formik asit olan bir gradyan sistemiydi.

The post Glikosilseramidler – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).